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针对gp41靶位的HIV融合抑制剂的研究进展
HIV感染导致人体防御机能的缺陷,即艾滋病(AIDS).目前,全球已有约6500万HIV感染者.由于缺乏有效的抗病毒药物,约有2500万感染者在发病后难逃死亡的厄运,因此AIDS又被称为“世纪癌症”.为了战胜AIDS,各国科学家正在研制多种抗病毒药物.已用于临床的反转录酶及蛋白酶抑制剂联合的高效抗反转录病毒疗法(HAART),对控制AIDS的传播起到了显著的作用,但由于其长期用药产生的不良反应及HIV变异导致耐药问题日益突出,针对HIV进入细胞的抑制剂,特别是HIV-1融合抑制剂是目前研究的热点.
关键词： HIV HIV融合抑制剂 HIV包膜蛋白质gp41 -
新型HIV-1gp41融合抑制剂CP32M的构效关系研究
目的 研究新型融合多肽CP32M中VEWNEMT序列的长短、残基的极性及其他部位残基的极性对其抑制gp41融合活性的影响.方法 在多肽CP32M的基础上,通过对前7个氨基酸序列进行截取、部分替换、全部替换及改变其他位置氨基酸残基的极性设计合成系列多肽,测定多肽抑制HIV-1融合活性.应用圆二色谱、分子排阻色谱测定多肽与N36的结合功能.结果 截取、替换氨基酸后的肽抑制gp41融合的活性都不同程度降低,与N36结合形成六束螺旋的能力减弱.在CP32M中部及C端I与I+4位置引入Lys增加Glu-Lys离子对作用后,肽活性降低.用C34的C端氨基酸序列NEKDLLE及可与gp120结合的序列RINNIPWSEAM置换QIWNNMT后,多肽仍有很高活性.结论 片段VEWNEMT是关键片段,其中VE及MT是关键功能氨基酸.其他片段替代该片段后仍有较强活性,也与N36形成螺旋结构,提示该片段含有共性结合区.
关键词： HIV-1 HIV包膜蛋白质gp41 多肽 CP32M 构效关系 -
HIV-1 p24和gp41融合基因表达载体的构建及融合蛋白的表达纯化
目的用基因重组技术将HIV-1 p24基因以及gp41基因具有抗原线性中和表位的部分重组连接,构建重组质粒,并在大肠埃希菌中高效表达融合蛋白.方法设计带有酶切位点的引物,分别PCR扩增p24和gp41两个基因,将它们分别连接到pMD18-T载体中,测序验证后,挑选出含有目的基因的正确克隆.将p24片段酶切后连接到gp41基因所在的pMD18-T载体中,再将连接后的两个基因酶切,重新连接到pET21a表达载体中.将表达载体转染大肠埃希菌诱导表达,经Western-blot验证表达正确.结果融合蛋白p24-gp41在大肠埃希菌中高效表达.结论融合蛋白p24-gp41可以在pET21a表达载体中高效表达.
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抗HIV-1 gp41单克隆抗体的制备及意义
目的 为HIV-1感染的检测和研究提供依据.方法 以基因工程重组抗原HIV-1 gp41蛋白免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法制备抗gp41蛋白的单克隆抗体(mAb),用ELISA法鉴定所得mAb的Ig亚类、效价及特异性.单抗经饱和硫酸铵(SAS)纯化和HRP标记后,利用双抗体夹心ELISA筛选检测gp41蛋白的佳配伍单抗,分别包被ELISA板及作为酶标mAb,建立双mAb夹心ELISA法.结果 经细胞融合、筛选、克隆化,获得了12株可分泌高效价mAb的杂交瘤细胞.纯化的腹水mAb经配对试验,选出2株mAb:7D4和9G2-HRP建立了双mAb夹心ELISA法,检测HIV-1 gp41抗原的灵敏度是1 μg/L.结论 获得12株效价高的抗HIV-1 gp41的mAb,建立了特异性强、灵敏度较高的检测HIV-1 gp41抗原的双抗体夹心ELISA法.
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HIV-1 GP41第二优势表位簇在大肠杆菌中的高效表达
①目的构建HIV-1 SF2株跨膜蛋白GP41第二优势表位簇基因的原核高效表达克隆,探讨提高原核表达的途径.②方法根据密码子的兼并性,利用PCR-定点突变技术扩增、改造目的基因片段,将其与原核表达载体pGEX4T-2经EcoRI和SalI双酶切、连接,重组质粒pGEX4T-2/SE转化表达宿主菌DH5α,经IPTG诱导表达出目的融合蛋白,经SDS-PAGE与Western-Blot鉴定.③结果获得了高效表达HIV-1 GP41第二优势表位谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白的重组菌;Western-Blot鉴定表明,重组蛋白具有良好的抗原性和特异性.④结论在原核表达体系中可以高效表达HIV-1 GP41第二优势表位簇.
关键词： HIV包膜蛋白质gp41 基因表达 免疫优势表位 病毒融合蛋白质类
