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CD24分子调节四氯化碳诱导小鼠肝纤维化的实验研究
目的 探究CD24分子对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导的小鼠肝纤维化发生的调节作用及其细胞学基础.方法 建立CCl4诱导的小鼠肝纤维化模型,HE染色观察小鼠肝组织损伤情况,血清学方法检测谷丙转氨酶(ALT)表达水平.Sirius Red染色法检测小鼠肝纤维化的程度,real-time PCR方法检测肝脏组织中α-SMA、Col1a1、TGF-β1及其CD24分子的表达.Western blot 检测肝组织中α-SMA、CD24分子蛋白水平的表达.比较野生型(WT)小鼠和CD24基因敲除小鼠(CD24-/-)注射CCl4后,小鼠肝纤维化的程度.流式细胞术检测模型鼠肝内巨噬细胞的变化.ELISA方法检测M1、M2型巨噬细胞上清中TGF-β1的表达.结果 在CCl4诱导的小鼠肝纤维化模型中,肝组织中CD24 mRNA表达水平明显升高,同时,Western blot 检测CD24分子也升高.HE染色观察到CD24-/-小鼠肝中炎性细胞浸润明显多于WT小鼠,血清中ALT表达水平也明显升高.Sirius Red染色结果显示CD24-/-小鼠肝组织中纤维化严重程度高于WT小鼠,α-SMA、Col1a1等肝纤维化指标都有明显升高.流式细胞术分析表明纤维化发生后,CD24-/-小鼠的巨噬细胞明显多于WT小鼠.Real-time PCR检测发现CD24-/-小鼠肝组织中TGF-β1 mRNA的表达明显高于WT小鼠.ELISA检测结果发现CD24-/-的M2型巨噬细胞上清中,TGF-β1的分泌量多于WT的M2型巨噬细胞上清,而M1型巨噬细胞上清中无明显变化.结论 CD24分子减轻了CCl4诱导的小鼠肝纤维化,机制可能通过调节肝内M2型巨噬细胞分泌的促纤维化细胞因子TGF-β1,进而改变肝星状细胞(HSCs)的活性以减轻肝的纤维化.
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Anti-CD24抗体促进刀豆蛋白A诱导的小鼠急性肝损伤的实验研究
目的：探究anti-CD24中和抗体对刀豆蛋白A( ConA)诱导急性肝损伤的调节作用及其可能的分子机制。方法建立ConA诱导小鼠急性肝损伤的实验模型,观察anti-CD24中和抗体(200μg/鼠)和ConA(10 mg/kg)联合注射组小鼠肝脏解剖学上的改变；HE染色观察小鼠肝组织损伤程度；血清学方法检测小鼠肝功能指标谷丙转氨酶( ALT)的变化；流式细胞术分析anti-CD24中和抗体对小鼠肝内Kupffer细胞( KC)亚型分布的影响；胞内染色分析anti-CD24中和抗体对M1型KC细胞分泌TNF-α的影响。结果从解剖学上,anti-CD24中和抗体和ConA联合注射组(实验组)肝组织肿大；HE染色观察实验组小鼠肝脏出现明显的肝细胞点状坏死和炎性细胞浸润；实验组小鼠血清ALT水平显著高于对照组(P<0.001)。流式细胞术分析表明：实验组小鼠M1型KC细胞百分数显著增加(P<0.01),M2型KC细胞百分数变化不明显。胞内染色流式细胞术表明：anti-CD24中和抗体显著促进小鼠KC细胞分泌TNF-α(P<0.001)。结论 Anti-CD24中和抗体可促进ConA诱导的小鼠急性肝损伤,这可能与CD24中和抗体促进M1型KC细胞分泌TNF-α有关,其免疫机制与信号传导通路正在进一步探讨之中。
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CD24分子调节百日咳毒素诱导小鼠急性肝损伤的实验研究
目的:探讨CD24分子对百日咳毒素诱导急性肝损伤的影响及其可能的分子机制.方法:建立百日咳毒素诱导小鼠急性肝损伤的实验模型,观察anti-CD24中和抗体(200 μg/mouse)和百日咳毒素(200 ng/mouse)联合注射组小鼠的生存率,H&E染色观察小鼠肝组织损伤,血清化学方法检测小鼠谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)等肝功能的生化指标,ELISA方法检测小鼠血清中TNF-α的含量,流式细胞仪分析anti-CD24中和抗体对百日咳毒素诱导小鼠kupffer细胞(存在于肝脏中的巨噬细胞,KC)凋亡率的影响.结果:一定剂量的anti-CD24中和抗体和百日咳毒素联合注射组(实验组)生存率显著低于对照组;H&E染色观察实验组小鼠肝出血程度明显高于对照组,实验组小鼠ALT、AST等肝功能生化指标显著高于对照组(P＜0.05);ELISA检测实验组小鼠血清中TNF-α明显升高(P＜0.05);流式细胞术分析表明:anti-CD24中和抗体导致小鼠kupffer细胞坏死百分数增加.结论:CD24分子抑制百日咳毒素诱导的小鼠急性肝损伤.
