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福氏2a志贺菌磷酸烯醇丙酮酸盐合成酶基因的克隆与序列分析
目的克隆福氏2a志贺菌301株染色体编码与代谢相关的酶类基因,分析结构特点并进行同源性比较,以期部分阐明其与大肠杆菌生化特性相似的分子生物学基础. 方法鸟枪法随机克隆福氏2a志贺菌染色体DNA,经探针杂交和末端核苷酸序列测定筛选出带有磷酸烯醇丙铜酸盐合成酶(pps)完整基因的阳性克隆,利用exonuclease Ⅲ制备嵌套缺失体亚克隆,采用双脱氧链末端终止法测定核苷酸序列. 结果福氏2a志贺菌301株pps基因(全长2 474bp)与大肠杆菌pps基因核苷酸及氨基酸序列的同源性分别为98.8%和97.6%.编码区上游和下游存在较多变异.福氏2a志贺菌301株pps基因与GenBank中其它菌株pps基因的同源性均低于55%. 结论福氏2a志贺菌pps基因核苷酸序列与大肠杆菌pps基因核酸序列高度同源.
关键词： 福氏2a志贺菌 磷酸烯醇丙酮酸盐合成酶 结构分析 -
不同地区福氏2a志贺菌质粒DNA多态性分析
目的对福氏2a志贺菌质粒DNA进行基因分型,提高福氏2a志贺菌痢疾暴发流行时同源克隆的鉴定分析水平.方法对93株分离自不同地区、不同时间的福氏2a志贺菌用质粒图谱和限制性内切酶图谱法进行基因分型和同源克隆鉴定.结果质粒DNA分析表明,不同地区、不同时间分离的93株福氏2a志贺菌具有13种不同的质粒DNA图谱特征(PLT1～PLT13型)和15种限制性内切酶图谱特征(ReT1～ReT15型).结论 93株来自不同地区、分离自不同时间的福氏2a志贺菌分属于15个克隆群,PLT型和ReT型分布呈现多态性特征,PLT1/ReT1型是海南、江门、蚌埠、合肥、安庆地区福氏2a志贺菌的优势克隆群组.表型相同的福氏2a志贺菌实际上是遗传结构多态性群体的集合,表型分析结果作为判断传染来源或传播途径的依据具有很大的局限性.
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福氏2a志贺菌肠毒素ShET1/ShET2基因分型在菌痢暴发研究中的应用
目的对福氏2a志贺菌肠毒素ShET1(Shigella enterotoxinl)和肠毒素ShET2(Shigella enterotoxin2)进行基因分型,提高菌痢暴发流行时同源克隆的鉴定分析水平.方法对在菌痢暴发期问分离的8株福氏2a志贺菌用PCR法检测志贺菌肠毒素ShET1/ShET2基因,进行基因分型和同源克隆鉴定.结果8株福氏2a志贺菌可分为3种基因型,即2株ShET1(-)/ShET2(+),1株ShET1(+)/ShET2(-),5株ShET1(+)/ShET2(+).结论本次菌痢暴发部分患者可能并非真正的暴发病例,之所以被归入暴发事件之中,可能是一种与暴发事件在空间、时间上偶合的散发病例.
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福氏2a志贺菌O-特异性多糖蛋白结合物的制备及其免疫原性
目的 制备福氏2a志贺菌O-特异性多糖蛋白结合物,并检测其免疫原性.方法 水解的福氏2a志贺菌O-特异性多糖在碳二亚胺[1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride,EDAC]的介导下,与己二酰二肼(adipic acid dihydrazide,ADH)缩合,制备衍生物,再与破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)结合制备福氏2a志贺菌O-特异性多糖蛋白结合物(以下简称结合物),并检测各项生化指标.分别用多糖、本实验制备结合物、氰基活化法和氨还原法制备的结合物免疫小鼠,0.2ml/只(含2μg多糖),共免疫3次,每次免疫2周后检测小鼠血清抗体滴度,并计算抗体几何平均滴度(GMT).结果 结合物游离多糖和游离蛋白含量均较低,内毒素含量合格,KD值由约0.85(多糖)降至0.02(结合物).各结合物均可诱导小鼠产生特异性抗体,且各组间GMT差异无统计学意义(P＞0.05),各针次间GMT均有显著提高(P＜0.05).结论 本实验制备的福氏2a志贺菌O-特异性多糖蛋白结合物具有良好的免疫原性,且制备方法步骤简单,反应条件温和,适合用于规模化生产.
