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APC基因MCR区突变与大肠肿瘤患者临床发病的关系
目的:探讨APC基因的第15外显子MCR区(mutation cluster region)的1493, 1367和1328位突变与大肠肿瘤患者(阳性家族史)临床发病的关系.方法:共提取65例标本的基因组DNA, 包括21例肠腺瘤标本组和16例肠腺癌标本组, 20例家族史阳性组和8例无家族史组. PCR特异性扩增APC基因的第15外显子MCR区, 经ABI3100基因测序仪测序, 对密码子突变情况按4个标本分组和基因变异类型进行统计分析.结果:检出APC基因的三种密码子突变, 即密码子1493(ACG>ACA), 突变的发生率为91.3%(63/69), 密码子1367(CAG>TAG),1.4%(1/69)和密码子1328(CAG>TAG)7.2%(5/69). 共检出4种碱基变化, 4478 (G→A), 4478 (G/A), 4096 (C/T)and 3979(C/T). 4478位碱基G→A和4478位碱基G/A分别在腺瘤组与无家族史组的比较有显著性差异( P<0.05),4478位碱基G→A在家族史阳性组与无家族史组的比较也有显著性差异( P<0.05). 基于临床病理突变表型, 四种核苷酸变化间经χ2检验比较发现有显著性差异( P<0.05)的是:4478位→A型突变分别与4478位G/A型突变、4096位C/T型突变和3979位C/T型突变之间, 4478位碱基G/A型突变分别与4096位C/T型突变和3979位C/T型突变之间, 而4096位C/T型突变和3979位C/T型突变比较无显著性意义.结论:密码子1493(ACG>ACA)的4478位(G→A)突变为各组高频发的同义突变,与阳性家族史和腺瘤表型有关. 密码子1367(CAG>TAG)和1328(CAG>TAG)仅为腺癌表型的体细胞无义突变.
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p53、DCC、APC在结直肠癌组织中的表达及其意义
目的 探讨p53、结直肠癌缺失基因(DCC)和腺瘤性息肉病基因(APC)三种抑癌基因在结直肠癌组织中的表达及其意义.方法 采用免疫组织化学方法检测p53、DCC和APC在结直肠癌中的表达.结果 结直肠癌中p53高表达,阳性率为68％；结直肠癌中DCC低表达,阳性率为27％；结直肠癌中APC低表达,阳性率为52％.应用检验的关联性分析,癌组织中的DCC基因的表达与APC基因表达呈正相关关系.结论 DCC的表达降低与APC的表达降低具有协同作用,p53、DCC和APC的多个基因表达的联合检测可能为判断结直肠癌恶性转化、临床病理过程及预后提供参考依据,具有一定的价值.
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微小RNA-106b靶向下调腺瘤性息肉病基因表达促进Hep-2细胞的增殖
目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-106b影响喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株增殖的分子机制.方法 应用噻唑蓝(MTT)法分析miR-106b对Hep-2细胞株增殖的影响;通过实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Western blot技术检测miR-106b各转染组腺瘤性息肉病基因(APC) mRNA和蛋白表达水平;将APC基因3'非翻译区(3'UTR)-荧光素酶表达载体及其突变体与miR-106b共转染至Hep-2细胞,采用双荧光素酶检测系统检测荧光素酶的活性.结果 与miR-106b inhibitor和对照组比较,转染miR-106b-mimics能明显促进Hep-2细胞的增殖;APC蛋白在miR-106b-mimics转染组、对照组和miR-106b inhibitor中的表达水平分别为0.586 ±0.023,0.734 ±0.024和0.927±0.018,3组间差异有统计学意义(P＜0.05);而APC mRNA的表达水平在3组间差异无统计学意义(P＞0.05);在共转染野生型APC基因3'UTR-荧光素酶表达载体的Hep-2细胞中,上述3组荧光素酶的活性分别为4.37±1.04,8.376±1.23和23.75±1.63,3组间差异有统计学意义(P＜0.05);而在共转染突变型APC基因3'UTR-荧光素酶表达载体的Hep-2细胞中,上述3组荧光素酶的活性差异无统计学意义(P＞0.05).结论 在喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株中,miR-106b可结合到APC基因3'UTR,在转录后水平负性调控APC基因的表达,从而促进Hep-2细胞的增殖.
