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钙离子载体对外周血单核细胞来源的树突状细胞的影响
目的: 探讨钙离子载体(calcium ionophore, CI)对外周血单核细胞来源的树突状细胞(DC)的影响.方法: 分离健康献血者外周血单核细胞, 分别加入重组人粒/单集落刺激因子(rhGM-CSF) 100 μg/L、rhGM-CSF 100 μg/L+CI 10 μg/L及rhGM-CSF+CI 各100 μg/L.体外培养40 h后, 于光镜及电镜下观察细胞的形态、流式细胞仪检测细胞的表面标志, MTT比色法检测上述分子对自体T细胞的刺激增殖作用.结果: 外周血单核细胞在GM-CSF+CI 各100 μg/L的条件下培养40 h, 就可看到典型的DC形态, 其表面CD14分子表达减少, HLA-DR、CD40、CD83及CD86分子的表达明显增高, 且具有明显刺激自体T细胞增殖的能力.结论: CI有显著加速GM-CSF诱导的外周血单核细胞向DC转化的作用.
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钙离子载体ionomycin引起内耳毛细胞胞内游离钙变化的研究
为研究听毛细胞的钙信号转导,观察了钙离子载体ionomycin引起毛细胞胞内游离钙变化的过程.分离的豚鼠耳蜗外毛细胞经钙敏荧光染料fluo-3和fura-red染色后,用激光扫描共聚焦显微镜进行检测,以fluo-3/fura-red荧光比值指示胞内游离钙浓度高低.5～10 μmol/L ionomycin作用后,外毛细胞胞内游离钙由静态比值1.69±0.59增至峰值时的2.78±1.43(-X±s,n=10,P＜0.05).外毛细胞胞内游离钙增高的时程有两种模式,一种为胞内游离钙在药物作用后10～35s即有明显增加(n=6),部分呈双相升高;另一种在药物作用后经过约200～300 s的潜伏期,胞内游离钙方出现明显增加(n＝4).一个外毛细胞在ionomycin作用后有钙波形成.ionomycin作用后外毛细胞胞内游离钙动态变化的多种模式显示了其作用机制和内耳毛细胞钙调控过程的复杂性,保证了钙在复杂的听觉外周过程中起重要的调节作用.
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抗原冲击树突状细胞介导细胞毒性T淋巴细胞特异性抗白血病作用的体外研究
目的 研究白血病来源树突状细胞体外诱导的有效方法;观察不同抗原诱导的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的抗白血病效应.方法 分离白血病患者骨髓单个核细胞,经钙离子载体A23187诱导分化.将弱酸洗脱抗原、低渗抗原分别冲击树突状细胞,96 h后树突状细胞与T细胞共同培养,采用MTT法比较CTL细胞对白血病细胞的杀伤活性.结果 骨髓来源的单个核细胞经过100ng/ml的GM-CSF、500 ng/ml钙离子载体A23187成功诱导为树突状细胞,倒置显微镜下具有树突状细胞的典型形态,流式细胞术测定其CDla、CD83,表达较诱导前明显升高,差异有统计学意义(P<0.01).弱酸洗脱法获得抗原冲击树突状细胞致敏T细胞后杀伤白血病的能力高,未负载抗原的树突状细胞致敏T细胞杀伤白血病细胞的能力低,两者差异具有统计学意义(P<0.01).结论 白血病来源的骨髓单个核细胞经GM-CSF、钙离子载体A23187能够成功诱导为树突状细胞;弱酸洗脱后获得的抗原冲击树突状细胞致敏T细胞能够获得更强的杀伤白血病细胞的能力.