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一起菌痢爆发的分子流行病学分析
目的探讨江门一起菌痢爆发的特异传染源.方法对8株福氏2a志贺菌进行质粒图谱及质粒限制性酶切图谱分析.结果此次菌痢爆发期间分离的8株福氏2a志贺菌具有两种不同的质粒图谱特征(PP Ⅰ、PP Ⅱ型),其中2株病例密切接触者分离株J98101(PPⅡ型)和J9826(PPⅠ型)分属不同克隆.除上述两种质粒图谱特征外,同属PP Ⅰ型质粒图谱特征的J9871具有独特的质粒限制性酶切图谱特征ReTⅡ型.结论本次爆发偶合有部分散发病例.相对于传统表型分型方法(生化反应、血清型)而言,质粒DNA分析具有更高的分辨率,它提供的遗传学信息更为丰富、直接、精细.
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福氏2a志贺菌肠毒素ShET1/ ShET2基因分型在菌痢快速诊断中的应用
目的对福氏2a志贺菌肠毒素ShET1(Shigella enterotoxin1)和肠毒素ShET2(Shigella enterotoxin2)进行基因分型,提高菌痢爆发流行时同源克隆的鉴定分析水平.方法对93株分离自不同地区,不同时间的福氏2a志贺菌用PCR法检测志贺菌肠毒素ShET1/ShET2基因,进行基因分型和同源克隆鉴定. 结果 93株福氏2a志贺菌按志贺菌肠毒素ShET1/ShET2基因可分为4种基因型,即12株ShET1(-)/ShET2(+),14株ShET1(+)/ShET2(-),59株ShET1(+)/ShET2(+),8株ShET1(-)/ShET2(-).93株福氏2a志贺菌ShET1检出率为89.24%(83/93),ShET2为65.59%(61/93).二者至少有一种基因被检出的检出率为91.39%(85/93). 结论福氏2a志贺菌的快速诊断可应用ShET1、ShET2双基因PCR检测,具有较高的敏感性与特异性.在应用多生物学标志进行福氏2a志贺菌同源克隆鉴定系统研究时,肠毒素ShET1/ShET2基因 PCR分析是不可或缺的分析指标.
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福氏2a志贺菌痢暴发的RAPD分析
目的探讨江门一起菌痢暴发的特异传染源.方法对8株福氏2a志贺菌进行RAPD分析.结果此次菌痢暴发期间分离的8株福氏2a志贺菌具有两种不同的RAPD特征(RTⅠ、RTⅡ型),其中2株病例密切接触者分离株J98101 (RTⅡ型)和J9826(RTⅠ型)分属不同克隆.结论本次暴发偶合有部分散发病例.相对于质粒分析而言,RAPD分析具有更高的分辨率,它提供的遗传学信息更为丰富、直接、精细.
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一起由福氏2a志贺菌引起集体腹泻的实验室分析
目的:调查分析此次疫情爆发的原因,找出可能的危险因素,控制疫情的蔓延.方法:依据WS287-2008<细菌性和阿米巴性痢疾诊断标准>的方法检测标本.结果:从26份患者肛拭标本中病原学方法检出2份福氏2a志贺菌,Real-time PCR检测技术检出22份福氏2a志贺菌.结论:本次疫情为一起福氏2a志贺菌感染所致的水源性菌痢暴发流行.
