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骨髓异常增生综合征患者骨髓来源的间充质干细胞免疫功能异常
目的 研究骨髓异常增生综合征(myelodysplastic syndromes,MDS)难治性贫血(refractory anemia,RA)型患者(MDS-RA)和健康成年人骨髓来源的间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cell,BMSC)的免疫学特征,比较它们是否存在免疫功能的异常.方法 分离MDS-RA和健康成年人来源的间充质干细胞,分别检测它们对T细胞周期、活化、抑制和增殖的作用情况.结果 MDS-RA的BMSC抑制T细胞增殖和活化能力均减弱,但是抑制活化的T细胞凋亡的作用反而增强.结论 MDS-RA患者骨髓来源的MSC存在明显的免疫调节功能缺陷,MDS-RA患者骨髓微环境可能存在免疫异常,如果使用MDS患者自体的MSC移植治疗可能不是一种很好的选择.对于MDS患者好是选用异基因的MSC移植.
关键词： 骨髓异常增生综合征 骨髓来源间充质干细胞 免疫调节 -
大鼠骨髓和脂肪来源间充质干细胞的成骨特性比较
背景:尽管骨髓来源和脂肪来源的间充质干细胞均具有向骨和软骨分化潜能,但终究带有各自来源组织的特点,那么是否意味着两者在非基因影响下成骨特性存在一定差异呢?目的:比较大鼠骨髓和脂肪来源的间充质干细胞在体外成骨分化中的特性区别.设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2007-07/2008-03在中国科学院昆明动物研究所国家级重点实验室完成.材料:6周龄和18周龄SD大鼠各2只,分别用于制备骨髓间充质干细胞和脂肪间充质干细胞.方法:选取第3代骨髓间充质干细胞和脂肪间充质干细胞,按5×107L-1接种后各分为2组:诱导组加入含10-8mol/L地塞米松、10 mol/L β-甘油磷酸、50 mg/L维生素C的成骨诱导培养基1.5 mL,未诱导组不加入成骨诱导培养基.主要观察指标:碱性磷酸酶染色与茜素红染色结果,碱性磷酸酶和骨钙素定量分析结果.结果:成骨诱导7,14d,经诱导的骨髓基质干细胞和脂肪间充质干细胞呈碱性磷酸酶阳性,有钙结节形成,未诱导组呈阴性.成骨诱导3,7,10d,未诱导组间比较碱性磷酸酶及骨钙索含量均基本相似(P＞0.05);与未诱导组比较,脂肪间充质干细胞诱导组碱性磷酸酶及骨钙袭含量均明显升高(P＜0.05),骨髓间充质干细胞诱导组升高幅度更为显著(P＜0.001).结论:大鼠骨髓来源间充质干细胞体外成骨性能强于脂肪来源间充质干细胞,在骨组织工程种子细胞的选用中应优先考虑前者.
关键词： 骨髓来源间充质干细胞 碱性磷酸酶 骨钙素 成骨特性 -
骨髓和脂肪来源的间充质干细胞免疫调节作用的比较研究
本研究中我们分离骨髓和脂肪的间充质干细胞,分别检测它们对T细胞周期、活化、抑制和增殖的作用情况,研究脂肪来源(adipose-derived mesenchemal stem cell,AMSC)和骨髓来源(bone marrow derived mesenchemal stem cell,BMSC)间充质干细胞的免疫学特征,比较它们是否存在免疫功能的差异,结果显示AMSC和BMSC均具有抑制T细胞增殖的能力,在有丝分裂原刺激和MLR的T细胞增殖中均具有剂量依赖性的,在1∶2时有极强的抑制作用,但是在1∶100时这种作用基本消失,在共培养时AMSC和BMSC都可使更多的T细胞被抑制在G0/G1期,同时也可以抑制T细胞的早期活化,但是上述作用AMSC均较BMSC弱,但是AMSC并不具有抑制T细胞凋亡的作用,而两者在Th0向Th1或Th2分化中所起的作用是基本相似的,主要抑制Th0向Th1细胞(IL-2和IFN-γ生成细胞)的分化,而对向Th2细胞(IL-4和IL-10生成细胞)分化没有明显的影响.所以,AMSC和BMSC具有类似的免疫调节作用,因AMSC取材方便而成为更佳的材料来源.
关键词： 脂肪来源间充质干细胞 骨髓来源间充质干细胞 免疫调节 -
杆状病毒转导不同哺乳动物骨髓来源间充质干细胞
杆状病毒作为一种新型基因载体,若能有效转导不同哺乳动物骨髓来源间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells, BMSCs),将会成为干细胞基因修饰研究领域中更理想的一种基因载体.本文探讨了重组杆状病毒(BacV-CMV-EGFP)对不同哺乳动物BMSCs的转导效率.体外原代培养小鼠、大鼠、猪、恒河猴及人的BMSCs.用培养3代以上的哺乳动物BMSCs进行病毒转导实验,转导2d后用倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在不同哺乳动物BMSCs中的表达,并用流式细胞仪检测重组杆状病毒对不同哺乳动物BMSCs的转导效率.结果显示:原代培养的小鼠、大鼠、猪、恒河猴及人的BMSCs于体外传代3次以上后,细胞呈现较均一的梭形,漩涡状生长;倒置荧光显微镜观察显示,与小鼠、大鼠、猪的BMSCs相比,恒河猴及人有更多BMSCs表达绿色荧光蛋白,且荧光强度较强;杆状病毒对小鼠、大鼠、猪、恒河猴及人的BMSCs的转导效率分别为(21.21±3.02)%、(22.51±4.48)%、(39.13±5.79)%、(71.16±5.36)%及(70.67±3.74)%.上述结果表明,重组杆状病毒对不同哺乳动物BMSCs的转导效率不同,对恒河猴及人的BMSCs转导效率较高,说明重组杆状病毒可作为人或灵长类动物BMSCs基因修饰研究领域中更理想的基因载体.
