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ASIC3在慢性偏头痛大鼠三叉神经脊束尾核的表达
目的:本文通过检测酸敏感离子通道3(acid sensing ion channel 3,ASIC3)在慢性偏头痛大鼠三叉神经脊束尾核(trigeminal nucleus caudalis,TNC)的表达变化,探讨其在慢性偏头痛发病中的作用及可能机制.方法:将SD雄性大鼠随机分为7组,假手术组(n=18),模型组(n=18),模型+溶剂组(n=5),模型+ASIC3抑制剂5μM组(n=5),模型+ASIC3抑制剂10μM组(n=5),模型+ASIC3激动剂100μM组(n=5),模型+ASIC3激动剂200μM组(n=5).使用Von Frey纤维丝测定大鼠眶周及足底的机械痛阈值,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测ASIC3 mRNA,蛋白质印迹法(Western blotting)检测ASIC3、CGRP蛋白表达,免疫荧光技术检测ASIC3和CGRP在TNC部位的表达和定位情况.结果:(1)硬脑膜反复给予"炎性汤"后,大鼠眶周及足底的机械痛阈值显著降低(P<0.01);(2)与Sham组相比,CM组大鼠ASIC3在TNC的表达明显升高(P<0.05);(3)给予ASIC3抑制剂后,大鼠眶周及足底机械痛阈值均显著增加(P<0.05),CGRP蛋白的表达也明显降低(P<0.05),而给予ASIC3激动剂后,大鼠眶周及足底机械痛阈值均显著降低(P<0.05),CGRP蛋白的表达明显增加(P<0.05);(4)免疫荧光检测显示在TNC部位,ASIC3主要表达于神经元,且与CGRP有少量共表达.结论:ASIC3在慢性偏头痛大鼠TNC部位表达上调,且通过调节机械痛阈值的变化及CGRP的表达参与了慢性偏头痛的发生发展过程.
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髓核致炎大鼠背根神经节中NF-κB和ASICs上调机制的探讨
目的 通过观察核因子-κB(NF-κB)和酸敏感离子通道(ASIC)信号通路阻断剂PDTC和阿米洛利对髓核致炎大鼠背根神经节(DRG)中NF-κB和ASIC3表达的影响,探索NF-κB和ASIC3在髓核组织诱导神经根性疼痛的可能机制.方法 将80只大鼠采用随机数字表法分为5组,对照组、模型组、阿米洛利组、PDTC组和阿米洛利组+PDTC组,每组16只.对照组在暴露L5DRG后直接缝合.模型组取出大鼠尾部的髓核组织置于暴露的L5DRG上,缝合切口.阿米洛利组和PDTC组在模型组的基础上,分别于术后2周内每天腹腔内注射20μg/kg阿米洛利和20μg/kg PDTC.阿米洛利+PDTC组在模型组基础上,术后2周内每天腹腔内注射20μg/kg阿米洛利和20μg/kg PDTC.对照组和模型组不进行药物干预.造模成功后分别于术后2、4、6、8、10、12d检测大鼠后足机械刺激缩足阈值(PWT).采用RT-PCR法和Western blot法测定ASIC3、NF-κB p65、TNF-α和IL-6 mRNA和蛋白表达水平.术后1、3、7、14d采用ELISA法检测外周血及DRG上清液中的TNF-α和IL-6水平,并检测一氧化氮(NO)水平.结果 与对照组比较,术后12d时模型组中大鼠后足的PWT显著下降(P＜0.01),术后14d模型组DRG中NF-κB p65和ASIC3的mRNA和蛋白表达显著上调(均P＜0.05),外周血和DRG中NO、TNF-α、IL-6水平均显著上调(均P＜0.01).与模型组比较,阿米洛利组、PDTC组和阿米洛利+PDTC组大鼠后足PWT在8d内下降,之后逐渐增加,术后10、12d大鼠后足PWT明显高于模型组(均P＜0.01),术后14d DRG中NF-κB p65和ASIC3的mRNA和蛋白表达明显下降(均P＜0.05),外周血和DRG中NO、TNF-α、IL-6水平均显著降低(均P＜0.01).结论 NF-κB和ASIC3可相互影响,通过抑制NO及多种细胞炎性因子(TNF-α和IL-6)的表达,减轻髓核组织对DRG的炎症损伤所致的痛觉过敏,减缓神经根性疼痛.
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3型酸敏感离子通道与腰椎神经根病变疼痛相关机制论述
在腰椎神经根病变中,背根部和背根神经节受突出的椎间盘或退化的狭窄脊髓通道压迫影响.这种疾病是多因素的,涉及到各种类型的疼痛,例如缺血性、致炎性、机械性和神经性疼痛,受细胞外酸中毒激活的酸敏感离子通道(ASICs)影响.3型酸敏感离子通道(ASIC3)作为ASICs的一种,在疼痛形成过程中发挥着重要作用:ASIC3可能牵涉到椎间盘的退化过程,导致椎间盘突出和背部神经的压迫;ASIC3与致炎性疼痛和缺血性疼痛有关,容易涉及到机械性疼痛;ASIC3可能对于控制根动脉血管张力起着一定的作用.而相关的ASIC3特异抑制剂可以缓解腰椎神经根病变疼痛,对于其机制作用的探讨,或许可以帮助阐明ASIC3在腰椎神经根病变的机制及发展出新兴的止痛药剂.
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甘草附子汤对类风湿关节炎大鼠ASIC3和HIF-1α表达的影响
目的:观察甘草附子汤对类风湿关节炎大鼠血清和滑膜组织中ASIC3和HIF-1α表达影响,探讨甘草附子汤治疗RA的相关机制.方法:40只SPF级Wistar大鼠随机分为4组,每组10只,除正常组外,其余组等量的不完全氟氏佐剂和牛Ⅱ型胶原乳化剂造模.甘草附子汤(9.75g/kg),醋酸地塞米松(7.5 mg/kg),连续灌胃20 d.分别拍摄大鼠足跖X射线,用ELISA检测大鼠血清中HIF-1c和ASIC3表达,免疫组化法检测关节滑膜组织中HIF-1α和ASIC3蛋白表达.结果:模型组大鼠血清和滑膜组织中ASIC-3和HIF-1α含量明显高于正常组(P＜0.01),甘草附予汤组大鼠滑膜组织和血清中ASIC-3、HIF-1α含量明显低于模型组(P＜0.01).结论:甘草附子汤可以降低RA模型大鼠血清和滑膜组织中ASIC3、HIF-1α含量,可能是该方治疗RA的作用机制之一.
