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携带Pdcd5基因的三调控增殖性腺病毒的构建及鉴定
本研究旨在构建一种表达pdcd5基因的三调控增殖性腺病毒.应用DNA重组技术将pdcd5cDNA插入三调控条件增殖性腺病毒SG600的E3区,SG600病毒系统是运用人端粒酶反转录酶基因启动子(hTERTp)和缺氧反应元件(HRE)分别调控病毒复制必须基因E1a和E1b的表达,去除E1a基因CR2区中24个核苷酸而构建成的靶向肿瘤细胞增殖的病毒系统.采用酶切及PCR鉴定并筛选重组成功的质粒.荧光显微镜下观察带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的重组腺病毒SG611-EGFP对白血病细胞系的感染效率.实时定量PCR检测感染重组腺病毒SG611-pdcd5的K562细胞pdcd5的表达水平.结果显示,构建的SG611-pdcd5病毒能扩增出hTERTp、HRE、pdcd5基因以及腺病毒骨架和11型纤突结基因序列.SG611-EGFP对白血病细胞系K562和MEG-01的感染效率均能达到70%以上.感染SG611-pdcd5的K562细胞pdcd5的表达水平较SG611空载体和携带pdcd5的非增殖性腺病毒(Ad-pdcd5)明显增加(P<0.001),其表达水平随感染复数增加而升高.结论:成功构建了三调控增殖性腺病毒SG611-pdcd5,后者能高效感染白血病细胞系并高效表达pdcd5,为进一步运用pdcd5靶向肿瘤细胞进行基因治疗的研究提供了基础.
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Pdcd5基因在多发性骨髓瘤患者中的异常表达
本研究探讨骨髓瘤患者骨髓细胞中pdcd5基因的表达.应用ELISA方法和实时定量逆转录-聚合酶链反应(real-time quantitative RT-PCR,RQ-RT-PCR)技术,检测多发性骨髓瘤(MM)患者及正常人PDCD5蛋白和基因的表达,比较pdcd5基因的表达与患者临床特征的关系.结果表明:45例初治及难治复发MM患者血浆PDCD5蛋白水平显著低于20例健康人和20例治疗有效患者,分别为(16.91±0.28)ng/ml,(19.11±0.29)ng/ml,(17.94±0.154)ng/ml(p均＜0.05).45例初治及难治复发MM患者骨髓细胞pdcd5基因表达量显著低于正常人,分别为0.64±0.47和1.28±1.21,p＜0.05.结论:多发性骨髓瘤患者低表达PDCD5,pdcd5基因可能参与了MM的发病机制.
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同种异体骨髓干细胞移植对急性心肌梗死后大鼠心肌细胞凋亡基因的影响
目的 探讨同种异体骨髓单个核细胞(BM-MNCs)对急性心肌梗死后心肌细胞凋亡基因的影响.方法 健康雄性Wistar大鼠40只,随机分为对照组(20只)和实验组(20只).分别将培养基和BM-MNCs悬液经心外膜下种植对照组和实验组梗死心肌周围.结果 术后4周,实验组左心室非梗死区心肌细胞凋亡指数、TNF-α含量和PDCD5 mRNA均显著低于对照组(P均<0.05).Pearson直线回归分析表明,两组左心室非梗死区心肌组织中TNF-α含量、心肌细胞凋亡指数和PDCD5 mRNA表达三者之间两两均呈正相关(P均<0.05).结论 BM-MNCs移植可能通过抑制TNF-α表达而降低PDCD5基因促凋亡作用,从而降低心肌细胞凋亡指数,抑制急性心肌梗死后心肌细胞凋亡.
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PDCD5基因功能的研究进展
PDCD5是重要的促凋亡基因,还有抑制炎症的作用.PDCD5的异常表达与多种人类疾病如肿瘤,退行性变和自身免疫病等相关.本文综述了PDCD5促进凋亡和抑制肿瘤的机制、PDCD5在肿瘤基因治疗中的应用、应用转基因小鼠研究PDCD5的功能以及应用PDCD5治疗人类疾病的方向.
