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羟苯磺酸钙对硒性白内障大鼠晶状体上皮细胞凋亡及Nrf2/HO-1信号通路的影响
目的 研究羟苯磺酸钙对硒性白内障大鼠晶状体上皮细胞凋亡的影响并探讨其作用机制.方法 采用亚硒酸钠诱导法制备硒性白内障模型大鼠,随机分为模型组、维生素C组(维生素C18 mg/kg,每日一次灌胃)、羟苯磺酸钙低剂量组(羟苯磺酸钙50 mg/kg,每日一次灌胃)、中剂量组(羟苯磺酸钙100 mg/kg,每日一次灌胃)、高剂量组(羟苯磺酸钙200 mg/kg,每日一次灌胃),对照组(不建模)及模型组给予等体积生理盐水灌胃.连续用药4周.裂隙灯检测各组大鼠晶状体混浊程度,TUNEL法检测大鼠晶状体上皮细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫组化(WB)检测晶状体上皮细胞中Caspase3、Bcl-2、Bax、Nrf2、Keap1、HO-1mRNA和蛋白表达情况.结果 与对照组比较,模型组大鼠模型组大鼠的晶状体混浊程度显著增加,晶状体出现大量空泡、降解、萎缩等病变,晶状体上皮细胞凋亡指数显著升高,Bcl-2蛋白表达显著下降,Bax、Caspase3、Keap1、HO-1蛋白表达显著升高,Nrf2蛋白核转移水平显著增强,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,维生素C组、羟苯磺酸钙低、中、高剂量组大鼠晶状体混浊程度均显著降低,晶状体组织病理损伤明显改善,晶状体上皮细胞凋亡指数显著下降,Bcl-2蛋白表达显著升高,Bax、Caspase3、Keap1、HO-1蛋白表达显著降低,Nrf2蛋白核转移水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05),且羟苯磺酸钙的效果呈剂量依赖性.结论 羟苯磺酸钙可能通过抑制Nrf2/HO-1信号通路抑制晶状体上皮细胞凋亡,发挥对硒性白内障大鼠晶状体损伤的保护作用.
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丹酚酸B对大鼠缺血心肌血管再生的促进作用
目的 研究丹酚酸B促进缺血心肌血管生成的分子作用机制.方法 制备心肌梗死大鼠模型,50只大鼠随机分为假手术组、模型组及丹酚酸B低、中、高(20、40、60 mg/kg)剂量组,尾iv给药1周后,测定大鼠心肌梗死面积;免疫组化法检测大鼠心肌梗死边缘区微血管密度;试剂盒检测大鼠血清中肌酸激酶同工酶MB (CK-MB)、心肌肌钙蛋白(cTnI)和乳酸脱氢酶(LDH)的量;Western blotting法检测大鼠心肌梗死边缘区核转录因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶(HO-1)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达水平.结果 与模型组比较,丹酚酸B中、高剂量组大鼠心肌梗死面积显著减少(P＜0.05);丹酚酸B低、中、高剂量组大鼠微血管密度显著增加(P＜0.05);丹酚酸B中、高剂量组大鼠血清CK-MB、LDH和cTnI水平显著下降(P＜0.05);丹酚酸B低、中、高剂量均可增加大鼠心肌梗死边缘区VEGF、Nrf2和HO-1蛋白水平的表达(P＜0.05),其中以丹酚酸B高剂量组效果佳.结论 丹酚酸B可促进大鼠缺血心肌血管再生,该作用与其增加心肌组织VEGF、Nrf2和HO-1的表达有关.
