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大鼠骨髓间充质干细胞同种异体移植治疗糖尿病的初步研究
目的 观察植入糖尿病大鼠体内的骨髓间充质干细胞(MSCs)能否分化为可分泌胰岛素的细胞或者促进胰岛β细胞增殖.方法 采用贴壁法分离培养来自同种异体大鼠的MSCs,移植前用5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷 (BrdU)标记.将60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组);糖尿病大鼠对照组(DM组);经左心腔注射移植MSCs糖尿病大鼠组(MSCs组);经左心腔注射移植MSCs并行环孢霉素A灌胃的糖尿病大鼠组(MSCs+CsA组).分别于造模前、成摸时和移植细胞后7、14、28天时检测OGTT和体重;每周固定时间测一次随机血糖;处死大鼠前从心脏取血测胰岛素;移植细胞后7、14和28天时,取各组大鼠胰腺组织行增殖细胞核抗原和Brdu免疫组化. 结果 移植MSCs后7天和14天都可在MSCs组和MSCs+CsA组大鼠胰腺的血管内及其周围、胰腺外分泌组织和/或胰岛内发现Brdu阳性细胞.移植MSCs后14天MSCs+CsA组OGTT的2h血糖值较DM组有下降趋势(P=0.069);三组糖尿病大鼠间胰岛素水平和体重无明显差异;移植MSCs未使MSCs和MSCs+CsA组胰岛中增殖细胞明显增多. 结论 通过左心室注入的大鼠MSCs可以迁移到损伤的胰腺组织中,植入的MSCs使糖尿病大鼠的血糖下降不显著,不能证明能分化为可分泌胰岛素的细胞,也未促进胰岛细胞增殖;在胰岛损伤高峰期移植细胞,很难达到治疗的目的.
关键词： 骨髓间充质干细胞 糖尿病 5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷 增殖细胞核抗原 -
促红细胞生成素对新生鼠缺氧缺血性脑损伤后5－溴－2－脱氧尿嘧啶核苷表达的影响
目的：探讨促红细胞生成素（ EPO）对新生鼠缺氧缺血性脑损伤（ HIBD）后海马颗粒下带（SGZ）5－溴－2－脱氧尿嘧啶（BrdU）表达的影响。方法选择7日龄新生Wistar大鼠制备新生鼠HIBD动物模型，按照体重将新生鼠随机分为假手术组、HIBD模型组、EPO实验组（ EPO 5 U? g－1? d－1×14 d）。在术后第14天、第21天、第28天，动态检测海马SGZ区BrdU阳性细胞数。结果海马SGZ区BrdU阳性细胞表达：3组新生大鼠在术后第14至28天，BrdU阳性细胞数随着新生鼠日龄增加而明显减少（ P＜0．01）；在术后第14天、第21天、第28天，3组新生大鼠的海马SGZ区BrdU阳性细胞数以EPO实验组多，其次为HIBD模型组，假手术组少。在术后第21天，假手术组、HIBD模型组、EPO实验组的海马SGZ区BrdU阳性细胞数分别为8．08±1．62，25．71±4．18，32．21±8．63。在术后第14天、第21天，3组间两两比较差异有统计学意义（ P＜0．01）；术后第28天，实验组与模型组比较差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论新生鼠HIBD早期给予EPO干预治疗对新生鼠缺氧缺血性脑损伤可能有神经保护作用。
关键词： 缺氧缺血性脑损伤 促红细胞生成素 5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷 -
促红细胞生成素对缺氧缺血性脑损伤新生Wistar大鼠海马GFAP和BrdU表达的影响
目的 探讨外源性促红细胞生长素(EPO)对新生Wistar大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后海马CA1区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和海马DG区5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)表达的影响.方法 48只7日龄新生Wistar大鼠随机分为HIBD模型组、EPO实验组,另设假手术组24只;通过结扎右侧颈总动脉、并吸入8％O 2加92％N 2低氧混合气体2 h制作HIBD模型;免疫组织化学法检测并比较三组新生鼠制模术后14 d、21 d、28 d海马CA1区GFAP表达、以及DG区BrdU阳性细胞数的变化.结果 术后14 d、21 d,三组新生Wistar大鼠海马CA1区GFAP以及DG区BrdU阳性细胞数的差异均有统计学意义(P<0.01),均以EPO实验组多,HIBD模型组其次,假手术组少;术后28 d,三组间GFAP表达以及DG区BrdU阳性细胞数比较均无统计学意义(P>0.05).各组大鼠不同时间(术后14 d、21 d、28 d)之间比较,CA1区GFAP以及DG区BrdU阳性细胞表达的差异均有统计学意义(P<0.01),均以术后14 d表达多,21 d表达次之,28 d表达少.结论 早期给予外源性EPO治疗可促进新生鼠HIBD后海马CA1区GFAP表达增多,DG区BrdU阳性细胞增加,表明EPO可促进受损神经细胞增殖、再生;EPO在新生鼠缺氧缺血性脑损伤中发挥神经保护作用.
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“综合修复法”在BrdU免疫组化染色中的应用
目的 探讨Brdu免疫组织化学染色的佳修复方法.方法 采用不同的抗原修复方法:酶修复,pH6.0柠檬酸盐缓冲液高压修复或微波修复,pH 9.0 Tris-EDTA高压修复或微波修复,以及0.1％Triton X-100/0.1％柠檬酸钠渗透及胰酶增加细胞膜的通透性、冷0.1mol/L盐酸去除染色体组蛋白、2mol/L盐酸使DNA双链变性、四硼酸钠重建碱性环境的“综合修复法”,对小鼠BrdU标记的嗅上皮组织进行免疫组织化学染色.结果 经“综合修复”后,免疫组化染色敏感性较其他修复方法明显增强,并且准确定位优于其他方法(P＜0.01).结论 在BrdU的免疫组化染色中,“综合修复法”是较理想的抗原修复方法.
关键词： 5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷 抗原修复 免疫组化
