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Necrostatin-1对创伤失血性休克大鼠肝脏高迁移率族蛋白B1表达的影响
目的 探讨程序性坏死特异性抑制剂-1(necrostatin-1,Nec-1)对创伤失血性休克大鼠肝脏HMGB-1的影响及其机制.方法 采用创伤失血性大鼠休克模型,将96只雄性SD大鼠按随机数字表法随机分为假手术组、DMSO组、Nec-1组,每组32只.假手术组仅进行麻醉、分离血管、结扎血管,并不进行创伤失血和再灌注.DMSO组建立创伤失血性休克大鼠模型,再灌注前5min前股静脉给予DMSO溶剂.Nec-1组于再灌注5 min股静脉给予Nec-1(1 mg/kg).于再灌注后分别在2、8、16、24 h各处死动物8只,取动物血清及肝脏组织.检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;HE染色观察肝脏病理变化;透射电镜观察再灌注后24h后细胞器水平的细胞坏死;酶联免疫分析法(ELISA)分析血清中HMGB-1含量;蛋白质免疫印迹法(western blotting)分别检测肝脏组织中胞质和总蛋白的HMGB-1含量.结果 Nec-1组与DMSO组比较,血清ALT在8 h(P＜0.05)、16 h(P＜0.01)、24 h(P＜0.01)表达较低,Nec-1组血清AST在8 h(P＜0.01)、16h (P ＜0.01)、24h(P＜0.01)表达较DMSO组低;与DMSO组比较,Nec-1组血清HMGB-1在8 h(P＜0.05)、16 h(P＜0.01)、24h (P＜0.01)有明显下降.光镜及电镜下DMSO组及Nec-1组可见肝小叶结构破坏,淤血,炎性细胞浸润及细胞器损伤,Nec-1组肝组织损伤明显减轻;与DMSO组比较,Nec-1组肝细胞中胞质蛋白HMGB-1在8h (P＜0.01)、16h (P＜0.01)、24 h(P＜0.01)有明显下降,Nec-1组总蛋白HMGB-1在8h (P＜0.05)、24 h(P＜0.05)有明显下降.结论 Nec-1可以有效降低创伤失血性休克对肝脏的损伤,减少HMGB-1的释放,有效保护肝细胞.
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程序性坏死特异性抑制剂-1对创伤失血性休克大鼠肝脏保护作用的研究
目的 探讨程序性坏死特异性抑制剂-1(Nec-1)对创伤失血性休克大鼠的肝脏保护作用.方法 采用左下肢股骨、胫骨骨折及腹部软组织损伤并失血/再灌注的方法制备大鼠创伤失血性休克模型.选择雄性SD大鼠,22只按随机数字表法分为模型组和Nec-1组,每组11只,观察72 h死亡率.72只同法随机分为假手术组、模型组、Nec-1组,每组24只.假手术组仅麻醉和分离、结扎血管,不进行创伤、失血、再灌注;Nec-1组于再灌注前5 min经股静脉给予1 mg/kg Nec-1;模型组给予等体积溶剂.于再灌注后2、4、8h采集各组血清和肝组织,用全自动生化仪检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)的水平;光镜下观察肝组织病理学改变;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的mRNA表达;蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肝组织受体相互作用蛋白酶-1/3(RIP1/RIP3)的蛋白表达.结果 Nec-1组大鼠72 h死亡率较模型组明显降低[18.18％(2/11)比63.64％(7/11),P=0.040].模型组2h血清ALT、AST即较假手术组明显升高[ALT(U/L):110.21 ±22.32比80.98±19.94,AST (U/L):364.29±64.83比279.76±70.64,均P＜0.05],8h达高峰[ALT(U/L):387.41±47.11比82.76±22.44,AST(U/L):973.35±77.51比261.49±52.03,均P＜0.01].Nec-1组血清ALT、AST水平较模型组明显降低[ALT(U/L)4 h:144.64±33.79比213.96±36.21,8 h:159.48±43.57比387.41 ±47.11;AST(U/L)4 h:398.78±59.48比630.61±59.93,8 h:427.38±80.75比973.35±77.51,均P＜0.01].光镜下模型组大鼠肝窦扩张、淤血,肝细胞变性、坏死,大量炎性细胞浸润;Nec-1组肝组织损伤程度明显减轻.模型组肝组织TNF-α、IL-1β的mRNA表达和RIP1、RIP3的蛋白表达随时间延长呈逐渐升高趋势;给予Nec-1后各时间点TNF-α、IL-1β的mRNA表达均较模型组明显降低,以8h为明显(TNF-α mRNA:1.457±0.081比2.317-0.062,IL-1β mRNA:0.690-0.087比1.812±0.112,均P＜0.01),而肝组织RIP1、RIP3的蛋白表达与模型组相比差异无统计学意义(RIP1蛋白8 h:0.561±0.033比0.587±0.036,RIP3蛋白8 h:0.976±0.040比1.044±0.115,均P＞0.05).结论 Nec-1对创伤失血性休克大鼠肝脏具有明显的保护作用,具体机制需进一步深入研究.
