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非整合型质粒重编程脐带血CD34+细胞形成诱导性多潜能干细胞的研究
本研究探索和优化非整合质粒的方法,将人脐带血来源的CD34+(CB CD34+)细胞进行重编程,建立无病毒的iPS技术体系.利用细胞核转染仪将质粒pEB-C5和pEB-Tg转入短暂培养后的CB CD34+细胞中,使其进行重编程形成iPSC,14 d后观察到2×106 CB CD34+细胞中约有200个类似ES细胞特征的克隆出现,并对产生的iPSC进行体内外多能性鉴定及细胞核型检测.结果表明,重编程后的CB CD34+细胞的多能性基因表达与ESC类似,细胞核型正常,外源基因无插入,且具有体内分化成三胚层的全能性.结论:利用非整合型质粒的方法重编程CB CD34+细胞形成iPSC,该方法无外源基因插入、重复性好、操作简单、且效率较高,为建立相对安全的iPSC提供了一个行之有效的途径,为深入探索iPSC应用于临床药物的筛选、组织工程和再生医学研究等提供了很好的研究材料.
关键词： 多潜能干细胞 脐带血CD34+细胞 非整合型质粒 -
两种非整合载体重编程人脐带血CD34+细胞形成诱导多能干细胞的研究
目的 探索两种非整合载体重编程人脐血来源的CD34+细胞形成诱导性多能干细胞(iPSCs)的方法.方法 利用细胞核转染仪分别将两组非整合质粒转入短暂培养后的脐带血CD34+细胞中,使其进行重编程形成iPSCs,14 d后两种方法均可观察到2×106个脐带血CD34+细胞中约有900个类似ES细胞特征的克隆出现,并对产生的iPSCs进行体内外多能性鉴定及细胞核型检测.结果 两种方法重编程效率基本相同,重编程形成的hiPSCs多能性基因OCT4、SOX2、NANOG的表达量与hES细胞系H1比较接近(P＞0.05),而与CD34+细胞差别较大(P＜0.05),且具有体内分化成三胚层的全能性.结论 两种非整合质粒重编程人脐带血来源的CD34+细胞形成iPSCs的方法,效率基本相同,均无外源基因插入,为建立相对安全的iPSCs提供了有效途径,为临床科研、药物筛选和再生医学研究等提供了较好的方法.
关键词： 诱导多潜能干细胞 重编程 脐带血CD34+细胞 非整合型质粒
