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  • 化疗引起的骨髓基质细胞损伤对正常造血细胞的影响

    作者:李艺辉;刘喆;李欢;徐颖茜;邢海燕;田征;唐克晶;王敏;饶青

    目的:检测化疗药物柔红霉素(DNR)对小鼠骨髓基质细胞细胞系OP9的损伤作用,探索受损伤后的OP9细胞对正常造血细胞功能的影响.方法:β-gal底物探针孵育后流式细胞术检测细胞衰老;实时荧光定量PCR检测OP9细胞的分子表达;流式细胞技术检测组蛋白γ-H2AX的表达;集落形成实验观察造血细胞集落形成能力的变化.结果:DNR处理后的OP9衰老细胞比例为正常OP9衰老细胞的2.24倍(P<0.05).同正常OP9细胞相比,OP9细胞经DNR处理后IL-6和TNF-α的表达分别上升了2.73倍(P<0.01)和0.56倍(P< 0.01),而神经型钙粘附蛋白(N-cadherin),α平滑肌机动蛋白(α-SMA),重组人血管生成素1(Angpt1),骨桥蛋白(OPN)的表达分别下降了69.54% (P< 0.01),63.90%(P<0.01),87.41% (P< 0.01)和42.78%(P<0.01).同正常OP9细胞相比,DNR处理的OP9细胞同正常造血细胞共培养之后,造血细胞的集落形成能力降低了47.10%(P<0.05).流式细胞术检测显示,正常造血细胞γ-H2AX阳性率增加了2.19倍(P<0.05).结论:DNR处理后OP9细胞与正常OP9细胞相比,衰老细胞的数量明显增多;TNF-α和IL-6表达升高,N-cadherin,α-SMA,Angpt1和OPN的表达有所下降.与正常OP9细胞相比,DNR处理OP9细胞与正常造血细胞共培养之后,造血细胞的集落形成能力降低,造血细胞基因组不稳定性增加.

  • 表皮生长因子对化疗损伤小鼠骨髓基质细胞的保护作用

    作者:刁远明;詹臻;周韬;张伟伟;张李唯;董伟;张军峰

    目的 探讨表皮生长因子(EGF)对5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗损伤小鼠骨髓基质细胞(OP9)的保护作用.方法 首先建立5-FU化疗损伤OP9细胞模型并摸索EGF作用剂量.然后,将实验分为空白对照组、模型组、实验组.用25 μg/mL 5-FU作用OP9细胞作为模型组,用20 ng/mL的EGF处理25 μg/mL 5-FU损伤的OP9细胞作为实验组,并设常规培养的OP9细胞作为空白对照组.分别用CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,一氧化氮(NO)测试盒、一氧化氮合酶(NOS)测定试剂盒、Caspase-3活性检测试剂盒分别检测NO、iNOS、TNOS及Caspase-3的含量.结果 与空白对照组比较,模型组细胞存活率明显降低(P<0.01);与模型组比较,EGF可以显著保护5-FU损伤的OP9细胞,使其存活率升高(P<0.01).与空白对照组比较,模型组细胞早期凋亡率明显提高(P<0.05),Caspase-3含量明显增加(P<0.05),NO生成明显增多(P<0.05),iNOS表达明显上升(P<0.05);与模型组比较,实验组化疗损伤OP9细胞的早期凋亡率显著降低(P<0.05),Caspase-3含量明显下降(P<0.05),iNOS的表达明显受到抑制(P<0.01),NO的生成明显减少(P<0.05).结论 EGF可能通过降低Caspase-3含量抑制细胞凋亡,减少NO的过度生成,发挥其细胞保护作用.

  • Notch1突变对HSC体外分化为T/B淋巴细胞的影响

    作者:王磊;洪剑;王玉华;苗丽丽;许望翔;杨晓明;葛常辉

    目的:探讨Notch1信号传递水平对小鼠造血干细胞(HSC)体外分化为T/B淋巴细胞的影响.方法:应用表达Notch1配体Delta1的基质细胞OP9-DL与来源于小鼠胎肝和骨髓的Lin- HSC在体外共培养,检测Notch1基因突变对HSC在体外分化后B淋巴细胞或者CD4+CD8+细胞的比例.结果:Notch1基因点突变后Notch1受体结构发生改变,和特异性抗体以及配体的结合能力降低,导致信号传递能力下降.Notch1突变后,胎肝和骨髓HSC向B淋巴细胞分化过程未受影响,但是向T淋巴细胞的分化过程受到明显抑制,其中Notch1突变对胎肝HSC分化能力的影响高于骨髓HSC,分别被抑制44%和34%.结论:Notch1突变导致Notch1信号水平降低,对HSC向B淋巴细胞分化没有影响,但是能抑制向T淋巴细胞的分化.

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