关键词： 骨髓来源间充质干细胞 杆状病毒 转导 绿色荧光蛋白 -
骨折预处理对兔骨髓来源间充质干细胞的影响
目的 探讨骨折预处理对兔骨髓来源间充质干细胞(MSC)的影响.方法 将10只兔按随机数字表法分为2组,每组5只.骨折预处理组截断兔股骨骨干后采用克氏针内固定,7d后从另一侧股骨无菌抽取骨髓1～2 mL;对照组未进行任何处理.采用全骨髓贴壁法对2组兔进行骨髓来源的间充质干细胞的原代培养、酶消化法进行人工纯化,通过形态学观察、细胞周期测定及MTT实验,研究骨折预处理对MSC的影响.结果 骨折预处理后可较快地获得纯化的MSC,且MSC的增殖能力在P2、P3代时均高于对照组(均P＜0.05)；随着时间的延长,P4代时2组MSC增殖能力比较差异无统计学意义(P＞0.05).对P4代进行细胞周期测定,骨折预处理组MSC中G0/G1期细胞为70.65％,对照组MSC中G0/G1期细胞为72.40％,2组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 骨折预处理全骨髓贴壁法可在更短的时间内成功地培养出稳定的MSC,并且该细胞具有更强的增殖能力.
关键词： 骨折 骨髓来源间充质干细胞 动物 实验 兔 -
骨髓来源间充质干细胞对卵巢早衰小鼠的修复作用
目的:研究小鼠同种异体骨髓来源间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)在环磷酰胺诱导的小鼠卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)损伤中的修复作用及其机制.方法:分离培养小鼠BMSCs,应用流式细胞术检测BMSCs表面标志;小鼠腹腔注射50mg/(kg.d)环磷酰胺,连续15d,建立POF模型.建模后第7天,按每只小鼠2×106个BMSCs尾静脉注射移植到POF模型小鼠体内;移植后第7天,采用HE染色观察细胞移植治疗后小鼠卵巢结构变化,RT-PCR检测BMSCs移植对POF小鼠卵泡发育相关基因mRNA表达的影响.结果:BMSCs高表达间充质干细胞标志CD29和CD90,低表达内皮细胞标志标志CD31和造血干/祖细胞标志CD34.POF模型小鼠各级发育卵泡数量明显减少,闭锁卵泡数量明显增加(P＜0.05),颗粒细胞凋亡降解.与对照组比较,BMSCs移植组小鼠卵巢窦状卵泡和次级卵泡数量明显增加,闭锁卵泡数量明显减少(P＜0.05),颗粒细胞数量明显增加,但原始卵泡和初级卵泡数量两组间差异无统计学意义(P＞0.05);BMSCs移植组卵巢组织卵泡发育相关基因Nan03,Nobox,Lhx8 mRNA水平明显高于对照组(P＜0.05).结论:BMSCs能促进POF小鼠卵泡发育和卵巢组织结构恢复.
关键词： 环磷酰胺 卵巢早衰 骨髓来源间充质干细胞 -
Osteoglycin对小鼠骨髓间充质干细胞诱导分化成骨细胞的作用和相关机制的研究
目的 本研究旨在通过探索Osteoglycin(OGN)的表达控制小鼠骨髓间充质干细胞(mMSCs)向脂肪形成和成骨细胞生成之间的平衡来为治疗骨质疏松提供思路.方法 首先在成脂和成骨分化培养基中培养mMSCs,测定mMSCs中OGN的表达,评价成脂或成骨分化培养基对OGN表达的影响.其次,用罗格列酮处理mMSCs,通过测定ALP活性和OGN mRNA含量,评价ALP活性和OGN的表达变化对诱导mMSCs成骨分化的影响.第三,用带有OGN基因的慢病毒载体转染mMSCs来增强OGN的表达,通过相关脂肪细胞和成骨细胞特异性基因的表达探索相关机制.结果 通过带有OGN基因的慢病毒载体转染mMSCS以增加OGN的表达,可增加ALP的表达和骨形成,并降低脂肪细胞分化相关基因aP2和破骨细胞分化因子RANKL的表达,从而导致骨量增加.结论 OGN在骨质疏松症中发挥重要作用,并通过其调控骨髓基质细胞向成骨细胞和脂肪细胞的转化,为骨质疏松症提供可能的治疗干预手段.
关键词： OGN 骨质疏松 成骨分化 成脂分化 骨髓来源间充质干细胞
