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MiR-486通过调控Sirt1调节TF-1细胞的糖代谢
目的:探索低氧条件下造血细胞miR-486表达变化及miR-486对造血细胞糖代谢的调控作用及机制.方法:利用实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)方法检测低氧条件下TF-1细胞miR-486及Sirt1的表达水平.用慢病毒技术将miR-486过表达或沉默后检测Sirt1、葡萄糖转运因子1(glucose transporter 1,Glut1)和葡萄糖转运因子4 (glucose transporter 4,Glut4)的表达水平.另外,将Sirt1沉默后分别用qRT-PCR及Western blot检测Sirt1的表达,并用qRT-PCR检测Glut1和Glut4的表达水平.结果:低氧促进miR-486的表达并抑制Sirt1的表达;过表达miR-486导致Sirt1的表达下调,而沉默miR-486可以促进Sirt1的表达;过表达miR-486上调Glut1和Glut4的表达,而沉默miR-486则抑制Glut1和Glut4的表达;沉默Sirt1可以促进Glut1和Glut4的表达.结论:MiR-486可以通过影响Sirt1调节TF-1细胞的糖代谢.
关键词： microRNA-486 SIRT1 造血细胞 糖代谢 -
过表达microRNA-486对大鼠心肌梗死后心脏功能损伤的改善
目的 观察直接心肌注射腺病毒搭载microRNA-486 (miR-486)基因对大鼠心肌梗死后心脏功能损伤的影响.方法 SD雄性大鼠,随机分成假手术组(Sham组)、心肌梗死+生理盐水组(MI组)、心肌梗死+空载腺病毒组(Ad组)、心肌梗死+miR-486腺病毒组(miR-486组).于梗死区周围心肌注射不同目标物质.于不同时间点利用实时定量聚合酶链式反应测量各组梗死周边区域miR-486表达水平.4周时行超声心动图检查,并取各组大鼠心脏行TTC染色,苏木精-依红(HE)染色,马松(Masson)染色,Tunel染色和免疫组化染色.结果 随着心肌梗死时间延长miR-486在3组内的含量有下降的趋势,但miR-486组miR-486表达量均较MI组和Ad组明显增加;超声心动图示miR-486组心功能优于MI组和Ad组;miR-486组心肌梗死面积较MI组、Ad组明显减少;Masson染色提示miR-486组、MI组和Ad组胶原容积分数(CVF)明显高于Sham组,但miR-486组CVF低于MI组和Ad组;MI组和Ad组心肌细胞凋亡指数显著上升但2组间比较差异无统计学意义,miR-486组与MI组和Ad组相比心肌细胞凋亡指数下降,Sham组未见明显心肌细胞凋亡;miR-486组微血管密度(MVD)显著高于Sham组、MI组和Ad组,且MI组、Ad组心肌MVD显著高于Sham组.结论 miR-486的心肌注射可通过抑制大鼠心肌梗死后纤维化,减少心肌细胞凋亡和促进缺血区域微血管新生,进而对心肌梗死后心脏功能有所改善.
关键词： 心肌梗死 microRNA-486 心肌纤维化 心肌细胞凋亡 微血管新生 -
MicroRNA-486和TGF-β1对人主动脉瓣膜钙化的影响及其机制研究
目的 研究microRNA-486(miRNA-486)对人主动脉瓣膜间质细胞(VICs)钙化的影响及作用机制.方法 体外培养VICs,经成骨诱导后用双荧光素报告基因检测miRNA-486靶基因.转染miR-486 mimic、miR-486 Inhibitors后,将细胞分为miR-486 mimic组、miR-486 mimic NC组、miR-486 Inhibitors组、miR-486 Inhibitors NC组.采用茜红素染色、ALP试验分析各组钙化程度,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、免疫荧光试验检测miR-486靶基因及成骨相关因子mRNA和蛋白的表达水平.结果 双荧光素报告基因检测和Western blot检测结果显示,转录生长因子-β1(TGF-β1)为潜在靶基因.茜红素染色、ALP试验结果显示,miR-486 mimic组钙化程度高于miR-486 Inhibitors组.qRT-PCR、免疫荧光试验结果表明,miR-486 mimic组TGF-β1、SMAD3 mRNA和蛋白表达水平较低(P<0.05);miR-486 mimic组RUNX2、骨钙素mRNA表达水平较miR-486 Inhibitors组高(P<0.05).结论 miR-486可通过下调TGF-β1的表达,促进RUNX2、骨钙素的表达和活性,诱导间质细胞向成骨细胞分化.
