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凝血酶引起人支气管上皮细胞内活性氧及血小板源生长因子-AB分泌的改变
目的 探讨凝血酶对永生化人支气管上皮细胞(BEP2D细胞)内活性氧产生及血小板源生长因子-AB(PDGF-AB)分泌的影响.方法 不同浓度凝血酶刺激指数生长期的BEP2D细胞,通过检测氧化型氢化乙啶及二氯荧光素荧光强度测定活性氧簇含量变化.采用双抗体夹心ELISA法检测BEP2D细胞分泌PDGF-AB的变化.结果 随着凝血酶浓度增加,反应体系中活性氧明显升高,且有明显的剂量反应关系.凝血酶处理组BEP2D细胞上清液中PDGF-AB含量较对照组上清液显著升高[(770.33+24.29)ng/L vs(117.42±10.85)ng/L,P<0.01].凝血酶在一定范围内有剂量反应关系.10 U/ml凝血酶刺激48 h后BEP2D细胞分泌PDGF-AB量大[(817.63+22.53)ng/L].结论 凝血酶既可以引起细胞内氧化应激导致基因毒性,又可以通过刺激BEP2D细胞分泌PDGF-AB发挥自分泌及旁分泌作用.
关键词： 凝血酶 永生化人支气管上皮细胞 活性氧簇 血小板源生长因子-AB -
BEP2D细胞恶性转化不同时期差异表达基因的筛选
目的筛选并鉴定α粒子辐射诱发永生化人支气管上皮细胞(BEP2D)恶性转化不同时期差异表达的基因.方法抑制消减杂交(SSH),cDNA芯片.结果利用SSH构建了BEP2D细胞3个恶性转化不同时期差异表达基因的文库,BEP2D细胞的文库有416个克隆,R15H20细胞的文库有301个克隆,R15H35细胞的文库有586个克隆,经cDNA Microarray验证发现:BEP2D细胞文库来源的芯片与3代细胞探针杂交后的阳性信号率为90.4%、21.6%和19.7%;R15H20细胞文库来源的芯片的阳性信号率为8.6%、93.8%和31.6%:R15H35细胞文库来源的芯片的阳性信号率为23.5%、18.2%和90.7%.结论联合应用SSH和cDNA Microarray是筛选和鉴定不同样本中差异表达基因的快速和有效方法;经 cDNA Microarray鉴定出的 3个文库中差异表达的cDNA可能代表了α粒子诱发人支气管上皮细胞恶性转化相关的基因.
关键词： α粒子 抑制消减杂交 cDNA芯片 永生化人支气管上皮细胞 -
信号传导及转录激活子3通路参与卷烟烟气凝集物诱导永生化人支气管上皮细胞的恶性转化
目的：检测肺鳞癌组织、鳞状细胞不典型增生组织和癌旁组织中磷酸化信号传导及转录激活子3（pSTAT3）蛋白的表达，比较其表达与吸烟的关系；探讨STAT3通路在烟草诱导细胞恶性转化过程中的作用。方法免疫组化法检测288例肺鳞癌组织、108例鳞状细胞不典型增生组织、112例癌旁组织中pSTAT3蛋白的表达，比较其表达与吸烟的相关性。构建卷烟烟气凝集物（CSC）诱导第10，20，30，40，50，60及70代细胞（P10，P20，P30，P40，P50，P60及P70）永生化人支气管上皮细胞（BEP2D）恶性转化模型。从血清抗性及锚着独立性等方面对CSC诱导各代BEP2D细胞的恶性转化特征进行鉴定。Western蛋白印迹法检测CSC诱导各代BEP2D细胞中pSTAT3的表达。MTT法和流式细胞术分别检测JSI-1240.25~10μmol·L-1对P70细胞存活及凋亡的影响。JSI-124处理CSC诱导P7024 h后检测存活蛋白表达的变化。结果 pSTAT3蛋白在肺鳞癌组织中表达高于鳞状细胞不典型增生和癌旁组织（P<0.05）；pSTAT3在目前吸烟者中的表达均高于曾经吸烟者和从不吸烟者（P<0.05），且随着吸烟指数增加两者表达水平逐渐升高（P<0.01）。随着转化代数的增高，细胞血清抗性增加，锚着独立性增强，P30细胞以后尤为明显。pSTAT3在正常对照组和乙醇对照组中弱表达，且两者之间无显著性差异；CSC诱导的各组BEP2D细胞中，pSTAT3的表达均显著高于正常对照组和乙醇对照组（P<0.05），并随细胞代数的增高而增高。JSI-124抑制P70细胞增殖、促进P70细胞凋亡呈浓度及时间依赖性。JSI-1241μmol·L-1作用P70细胞24 h后，存活蛋白表达显著降低（P<0.05）。结论 STAT3信号通过调控存活蛋白表达抑制细胞凋亡，参与烟草诱导永生化人支气管上皮细胞的恶性转化。
