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结肠癌组织中 Ku70和 Sp1的表达变化及其意义
目的：探讨Ku70和Sp1在结肠癌组织中的表达变化及其意义。方法选取2013年8月至2015年7月经病理检查确诊为结肠癌的患者79例，比较高、中、低分化结肠癌中Ku70蛋白和Sp1蛋白阳性表达率以及 Ku70mRNA 和 Sp1mRNA 相对表达量与癌旁组织的差异；统计分析用SPSS13．0软件进行，Ku70mRNA与Sp1mRNA相对表达量用均数±标准差表示， t检验进行两组比较；Ku70蛋白和Sp1蛋白阳性表达率用百分率（％）表示，χ2检验进行比较；Spearman相关和Pearson直线相关分别用于Ku70mRNA与Sp1mRNA相对表达量和Ku70蛋白和Sp1蛋白阳性表达率相关性分析；P＜0．05表示差异具有统计学意义。结果高、中、低分化结肠癌组织中Ku70阳性表达率分别为47．37％、61．54％、79．41％； Sp1蛋白阳性表达率分别为52．63％、76．92％、85．29％；结肠癌组织中Ku70、Sp1蛋白阳性表达率及mRNA水平均高于癌旁组织（χ2＝29．792、50．009；P＜0．001）；低分化结肠癌的Ku70、Sp1蛋白阳性表达率及mRNA水平显著的高于高分化结肠癌（ F＝29．084、39．167；P＜0．001）差异均有统计学意义；经过Spearman相关分析发现，Ku70蛋白与Sp1蛋白阳性表达率呈正相关，且差异具有统计学意义（ r ＝0．307， P ＝0．006）。经过 Pearson 相关分析发现， Ku70mRNA相对表达量与Sp1mRNA相对表达量呈正相关，且差异具有统计学意义（ r＝0．458， P＜0．001）。结论结肠癌组织中Ku70和Sp1蛋白阳性表达率高于正常组织，且Ku70蛋白与Sp1蛋白阳性表达率以及Ku70mRNA与Sp1mRNA相对表达量呈正相关。
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结肠癌组织中Ku70、转录因子Sp1的表达变化及意义
目的：观察Ku70和特异性蛋白1（Sp1）在结肠癌组织中的表达变化，并探讨其意义。方法分别采用免疫组化SP法、RT-PCR法对结肠癌及对应癌旁正常组织中的Ku70和Sp1蛋白及mRNA进行检测，并分析二者间的相关性及与结肠癌临床病理参数的关系。结果结肠癌癌组织与癌旁正常组织中Ku70阳性表达率分别为68．9％（42/61）、36．1％（22/61），二者比较，P＜0．05；Sp1阳性表达率分别为78．7％（48/61）、26．2％（16/61），二者比较，P＜0．05。结肠癌和癌旁正常组织中Ku70 mRNA相对表达量分别为1．184±0．410、0．845±0．424，二者比较，P＜0．05；Sp1 mRNA相对表达量分别为1．280±0．311、0．912±0．362，二者比较，P＜0．05。 Ku70 mRNA和Sp1 mRNA在结肠癌组织中表达呈正相关（r＝0．398，P＝0．029）。 Ku70和Sp1蛋白表达水平与结肠癌肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关（P均＜0．05）。结论 Ku70和Sp1在结肠癌中高表达，与结肠癌的侵袭、转移有关，二者可作为结肠癌发生、发展的预测指标。
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miR-155靶向调控SP1、E2F2 mRNA转录水平的功能验证
目的：观察微小RNA155（miR-155）对端粒酶逆转录酶（hTERT）调控相关蛋白特异性蛋白1（SP1）及转录因子E2F2重组质粒表达的影响，为进一步研究miR-155调控肿瘤细胞hTERT表达的机制提供实验基础。方法采用生物信息学预测软件TargetScan和Miranda预测SP1和E2F2 mRNA 3′-UTR是否是人miR-155的作用靶点。针对SP1和E2F2 mRNA 3′-UTR设计互补的两条寡核苷酸，包括目标序列（即SP1、E2F2野生型序列）及突变序列（SP1-mu、E2F2-mu），构建SP1和E2F2 mRNA 3′-UTR报告基因载体pMIR-SP1、pMIR-E2F2、pMIR-SP1-mu和pMIR-E2F2-mu。培养HEK-293细胞，采用脂质体法将SP1和E2F2的野生型和突变型pMIR-Luc质粒共转染HEK-293细胞24 h。将细胞分为SP1空白对照组、SP1目标序列组、SP1突变序列组、E2F2空白对照组、E2F2目标序列组、E2F2突变序列组，均加入0．2μg重组质粒、0．01μg对照质粒和0．375μL寡核苷酸，培养24 h。采用双荧光素酶报告基因系统检测双荧光素酶活性，以萤火虫荧光素酶活性值（F）／海肾荧光素酶活性值（R）比值评价miR-155与SP1及E2F2 mRNA 3′-UTR结合效果。结果在线预测结果示，SP1 mRNA 3′-UTR和E2F2 mRNA 3′-UTR均有与miR-155完全互补配对的序列，确定二者均为miR-155的靶基因。经鉴定，SP1和E2F2报告基因重组质粒构建成功。SP1目标序列组F／R低于SP1空白对照组及SP1突变序列组（P均＜0．05），E2F2目标序列组F／R低于E2F2空白对照组及E2F2突变序列组（P均＜0．05）。结论成功构建了SP1和E2F2报告基因重组质粒，证实miR-155能够靶向结合SP1和E2F2 mRNA 3′-UTR，在转录后水平抑制SP1和E2F2的表达。
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白藜芦醇对糖尿病大鼠视网膜Muller细胞凋亡的防护作用及分子机制研究
目的 视网膜Muller细胞凋亡发生在糖尿病视网膜病变(DR)早期,探讨自藜芦醇在DR早期Muller凋亡中的重要意义.方法 5、10 mg· kg-1·d-1白藜芦醇喂养健康和糖尿病大鼠1～7个月后取材,使用TUNEL检测Muller细胞凋亡,免疫荧光检测转录因子特异蛋白1(SP1)细胞定位,qRT-PCR检测miR-29b和SP1基因表达,Western blot检测SP1蛋白表达.结果 糖尿病1、3、5和7个月大鼠视网膜中均检测到TUNEL阳性细胞,白藜芦醇干预能有效抑制糖尿病引起的大鼠视网膜内核层(INL) Muller细胞凋亡(P＜0.01).与年龄相匹配的健康对照大鼠相比,糖尿病大鼠视网膜中miR-29b的表达显著降低,SP1表达显著增高(P＜0.01),糖尿病引起的miR-29b表达下调和SP1表达上调均能被白藜芦醇干预抑制(P＜0.05).结论 白藜芦醇是一个潜在的治疗DR的选择,miR-29b/SP1信号通路在白藜芦醇的抗凋亡机制中起重要作用.