关键词： 丹酚酸B 血管再生 心肌缺血 Nrf2/HO-1信号通路 血管内皮生长因子 -
表没食子儿茶素没食子酸酯对顺铂诱导大鼠肾损伤的改善作用
目的 考察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对顺铂诱导大鼠肾损伤的改善作用及其作用机制.方法 50只SD雄性大鼠(10只/组)随机分为空白对照组,肾损伤组,EGCG低、中、高剂量组(25、50、100 mg/kg).肾损伤组及给药组腹腔注射7.5 mg/kg顺铂制备肾损伤模型,空白对照组腹腔注射生理盐水.给药14d后,观察各组大鼠一般状况,HE染色法观察肾组织形态学变化;ELISA试剂盒法检测血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、胱抑素C(Cys-c)的含有量和尿液中白介素-18 (IL-18)、肾损伤分子-1(KIM-1)的含有量;试剂盒法检测肾皮质中丙二醛(MDA)、抗氧化酶体系谷胱甘肽(GSH)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)的含有量;Western blot法检测肾皮质胞浆、胞核中核因子2相关因子2(Nrf2)蛋白的含有量及血红素氧合酶1(HO-1)蛋白的表达水平.结果 EGCG干预可以改善顺铂诱导大鼠肾损伤病理结构改变,肾指数降低,血清中Cr、Cys-c含有量降低,尿液中IL-18、KIM-1含有量降低,肾皮质中MDA浓度降低,GSH浓度、T-SOD活性升高.同时,肾皮质中胞浆Nrf2含有量降低,胞核Nrf2、总细胞HO-1含有量升高.结论 EGCG可通过激活Nrf2/HO-1信号通路,发挥对顺铂诱导大鼠肾损伤的改善作用.
关键词： 表没食子儿茶素没食子酸酯 顺铂 肾损伤 Nrf2/HO-1信号通路 -
丹酚酸A对紫外线诱导视网膜色素上皮细胞损伤的保护作用
目的 探讨丹酚酸A(Sal A)对紫外线(UV)诱导的视网膜色素上皮细胞(RPE)损伤的保护作用及其可能机制.方法 将人视网膜色素上皮细胞分为对照组、UV组、Sal A+UV组和联合组[Sal A+转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)-shRNA+ UV组].采用噻唑蓝(MTT)染色法检测细胞存活率,AnnexinV-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率和坏死率,蛋白免疫印迹法检测γ-H2AX、H2AX、Nrf2和血红素加氧酶1(HO-1),RT-PCR方法检测Nrf2和HO-1 mRNA的表达.结果 Sal A+UV组的细胞存活率较UV组显著升高,而细胞凋亡率和细胞坏死率较UV组显著降低;与对照组相比,UV组和联合组γ-H2AX表达显著升高,Nrf2和HO-1蛋白及mRNA表达显著降低(P＜0.05).与UV组相比,Sal A+UV组Nrf2和HO-1蛋白及mRNA表达显著增高,γ-H2AX表达显著下降(P＜0.05).结论 Sal A通过Nrf2/HO-1信号通路,降低UV诱导DNA损伤作用,达到抑制RPE损伤作用.
关键词： 丹酚酸A DNA损伤 Nrf2/HO-1信号通路 视网膜色素上皮细胞 保护作用 -
紫草素对高糖诱导的血管内皮细胞凋亡和氧化应激的影响
目的:探讨紫草素(shikonin)对高浓度葡萄糖诱导的血管内皮细胞凋亡和氧化应激水平的影响及其可能的作用机制.方法:体外培养的大鼠胸主动脉内皮细胞随机分为5组:正常对照组(培养基中葡萄糖浓度为5.5 mmol/L)、高糖组(培养基中葡萄糖浓度为33 mmol/L)、高糖+低浓度紫草素组(培养基中葡萄糖浓度为33 mmol/L,紫草素浓度为0.1μmol/L)、高糖+中浓度紫草素组(培养基中葡萄糖浓度为33 mmol/L,紫草素浓度为1μmol/L)和高糖+高浓度紫草素组(培养基中葡萄糖浓度为33 mmol/L,紫草素浓度为10μmol/L).各组细胞经相应处理后,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞的凋亡率;此外,检测细胞中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的水平,以反映细胞的氧化应激状态;Western blot检测Nrf2/HO-1信号通路的活性.结果:相较于高糖组,紫草素处理可呈剂量依赖性地逆转高糖所致的内皮细胞活力降低及凋亡率增加.与正常对照组相比,高浓度葡萄糖可升高内皮细胞中MDA和ROS的含量,同时降低SOD和GSH-Px的活性;相较于高糖组,给予紫草素干预后,细胞内MDA和ROS的含量降低,SOD和GSH-Px的活性升高.此外,高糖可致内皮细胞中cleaved caspase-3、HO-1及核内Nrf2蛋白表达的增加;与高糖组相比,给予紫草素干预后细胞中cleaved caspase-3、HO-1和核内Nrf2的表达部分下降.结论:紫草素可显著改善高糖所致的血管内皮细胞凋亡,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路并降低细胞的氧化应激水平有关.
