首页 > 文献资料
-
缺血预处理对大鼠减体积肝移植后Ref-1蛋白表达的影响
目的 观察缺血预处理(ischemia preconditioning,IPC)对大鼠减体积肝移植术后氧化还原因子-1(redox factor-1,Ref-1)蛋白表达的影响,以探讨IPC对减体积肝移植损伤的保护作用及其机制.方法 将100只Lewis成年雄性大鼠随机分成三组:IPC移植组(IPC组)、50%减体积肝移植组(PLT组)和假手术组(SO组),分别于移植后0.5 h、2 h、6 h和24 h取材,通过Western blot法和免疫组织化学技术结合图像分析定量检测移植后各时间点Ref-1表达变化,同时结合血清学和组织病理学分析Ref-1表达变化的意义.结果 术后PLT组各时间点血清ALT值分别为(595.06±08.78)U/L;(723.18±117.24)U/L;(1186.65±142.31)U/L;(1498.91±126.79)U/L;IPC组术后各时间点血清ALT值分别为(459.06±84.73)U/L;(587.71±95.23)U/L;(799.61±125.97)U/L;(659.27±135.68)U/L.与PLT组相比,IPC组术后6 h和24 h血清ALT值明显降低(t=4.553,P＜0.05;t=10.110,P＜0.01).病理学分析显示,PLT组术后24 h门静脉周围大量炎细胞浸润,肝窦扩张明显,肝组织损伤较重;而IPC组则损伤较轻.与PLT组相比,IPC组于减体积肝移植术后24 h肝实质细胞中Ref-1蛋白表达明显增高.结论 缺血预处理可以减轻减体积肝移植后早期冈嗨鹕?促进肝组织Ref-1蛋白表达,提示缺血预处理保护减体积肝移植物早期损伤的机制可能与促进Ref-1蛋白的表达有关.
-
氧化还原因子1促进乳鼠心肌成纤维细胞增殖
目的:研究氧化还原因子1(redox factor 1,REFI)对乳鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其可能的机制.方法:为证实REF1在乳鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成中的作用,构建重组Ref1野生型和突变型的腺病毒载体,感染乳鼠心肌成纤维细胞.通过RT-PCR和Western印迹检测Ref1以及与胶原合成相关的基因表达的改变,通过免疫荧光检测REF1核转位,利用MTT和流式细胞仪分析细胞增殖和细胞周期,用电泳迁移率实验(electrophoretie mobillty shift assay,EMSA)检测REF1对转录因子活化蛋白1(activator protein 1,AP1)的DNA结合能力的影响.利用含25 mmol/L的葡萄糖培养基模拟高糖环境,观察对乳鼠心肌成纤维细胞增殖及REF1表达与活性的影响.结果:MTT比色法显示,感染野生型Rdf1重组腺病毒的细胞在490 nm处的光密度值明显高于对照病毒组(0.671±0.044vs0.364±0.007,n=6,P<0.01).流式细胞仪对细胞周期的分析表明,野生型Rdf1能明显增加S期细胞的百分率(16.8%±0.62%vs9.04%±0.43%,n=3,P<0.05).RT-PCR检测发现,野生型Rdf1促进细胞Ⅰ型胶原(collagen Ⅰ,Col Ⅰ)和Ⅲ型胶原(collagen Ⅲ,ColⅢ)mRNA表达增多,但突变型Rdf1对细胞的增殖和胶原的合成均没有明显影响.EMSA实验结果显示,感染野生型Ref1重组腺病毒的细胞AP1的DNA结合能力增强.高糖培养基培养乳鼠心肌成纤维细胞同样能增强AP1的DNA结合能力.高糖培养虽然对Rdf1的表达水平没有影响,但增强了细胞中REF1的核转位,促进了细胞的增殖.结论:REF1促进乳鼠心肌成纤维细胞的增殖和胶原合成,其机制町能是通过上调AP1的DNA结合能力.
-
脑出血对大鼠不同部位脑组织中Ref-1表达的影响
目的观察正常大鼠脑组织中氧化还原因子1(Ref-1)的表达状况; 探讨脑出血对大鼠某一时间点(48 h)不同部位脑组织中Ref-1表达的影响规律.方法用立体定向技术制备大鼠脑出血模型, 将动物随机分为正常对照组、假手术对照组和出血模型组(ICH). 根据实验要求的时间点断头取脑,并制成石蜡脑片,连续切片做HE染色和(或)Ref-1免疫组化染色.结果①脑细胞内可见点状或片状Ref-1表达阳性的棕黄色颗粒存在,表达的部位主要在细胞核.②假手术对照组不同部位脑组织中,海马区Ref-1表达显著 (P＜0.01).③与假手术对照组的相同部位脑组织中Ref-1表达状况比较,脑出血对右侧尾状核区(血肿周围)脑组织的影响显著(P＜0.01),其次是血肿侧海马区 (P＜0.05).结论大鼠脑组织Ref-1阳性表达主要是在神经元细胞核内; Ref-1表达在正常对照组和假手术对照组脑组织的不同部位表达是相异的,相对海马区表达更明显; 脑出血对大鼠某一时间点 (48 h) 不同部位脑组织中Ref-1表达下降程度的影响是不相同,与血肿远近有关.
-
氧化还原因子1与转录因子的关系及抗脑细胞凋亡作用
急性脑血管病(acute cerebral vascular disease,ACVD)中,不论是脑缺血还是脑出血,病灶以及周围脑组织均出现缺血缺氧,造成缺血半暗带的改变[1],导致大量活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)如:超氧阴离子、过氧化氢、氢氧根等阴离子自由基等集聚于受损的脑组织中[2],引起DNA的氧化性损伤.而脱嘌呤/脱嘧啶核内切酶1/氧化还原因子1(Ape1/Ref-1)作为DNA碱基切除修复途径中的一种重要的多功能蛋白酶[3],DNA的氧化损伤依赖这种酶的修复作用.
