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WIN55212-2对百草枯中毒小鼠肺损伤的保护作用
目的 探讨大麻素受体激动剂WIN55212-2对百草枯(paraquat,PQ)中毒模型小鼠肺损伤的保护作用.方法 健康成年雄性C57BL/6小鼠35只,随机(随机数字法)分为4组:百草枯中毒组(PQ组,n=10),PQ+WIN55212-21 mg干预组(WIN 1 mg组,n=10),PQ+WIN55212-22 mg干预组(WIN 2 mg组,n=10),对照组(control组,n=5).PQ组、WIN 1 mg组、WIN 2 mg组建立百草枯中毒模型,于实验第1天和第3天腹腔注射PQ 20 mg/kg.WIN 1 mg组和WIN 2 mg组分别于PQ染毒前1 h按1 mg/kg和2 mg/kg的浓度经腹腔注射WIN55212-2(含Tween 80助溶剂),PQ组和control组注射等容量的生理盐水和Tween 80液.从第2周开始,干预药物每周注射两次.急性期(14 d)随机处死PQ组、WIN 1 mg组、WIN 2 mg组各5只小鼠,对照组处死3只,取血标本,离心得血浆,取肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)和肺组织.剩余存活小鼠均在28 d时处死,再次留取上述组织标本.肺组织行HE染色、Masson染色,观察PQ中毒后小鼠的肺组织变化.酶联免疫吸附法(ELISA)测定急性期小鼠血浆和BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)及慢性期血浆和BALF中TNF-α 和转化生长因子 β(TGF-β)的含量变化.结果 急性期:PQ组、WIN 1 mg组、WIN 2 mg组小鼠肺组织病理切片均呈现弥漫性炎症,予WIN55212-2干预后炎症有所改善,尤以WIN 1 mg组更为明显.PQ组、WIN 1 mg组、WIN 2 mg组,对照组BALF中IL-6水平(U/L)分别为1024.77±124.74、620.48±99.76、823.29±157.88、180.42±20.22;WIN 1 mg组和WIN 2 mg组均较PQ组下降,且差异有统计学意义(P=0.021,P=0.016),但两干预组间差异无统计学意义(P=0.114).急性期BALF和血浆中TNF-α 水平与上述情况相似.慢性期:PQ组、WIN 1 mg组、WIN 2 mg组小鼠肺组织HE及Masson染色可见明显纤维化,予WIN55212-2干预后可见炎症情况有所改善,以WIN 1 mg组更为明显.慢性期PQ组、WIN 1 mg组、WIN 2 mg组小鼠BALF中TNF-α 水平(U/L)分别为321.64±50.54、260.23±48.19、278.89±29.40、89.76±10.87,WIN 1 mg组与对照组及WIN 2 mg组间差异有统计学意义.相似的情况可见于慢性期血浆TNF-α,但TGF-β 未见这种差异.结论 小剂量WIN55212-2可以改善PQ中毒小鼠的一般状况,降低PQ中毒小鼠炎症和纤维化相关细胞因子水平,WIN55212-2可能对百草枯中毒模型小鼠肺损伤具有保护作用.
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大麻素CB1受体对大鼠视网膜神经节细胞诱发动作电位的作用
激活大麻素CB1受体(CB1Rs)通过调控多种离子通道,从而调节脊椎动物视网膜的功能.本文旨在利用膜片钳全细胞记录技术,在大鼠视网膜薄片上研究CB1Rs对神经节细胞兴奋性的作用.结果显示,在电流钳制状态下,灌流CB1R激动剂WIN55212-2 (WIN,5μmol/L)对神经节细胞的自发动作电位发放频率和静息膜电位均没有显著影响.在灌流液中加入CNQX,D-APV,bicuculline和strychnine以阻断神经节细胞的兴奋性和抑制性输入,灌流5μmol/L WIN对正向电流注入(+10pA到+100 pA)诱发的动作电位的频率也没有显著影响.位相分析结果显示,触发动作电位的阈值电位和触发第一个动作电位的延迟时间在加入WIN前后也没有显著改变；然而,WIN显著降低动作电位的上升和下降相速率(±dV/dtmax),而且该作用可被CB1R拮抗剂SR141716所阻断.此外,在阻断突触输入的情况下,WIN对神经节细胞的膜电位也没有显著影响.以上结果提示,激活大麻素CB1Rs通过调控诱发动作电位,从而调节大鼠视网膜神经节细胞的兴奋性.
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大麻素抑制大鼠三叉神经节神经元ATP激活电流
本文在培养的大鼠三叉神经节(trigeminal ganglion,TG)神经元上采用全细胞膜片钳技术,探讨大麻素对大鼠TG神经元ATP激活电流(ATP-activated currents,IATP)的影响.结果显示:(1)胞外给予ATP,大部分受检细胞(67/75,89.33%)可记录到一个内向电流,且具有剂量依赖性.该电流可被P2X嘌呤受体特异性拮抗剂PPADS所阻断.(2)预加WIN55212-2[大麻素受体1(cannabinoid receptor 1,CB1受体)激动剂]可对IATP产生抑制作用,此作用呈剂量依赖性,并可被CB1受体特异性拮抗剂AM281阻断.预加不同浓度的WIN55212-2(1x10-13、1x10-12、1x10-11、1x10-10、1x10-9和1x10-8mol/L)对IATP(1x10-4mol/L ATP)的抑制作用分别为(8.14±3.14)%、(20.11±2.72)%、(46.62±3.51)%、(72.16±5.64)%、(80.21±2.80)%和(80.59±3.55)%.(3)预加WIN55212-2后IATP的浓度-反应曲线明显下移;大反应浓度时的IATP幅值减小了(58.02±4.21)%,而阈值基本不变;预加WIN55212.2前后曲线的EC50值非常接近(1.15x10-4mol/L vs 1.27x10-4 mol/L).(4)预加forskolin[腺苷酸环化酶(adenylyl cyclase,AC)激动剂]或8-Br-cAMP可以逆转WIN55212-2对IATP的抑制作用.以上结果表明,大麻素可能作用于CB1受体,通过抑制AC-cAMP-PKA途径发挥对IATP的抑制作用.
关键词： 大麻素受体1 WIN55212-2 P2X受体 三叉神经节 膜片钳技术
