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人巨细胞病毒PPUL44蛋白核定位信号结合多肽氨基酸序列分析
目的寻找与人巨细胞病毒(HCMV)PPUL44蛋白核定位信号(NLS)具有较强结合能力的多肽,研究这些多肽的氨基酸序列特点。方法采用合成的HCMV PPUL44 NLSA和NLSB分别在一个随机多肽文库中筛选出与NLS具有结合能力的克隆,用四色荧光自动测序的方法测定上述克隆的DNA序列,对这些克隆的多肽氨基酸序列进行同源性比较,并与蛋白质文库中已知蛋白的氨基酸序列进行比较。结果与HCMV PPUL44 NLSA具有结合能力的多肽(bNLSApep)的氨基酸序列与细胞输入蛋白Importin a亚单位的氨基酸具有较高的同源序列,其中bNLSApep48氨基酸序列AVVTPVLTEILK与【mportinα亚单位的Arm7区的第18至29氨基酸序列ANIFPVLTEILQ具有极高的相似性;bNLSBpep39氨基酸序列则与lmportin a亚单位的全部8个Arm区的第10至21氨基酸的同源序列相似。结论 HCMV PPUL44 NLSA可能是lmportin α亚单位针对HCMV PPUL44蛋白的特异性识别位点,与lmportin a亚单位Arm 7区结合;而HCMV PPULA4 NLSB则为lmportin a亚单位的非特异性识别位点。本研究结果提供了lmportin a亚单位的Arm重复区是NLS结构结合区的实验证据。
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调节胞内HBX的表达对肝细胞凋亡的影响
乙型肝炎病毒X蛋白(HBX)潜在的促凋亡和抗凋亡作用一直受到争议,现通过建立一个可调控HBX蛋白表达的系统来探讨HBX对人肝细胞系L02的影响.
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乙型肝炎病毒前S2蛋白激活人酰基蛋白硫酯酶1启动子
目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)前S2蛋白(preS2)对人酰基蛋白硫酯酶1(APT1)启动子的作用。方法生物信息学方法确定人APT1启动子序列。PCR扩增人APT1启动子和HBV preS2基因,分别插入pGL3和pcDNA3.1(-)质粒构建人APT1启动子荧光素酶报告基因质粒 pGL3‐APT1和 HBV preS2真核表达质粒 pcDNA3.1(-)‐preS2。将 pGL3‐APT1和pcDNA3.1(-)‐preS2共转染人肝癌细胞系 HepG2,然后通过检测细胞荧光素酶活性来评价 preS2对人APT1基因启动子的作用。数据用独立样本 t检验分析。结果测序结果证实pcDNA3.1(-)‐preS2与pGL3‐APT1与实验设计相符。pGL3‐APT1的荧光素酶活性是阳性对照质粒pGL3‐Control的荧光素酶活性的1.2倍(P<0.01)。pcDNA3.1(-)‐preS2与pGL3‐APT1共转染HepG2细胞的荧光素酶活性为无preS2基因质粒pcDNA3.1(-)与pGL3‐APT1共转染 HepG2细胞荧光素酶活性的2.6倍(P<0.01)。结论本研究克隆的人APT1启动子序列具有高启动子活性;HBV preS2可激活人APT1启动子。