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程序性坏死特异性抑制剂-1对脓毒症大鼠 肝脏单核细胞趋化蛋白-1表达的影响
目的：探讨程序性坏死特异性抑制剂-1（Nec-1）对脓毒症大鼠肝脏单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达的影响及其机制。方法按随机数字表法将48只雄性SD大鼠分为假手术（Sham）组、模型组、Nec-1组，每组16只。采用盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症大鼠模型；Sham组仅麻醉、开腹翻动盲肠后关腹，不进行结扎。Nec-1组于制模前30min尾静脉注射Nec-1溶液1mg/kg〔25mgNec-1溶于2.5mL二甲基亚砜（DMSO）溶剂中〕；模型组则注射DMSO0.1mL/kg。各组分别于制模后即刻（0h）和8h取腹主动脉血及肝脏组织，采用全自动生化分析仪检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）水平；苏木素-伊红（HE）染色后光镜下观察肝组织病理学改变；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）含量；反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肝组织MCP-1mRNA表达。结果制模后0h，3组血清ALT、AST、TNF-α、IL-6及肝脏MCP-1mRNA表达差异均无统计学意义，肝组织细胞结构正常。制模后8h，模型组和Nec-1组血清ALT、AST、TNF-α、IL-6及肝脏MCP-1mRNA表达均较Sham组明显升高〔ALT（U/L）：172.35±21.88、129.67±18.20比60.04±11.74，AST（U/L）：511.03±34.92、363.03±25.25比254.83±31.04，TNF-α（ng/L）：603.96±24.18、483.87±26.60比265.74±15.14，IL-6（ng/L）：975.62±65.37、712.09±45.47比310.42±13.88，MCP-1mRNA（2-ΔΔCt）：7.09±0.18、5.51±0.45比0.99±0.06，均P＜0.05〕；Nec-1组各指标均较模型组明显下降（均P＜0.05）。制模后8h，光镜下模型组可见肝小叶结构破坏、淤血及炎性细胞浸润；而Nec-1组肝组织病理改变较模型组明显减轻。结论 Nec-1预处理可有效减轻脓毒症大鼠肝脏损伤，减少循环中炎性因子含量及肝脏中MCP-1mRNA表达，从而减轻炎症对机体的损伤。
关键词： 脓毒症 程序性坏死 程序性坏死特异性抑制剂-1 单核细胞趋化蛋白-1 -
急性肝衰竭小鼠necroptosis的发生及Nec-1的干预作用研究
目的 分析急性肝衰竭小鼠中程序性坏死(necroptosis)发生情况及特异性抑制剂-1(Nec-1)的干预作用.方法 2017年6月-2018年3月在解放军总医院第五医学中心进行动物实验.60只SPF级雄性C57/BL6小鼠随机数字表法分为对照组、模型组(D-半乳糖胺和脂多糖造模)、干预组(造模前给予Nec-1)每组20只,检测小鼠造模后肝功能指标(ALT)、炎性因子(TNF-α、IL-6、IL-10)、受体相互作用蛋白(RIP),并观察肝脏病理变化.结果 造模后1 h,急性肝衰竭模型组ALT、TNF-α、IL-6、IL-10、RIP1、RIP3水平均明显高于对照组(t/P=6.821/<0.001,11.386/<0.001,10.609/<0.001,8.541/<0.001,5.867/<0.001;4.388/0.002),干预组的ALT、TNF-α、IL-6、IL-10水平均低于模型组(t/P=2.753/0.023,3.558/0.012,5.796/<0.001,3.332/0.011);3 h时干预组的RIP1水平低于模型组(t=2.416,P=0.04),其余时间点以及RIP3水平比较2组差异无统计学意义(P>0.05).结论 程序性坏死在急性肝衰竭的发生中发挥了作用,Nec-1可在一定程度上抑制其作用.
