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微流控芯片与常规玻片法在细胞培养和蛋白检测中的比较性研究
近年来,微流控芯片以其多种分析优势被广泛应用于生物医学领域,特别是在细胞及细胞内组分检测方面具有潜在的发展空间[1-2],借助其基本特征和优势,该技术亦可用于肺癌的耐药性研究.研究发现,糖调节蛋白78( GRP78)为细胞内应激蛋白,与肺癌耐药性密切相关[3].目前对其机制的研究主要以常规玻片为平台,该平台难以将细胞培养与蛋白检测集成到同一平片上,检测的便捷性和连续性均不足.
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内质网分子伴侣GRP78在人肺癌组织中的高表达及其临床意义
GRP78,即糖调节蛋白78, 也叫免疫球蛋白重链结合蛋白(BiP),广泛存在于内质网内,在低糖、缺氧等应激条件下合成量明显提高[1],并能协助蛋白质的折叠、装配和运输, 还与许多疾病有关,因此被称为内质网分子伴侣[2].但目前关于GRP78的研究主要集中在动物和标准细胞株的体外实验,特别是它在人类肺癌中的表达,临床研究很少.本研究通过探讨GRP78在54例肺癌患者中的表达来说明其在人类肺癌中的作用.
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益气清热膏通过内质网应激途径保护氨基核苷嘌呤霉素大鼠模型足细胞损伤的机制研究
目的:研究益气清热膏对氨基核苷嘌呤霉素大鼠模型(PAN)蛋白尿水平、足细胞损伤的作用,并从调节内质网应激途径的主要分子伴侣:糖调节蛋白78(glucose regulated protein,GRP78)和GRP94的表达探讨益气清热膏的作用机制.方法:24只雄性Wistar大鼠按随机数字表分为假手术组、PAN模型组、益气清热膏组、蒙诺组,每组各6只.除假手术组予等量生理盐水外,其余各组均采用颈静脉插管注射嘌呤霉素氨基核苷(PA) (40 mg/kg)法制备PAN肾病大鼠模型.分别于造模前(0天)、造模后第9天和第14天检测大鼠24 h尿蛋白定量,第15天处死各组大鼠,取肾组织行电镜检查;Western Blot和实时定量逆转录多聚酶链反应(real time-PCR)法检测大鼠肾组织中GRP78和GRP94表达.结果:(1)与假手术组比较,益气清热膏可以降低造模后第9天和第14天大鼠24 h尿蛋白定量(P＜0.01).(2)超微病理:模型组出现广泛足突融合、消失,足突基底部肿胀,足细胞内线粒体肿胀,内皮窗孔凌乱.益气清热膏可以明显改善大鼠足细胞损伤.(3) real-time PCR 法和Western blot检测肾皮质GRP78和GRP94的表达.模型组GRP78和GRP94的mRNA水平和蛋白水平显著升高,益气清热膏可以显著降低两者mRNA和蛋白表达水平(P＜0.05).结论:益气清热膏可显著降低PAN模型大鼠尿蛋白水平,修复足细胞损伤,其机制可能与益气清热膏降低肾组织GRP78和GRP94表达,从而抑制内质网应激,修复肾组织蛋白质合成有关,具体机制需要进一步研究证实.
关键词： 益气清热膏 氨基核苷嘌呤霉素模型 内质网应激 糖调节蛋白 -
糖调节蛋白Grp78在幽门螺杆菌感染者胃黏膜中的表达及意义
目的:了解葡萄糖调节蛋白Grp78在幽门螺杆菌(HP)感染人胃黏膜组织中的表达情况.方法:应用半定量RT-PCR及Western blotting方法检测人胃黏膜组织中Grp78 mRNA及蛋白的表达.结果:HP未感染组28例,Grp78 mRNA表达为0.8038±0.0500,感染组32例,Grp78 mRNA表达为1.1586±0.0839;未感染组Grp78蛋白表达为0.4345±0.0545,感染组Grp78蛋白表达为0.6204±0.0412.两组相比差异显著(P<0.01).结论:正常胃黏膜组织有Grp78 mRNA的表达及蛋白的合成.HP感染胃黏膜增加Grp78 mRNA的表达及蛋白的合成,这可能有利于胃黏膜的自身保护.
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针刺对海洛因复吸大鼠脑组织GRP78和CRT表达的影响
目的 观察针刺百会、大椎穴对海洛因复吸大鼠脑组织糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)和钙网织蛋白(calreticulin,CRT)的影响,探讨针刺干预海洛因脑损伤的机制.方法 将40只SD雄性大鼠随机分为正常组、依赖组、模型组、针刺组和药物组,每组8只.按重复3次“染毒→戒断”的方法复制海洛因复吸大鼠模型.于实验第46天取各组大鼠海马、中脑腹侧被盖区(ventral tegmental area,VTA)脑组织,分别运用荧光RT-PCR和Western blot法,观察各组大鼠海马和VTA区GRP78和CRT蛋白及其mRNA表达水平.结果 与正常组比较,模型组和依赖组大鼠海马和VTA中CRT、GRP78蛋白及其mRNA表达水平显著降低(P＜0.05);与模型组比较,针刺组大鼠海马和VTA中CRT、GRP78蛋白及其mRNA表达水平显著增高(P＜0.05);针刺组与药物组比较,仅海马CRT mRNA表达水平的差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 针刺干预海洛因脑损伤的机制与其上调海马和VTA中CRT、GRP78的表达水平有关.