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凝血酶引起人支气管上皮细胞内活性氧及血小板源生长因子-AB分泌的改变
目的 探讨凝血酶对永生化人支气管上皮细胞(BEP2D细胞)内活性氧产生及血小板源生长因子-AB(PDGF-AB)分泌的影响.方法 不同浓度凝血酶刺激指数生长期的BEP2D细胞,通过检测氧化型氢化乙啶及二氯荧光素荧光强度测定活性氧簇含量变化.采用双抗体夹心ELISA法检测BEP2D细胞分泌PDGF-AB的变化.结果 随着凝血酶浓度增加,反应体系中活性氧明显升高,且有明显的剂量反应关系.凝血酶处理组BEP2D细胞上清液中PDGF-AB含量较对照组上清液显著升高[(770.33+24.29)ng/L vs(117.42±10.85)ng/L,P＜0.01].凝血酶在一定范围内有剂量反应关系.10 U/ml凝血酶刺激48 h后BEP2D细胞分泌PDGF-AB量大[(817.63+22.53)ng/L].结论 凝血酶既可以引起细胞内氧化应激导致基因毒性,又可以通过刺激BEP2D细胞分泌PDGF-AB发挥自分泌及旁分泌作用.
关键词： 凝血酶 永生化人支气管上皮细胞 活性氧簇 血小板源生长因子-AB -
烟草悬凝物对人支气管上皮细胞急性毒性损伤的研究
目的 通过研究烟草悬凝物(CSC)对人支气管上皮细胞(BEP-2D cells)急性毒性损伤生物学作用,探讨烟草烟气在人支气管上皮细胞损伤过程中的机制,为呼吸道疾病的防治措施提供实验依据.方法 收集某品牌香烟烟气并溶解于LHC-8培养液制备成CSC;采用永生化的人支气管上皮细胞,分为对照组(BEP-2D cells)和实验组(BEP-2DCSC cells).观察烟草悬凝物染毒后的细胞存活率、膜通透性损伤、细胞凋亡率和次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶基因(HPRT gene)突变率.结果 在急性毒性生损伤过程中,随着CSC浓度的逐渐增加:细胞存活率逐步下降、细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)逐渐且明显增多、细胞的早期和晚期凋亡率均增大、HPRT基因突变率逐渐增大,均与染毒剂量具有明显量-效关系.结论 CSC作为一种复杂的香烟烟气混合物具有较为典型的急性细胞毒性作用,其机制可能与细胞膜通透性增加、细胞凋亡及HPRT基因突变有关.
关键词： 烟草悬凝物 永生化人支气管上皮细胞 急性毒性损伤 -
烟草悬凝物诱导永生化人支气管上皮细胞恶性转化过程中survivin基因及蛋白表达的研究
目的:探讨人支气管上皮细胞(BEP-2D)恶性转化过程中survivin基因及蛋白表达的变化.方法:选取正常BEP-2D细胞及经烟草悬凝物处理后的第15代(P-15)、25代(P-25)、38代(P-38)BEP-2D细胞共4组细胞株作为研究对象,采用半定量反转录PCR(Retro-translation PCR,RT-PCR)检测各组细胞株中survivin基因变化,免疫组织化检测各组中survivin蛋白的表达.结果:1.survivin mRNA在正常细胞BEP-2D中的表达强度为0.08,在转化的肺癌细胞P-15、P-25和P-38中分别为0.56、0.80和0.81.2.survivin蛋白在正常BEP-2D细胞株中表达阴性,在转化的3组细胞中表达阳性,且survivin蛋白在正常细胞与转化细胞株中的表达存在明显差异,其中在P-15具有明显差异(P＜0.05).结论:survivin基因及蛋白的表达水平可作为早期肺癌的一个检测指标.