关键词： 肝衰竭 急性 程序性坏死 程序性坏死特异性抑制剂-1 小鼠 -
程序性坏死特异性抑制剂-1对脓毒症大鼠心肌受体作用蛋白表达的影响
目的 探讨不同剂量程序性坏死特异性抑制剂-1(Nec-1)对脓毒症大鼠心肌保护作用的量效关系.方法 50只SD大鼠按随机数字表法分为5组(n=10):空白组、模型组、Nec-1小剂量组、Nec-1中剂量组、Nec-1大剂量组,采用鼠尾静脉注射内毒素方法建模,在建模6h后收集标本,通过光镜观察心肌组织形态学变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组血浆肌钙蛋白(cTnI)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6),采用Western blot法检测心肌组织中受体作用蛋白1(RIP1)、受体作用蛋白3(RIP3)的表达.结果 与空白组比较,模型组血浆cTnI[(7.58±0.46)比(1.06±0.17)ng/ml]、TNF-α[(937.86±53.36)比(236.95±28.68)pg/ml]、IL-6[(776.13±17.94)比(168.35±20.60)pg/ml]活性均增高(t=-30.561,P=0.000;t=-32.122,P=0.000;t=-39.684,P=0.000),RIP1、RIP3蛋白表达(1.22±0.14比0.41±0.11,t=-17.480,P=0.000;1.15±0.02比0.18±0.08,t=-52.463,P=0.000)均增高.与模型组比较Nec-1干预组cTnI[(7.24±0.41)、(4.43±0.84)、(1.26±0.17)比(7.58±0.46)ng/ml;t=1.622,P=0.112;t=14.765,P=0.000;t=29.606,P=0.000]、TNF-α[(878.73±70.24)、(437.43±59.26)、(273.44±23.745)比(937.86±53.36)pg/ml;t=2.637,P=0.012;t=22.221,P=0.000;t=29.235,P=0.001]、IL-6[(719.18±49.83)、(381.89±28.69)、(221.93±42.58)比(776.13±17.94)pg/ml;t=3.722,P=0.000;t=25.743,P=0.000;t=36.184,P=0.000],RIP1、RIP3蛋白表达(0.83±0.09、0.70±0.09、0.55±0.09比1.22±0.14;t=8.598,P=0.000;t=11.297,P=0.000;t=14.511,P=0.000;0.94±0.02、0.73±0.01、0.53±0.04比1.15±0.02;t=10.961,P=0.000;t=22.405,P=0.000;t=33.414,P=0.000),且随着Nec-1剂量升高表达依次下降.心肌病理损伤在Nec-1大剂量组表现轻.结论 大剂量Nec-1能改善脓毒症时心肌组织的病理性炎症损伤;Nec-1能抑制脓毒症心肌组织RIP1、RIP3蛋白表达.
关键词： 程序性坏死特异性抑制剂-1 脓毒症 心肌 受体相互作用蛋白 -
程序性坏死特异性抑制剂-1促进大鼠脊髓损伤修复的研究
目的 观察鞘内注射程序性坏死特异性抑制剂-1(Nec-1)对大鼠对脊髓损伤修复的促进作用.方法 SD大鼠30只,采用改良Allen's法建立大鼠脊髓损伤模型,按照随机数字表法分为3组,假手术组、生理盐水组和Nec-1治疗组,每组10只.脊髓损伤后7d对各组大鼠进行运动功能评价、运动诱发电位测定、脊髓坏死测定.结果 术后7、14、21 d Nec-1治疗组大鼠运动功能恢复均好于生理盐水组,运动功能评分显著高于生理盐水组,差异均有统计学意义(P＜0.05).术后7d时,Nec-1治疗组大鼠皮层运动诱发电位(MEP)潜伏期变化为(71.37 ±12.71)％,显著低于生理盐水组[(104.5±14.57)％,t=8.147,P＜0.01],波幅峰值变化为(69.27±4.75)％,也显著小于生理盐水组[(87.93±5.47)％,t=3.201,P＜0.05].术后7d时,Nec-1治疗组脊髓损伤坏死区为(6.91±0.42) mm2,较生理盐水组脊髓损伤坏死区范围显著减小[(11.29 ±0.63) mm2,t=7.542,P＜0.01).术后7d时,Nec-1治疗组存活神经元细胞计数为(10.54±1.27)个,较生理盐水组显著增多,差异有统计学意义[(5.27±0.47)个,t=6.341,P＜0.01];染色髓鞘吸光度(A)相对值Nec-1治疗组为0.94±0.06,较生理盐水组显著增多,差异有统计学意义(0.67±0.08,t=5.574,P＜0.01).结论 Nec-1可以改善大鼠运动功能及皮质运动诱发电位的恢复,对脊髓损伤修复具有促进作用.
关键词： 程序性坏死特异性抑制剂-1 脊髓损伤 修复