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腺瘤性息肉病基因DNA甲基化在食管癌患者肿瘤组织及血浆中的表达
目的探讨食管鳞癌患者肿瘤组织及外周血游离DNA中腺瘤性息肉病(APC)基因甲基化状态与临床病理特征的关系，以及外周血APC甲基化围手术期的动态变化。方法应用实时定量MSP技术检测76例食管鳞癌患者肿瘤组织、配对的癌旁正常组织以及术前1d、术中及术后7d外周血游离DNA中APC基因的甲基化状态。选取60名年龄性别配对的健康志愿者外周血浆DNA作对照。结果食管鳞癌患者肿瘤组织及外周血游离DNA中APC基因甲基化率分别44.74％(34/76)和42.11％(32/76),明显高于癌旁组织及健康对照组[(6.58％(5/76)和1.67％(1/60)，均P=0.000]。APC基因甲基化率在外周血与肿瘤组织中具有良好的一致性，其ROC曲线Youden指数为0.849(P=0.000)。APC基因甲基化分别与患者病理分期、淋巴结转移、浸润深度及神经脉管浸润有关(P＜0.05)；家族肿瘤史是与外周血游离DNA中APC甲基化有关的独立因素(P＜0.05)。术前、术中、术后血浆中DNA甲基化发生率呈现先升后降的变化趋势。结论食管鳞癌患者外周血游离DNA中APC甲基化率可反映肿瘤进展状态，并随肿瘤实体的摘除而下降。
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miR-182通过靶向抑制腺瘤性息肉病基因(APC)促进宫颈癌细胞增殖
目的 探讨microRNA-182(miR-182)在官颈癌细胞增殖中的作用及其机制.方法 使用脂质体介导的瞬时转染法增加或降低宫颈癌细胞系HeLa和SiHa细胞中miR-182水平,利用CCK-8法和平板克隆形成实验观察miR-182对宫颈癌细胞增殖能力的影响,使用生物信息学预测、实时定量PCR和双荧光素酶报告基因等实验明确miR-182对腺瘤性息肉病基因(APC)的转录后基因表达调控的作用以及对Wnt下游经典信号分子c-Myc和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)水平的影响.结果 过表达miR-182明显促进宫颈癌细胞的增殖,抑制miR-182的表达则显著抑制肿瘤细胞的增殖;过表达miR-182抑制官颈癌细胞中APC的表达,调控miR-182的表达水平影响肿瘤细胞中经典Wnt信号通路下游的表达.结论 miR-182通过抑制APC的表达激活经典Wnt信号通路的活性,提高官颈癌细胞增殖能力.
关键词： 宫颈癌细胞 细胞增殖 微小核糖核酸-182 腺瘤性息肉病基因 Wnt信号通路 -
新疆维吾尔族与汉族直肠癌组织APC基因突变分析
目的:探索APC基因突变与新疆维吾尔族、汉族直肠癌的发生及临床病理之间的关系.方法:采用银染PCR-SSCP法检测新疆地区70例原发性直肠腺癌组织及距肿瘤10 cm以上的正常粘膜组织中APC基因MCR之碱基突变.结果:70例直肠癌组织中APC基因突变38例(54.3%),APC基因在新疆维吾尔族和汉族直肠癌组织中的突变频率较高,分别为53.6%和57.1%,但两民族之间突变率、突变与各临床病理因素之间的差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:新疆地区APC基因MCR突变在民族之间以及和临床病理之间均无相关性.
关键词： 直肠癌 腺瘤性息肉病基因 基因突变 聚合酶链反应-单链构象多肽性 临床病理