关键词： 紫草素 血管内皮细胞 氧化应激 细胞凋亡 Nrf2/HO-1信号通路 -
花姜酮通过抑制氧化应激减轻MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤
目的:探讨花姜酮(zerumbone,ZER)对1-甲基-4-苯基-吡啶鎓离子(1-methyl-4-phenylpyridinium, MPP+)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤的作用及其可能的分子机制.方法:采用CCK-8法检测MPP+对SH-SY5Y细胞的毒性作用以及ZER的保护作用,采用流式细胞术检测活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)含量和细胞凋亡情况,采用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术抑制人帕金森病蛋白7(Parkinson disease protein 7,PARK7)基因的表达,采用Western blot法检测PARK7、核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related fac-tor 2,Nrf2)和血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)的蛋白表达水平.结果:MPP+可显著抑制SH-SY5Y细胞活力(P<0.05),并呈剂量和时间依赖性;ZER可使经600 μmol/L MPP+处理24 h的SH-SY5Y细胞活力升高,PARK7和Nrf2蛋白表达水平显著升高(P<0.05),ROS含量和细胞凋亡明显减少(P<0.05),抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine, NAC)具有相似的作用;沉默PARK7 基因后,Nrf2 和HO-1 蛋白的表达水平明显下降(P<0.05),ROS含量和细胞凋亡显著增加(P<0.05).结论:ZER可在体外剂量依赖性地减轻MPP+对SH-SY5Y细胞的毒性作用,这可能与ZER激活PARK7/Nrf2/HO-1通路,继而抑制MPP+诱导的ROS生成和细胞凋亡有关.
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独活寄生汤改善佐剂性关节炎大鼠氧化应激机制探讨
[目的]探讨独活寄生汤对佐剂性关节炎(AIA)大鼠抗氧化能力及对核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路的影响.[方法]采用弗式完全佐剂成功诱导大鼠佐剂性关节炎模型.将90只大鼠随机分为正常组,模型组,甲氨喋呤组(剂量为0.5 g·kg-1,日2次),独活寄生汤低、中、高剂量组(剂量分别为0.75、1.5、3.0 g·kg-1,日2次),每组15只,连续给药24 d.采用荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法检测各组大鼠滑膜组织超氧化物歧化酶(SOD)mRNA、丙二醛(MDA)mRNA、HO-1 mRNA表达变化,采用分光光度法检测各组大鼠滑膜组织SOD、MDA含量,采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组大鼠滑膜组织胞核、胞质Nrf2和全细胞HO-1蛋白表达.[结果]独活寄生汤高、中剂量可上调模型大鼠滑膜组织SOD表达,降低MDA的表达,降低胞质Nrf2含量,升高胞核Nrf2含量,提高Nrf2核转位率,增强滑膜组织HO-1的表达,与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).[结论]独活寄生汤具有增强抗氧化应激的能力,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1信号途径,促进Nrf2核转位,进而促进下游抗氧化因子HO-1的表达有关.