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生存素和增殖细胞核抗原在个旧矿粉诱导的肺癌细胞中的表达
背景与目的 云南个旧为矿工职业性肺癌的高发区,既往本课题小组以永生化人支气管上皮细胞(immortalized human bronchial epithelial cells,BEAS-2B)为靶细胞,以采自井下作业面的个旧矿粉为染毒物,成功建立了个旧矿粉体外诱导的恶性转化细胞模型.本研究旨在探讨生存素(survivin)和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在个旧矿粉诱导BEAS-2B恶性转化为肺癌细胞过程中发挥的作用.方法 采用免疫荧光细胞化学和免疫组织化学技术检测survivin和PCNA在BEAS-2B及其恶性转化肺癌细胞中的表达.结果 ①免疫荧光细胞化学:survivin蛋白在BEAS-2B中无表达,在其恶性转化肺癌细胞中表达阳性;PCNA蛋白在BEAS-2B中低表达,在其恶性转化肺癌细胞中高表达.②免疫组织化学:survivin蛋白在BEAS-2B中无表达,显著低于在其恶性转化肺癌细胞中的表达率(85%,17/20)(P＜0.001);PCNA蛋白在BEAS-2B中的标记指数(labelling index,LI)显著低于其恶性转化肺癌细胞(P＜0.001);survivin表达阳性的恶性转化肺癌细胞中PCNA的LI明显高于survivin表达阴性者(P＜0.001).结论 ①survivin在恶性转化肺癌细胞中表达上调,提示其可能在个旧矿粉诱导BEAS-2B恶性转化为肺癌细胞的过程中发挥重要作用,为揭示个旧矿工肺癌的致癌机制提供依据,其有可能作为个旧矿工肺癌的检测和治疗的新靶点.②PCNA在恶性转化肺癌细胞中表达上调,提示细胞增殖过程可能在该恶性转化过程中发挥重要作用.③survivin可能通过PCNA的介导促进细胞的增殖,二者可能在该恶性转化过程中发挥协同作用.
关键词： 生存素 增殖细胞核抗原 肺肿瘤 个旧矿粉 永生化人支气管上皮细胞 -
凝血酶转化人支气管上皮细胞形态学改变研究
目的:探讨凝血酶转化永生化人支气管上皮细胞(BEP2D细胞)形态学改变.方法:选择典型Giemsa染色的细胞克隆图片,应用四川大学设计的MIAS-300型图像分析系统,随机选取视野内形态完整的细胞和细胞核进行测定.结果:发生恶性转化的细胞克隆细胞形态发生变化,与非转化型细胞克隆的细胞形态比较,细胞及细胞核面积、周长、大直径、小直径、等效直径及形状因子、异形指数、细胞核与细胞浆之比之间均有显著性差异.结论:凝血酶转化永生化人支气管上皮细胞具有恶性细胞表型.
关键词： 凝血酶 恶性转化 永生化人支气管上皮细胞 细胞形态学 -
云锡矿粉诱导永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B恶性转化
背景与目的:研究云锡矿粉对人支气管上皮细胞的致癌转化效应,以探讨云锡矿工肺癌病因及其机制.材料与方法:采用永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B细胞,设200μg/ml及50 μg/ml剂量的2个氧化矿染毒组和1个溶剂对照组,细胞染毒72 h后,隔代染毒直至第9代.系统观察转化过程中细胞的生物学特性及血清抗性、锚着独立性生长能力等转化表型特征.结果:第20代时各组细胞均未表现出血清抗性,第25代200μg/ml组细胞出现血清抗性和倍增时间增长、染色体畸变率增高;第30代时200 μg/ml组细胞在软琼脂上可形成小的细胞集落,至第40代时,200μg/ml及50 μg/ml剂量组细胞均能在软琼脂上形成克隆.结论:云锡矿粉能体外诱发人支气管上皮细胞恶性转化.
关键词： 永生化人支气管上皮细胞 BEAS-2B 矿粉 恶性转化 -
赛替派诱导人支气管上皮细胞恶性转化过程中不同形态集落来源细胞的研究
背景与目的:研究赛替派转化人支气管上皮细胞株(Human bronchial epithelial cell strain 2B,BEAS-2B)过程中两种不同形态集落来源的细胞株的细胞构成和成瘤性的变化情况.材料与方法:赛替派转化BEAS-2B细胞过程中产生两种形态学上差异明显的集落,对其分离培养,细胞建株,分别命名为BEAS-S(Human bronchial epithelial cell strain S)和BEAS-C(Human bronchial epithelial cell strain C)细胞,连续传代,同时通过特异免疫细胞化学染色了解细胞构成的改变,结合细胞凝集性和锚着独立性的变化进行分析.结果:BEASC细胞随着传代,基底细胞标志物质蛋白34βE12表达增强,同时其细胞凝集性和成瘤性也增强;而BEAS-2B和BEAS-S细胞的细胞构成及成瘤性在传代过程中改变不明显.结论:基底细胞可能是人支气管上皮细胞恶性转化的干细胞,同时两种细胞集落形态的差异性也为人源细胞转化的形态学研究提供参考价值.
关键词： 赛替派 永生化人支气管上皮细胞 恶性转化 形态计量学 免疫细胞化学染色
