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血小板抗原基因分型与配型在血小板输注中的应用
本研究建立已知HPA基因型血小板供者库,开展相同HPA基因型血小板交叉配型后输注,防止血小板抗体的产生,解决血小板无效输注.应用PCR-SSP技术对血小板献血者和患者进行HPA基因分型,采集与患者ABO血型及HPA基因型相同血小板制剂,再加以固相凝集法配型相合后输注.结果表明,牡丹江地区HPA血型分布的遗传特征具有本地区人群特点,具有高杂合度的是HPA-15,其次是HPA-3.采用ABO血型及HPA基因型均相同加固相凝集配型相合血小板输注有效率94.4％.采用ABO血型相同随机血小板固相凝集配型相合输注有效率77.8％.结论:牡丹江地区HPA血型分布的遗传特征具有多态性,采用血小板HPA同基因型供者采集加配型输注可防止血小板免疫性抗体及输注无效的发生,采用ABO同型随机血小板加配型输注是提高血小板输注的效果、防止输注无效发生的既经济又简便的方法.
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HPA基因分型与配型在临床的应用
目的:建立血小板捐献者基因库,开展血小板基因同型的交叉配型输注,预防并解决血小板输注无效.方法:①采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)对长沙地区435名无血缘关系的18~45岁机采献血者和12名患者进行HPA1-17等位基因分型.②选取与患者ABO血型及HPA基因型相同的机采血小板,再用固相凝集法配型相合后输注,选取ABO同型原则进行随机机采血小板固相凝集法配合输注,并比较两种方法.结果:长沙地区人群HPA基因有地区特点,杂合度较高的基因依次为HPA-15、HPA-3、HPA-2.采用ABO血型和HPA基因同型加固相凝集法配合的血小板输注有效率为95.2%,采用ABO同型加随机血小板固相凝集法配合的有效率为78.2%.结论:长沙地区HPA基因具有多态性,采用ABO血型和HPA基因型均相同及固相凝集配合的机采血小板能有效提高血小板输注的有效性,防止血小板免疫性抗体产生及发生输注无效,此法值得在临床推广.
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siRNA抑制卵巢癌细胞株SKOV3 HPA基因表达的研究
目的: 研究siRNA对卵巢癌细胞株SKOV3中乙酰肝素酶(heparanase,HPA)基因表达的抑制作用.方法: 设计合成两对HPA编码基因的反向重复序列,中间间隔9个核苷酸序列,通过定向克隆至载体PGenesil-1,构建siRNA真核表达载体,经稳定转染SKOV3细胞后应用RT-PCR、real-time PCR及免疫组化技术检测卵巢癌细胞中HPA基因mRNA及蛋白表达水平的抑制情况.结果: 测序证实成功地构建了编码2条shRNA的siRNA真核表达载体.通过RT-PCR、real-time PCR及免疫组化技术检测转染siRNA的SKOV3细胞,与对照组相比,HPA mRNA表达水平和蛋白表达水平明显降低.结论:构建的PGenesil-1(+)-HPA重组质粒能有效的抑制HPA基因在卵巢癌细胞株SKOV3中的表达,为研究HPA基因在肿瘤细胞中的调节途径和肿瘤的基因治疗提供了新的方法.
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HPA基因及其表达产物与口腔颌面部肿瘤侵袭与转移的相关性研究进展
HPA是一种能降解细胞外基质和基底膜中硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPG)的特异性酶,它在促进肿瘤的新生血管形成和肿瘤细胞的侵袭与转移中起着重要作用.本文就HPA基因及其表达产物的生物学特征、生物学作用、在全身及口腔颌面部肿瘤侵袭和转移的相关性及机制,以及HPA抑制剂的临床应用前景作一综述.
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HPA-1-28w基因分型检测技术体系的建立和广西瑶族、汉族人群HPA-1-28w基因多态性研究
目的 建立HPA-1-28w基因分型检测技术体系并用以研究广西瑶族和汉族人群的血小板抗原(HPA)-1-28w基因多态性.方法 通过设计序列特异性引物和优化PCR反应条件,摸索HPA-1-28w基因分型检测技术体系,其组成包括前期已建立的HPA-I-17w多重PCR-SSP技术和新研发的HPA-18-28w PCR-SSP方法2部分组成.使用10例已预先测序确定HPA-18-28w基因型和20例已预先使用商品试剂盒检测HPA-18-21w基因型的本研究广西瑶族标本,对新研发的HPA-18-28w PCR-SSP方法做验证.应用所建立的HPA-1-28w基因检测技术对广西地区无血缘关系的1424名健康瑶族人和908名健康汉族人做HPA-1-28w基因分型和多态性分析.结果 所建立的HPA-1-28w基因分型技术系统,不仅对HPA-18-28w基因的分型结果与对验证用标本的测序分型结果完全一致,而且对HPA-18-21w基因的分型检测结果与商品试剂盒的分型结果完全一致.广西瑶族人群的HPA各等位基因频率分别为:HPA-la 0.998 2、lb 0.001 8,2a 0.874 6、2b 0.125 4,3a 0.661 5、3b 0.338 5,5a 0.996 8、5b 0.003 2,6a 0.9786、6bw 0.021 4,15a 0.407 7、15b 0.592 3;汉族人群HPA各等位基因频率分别为:HPA-la0.998 3、lb 0.001 7,2a0.957 6、2b 0.042 4,3a0.532 5、3b 0.467 5,4a 0.999 4、4b 0.000 6,5a 0.984 0、5b 0.016 0,6a 0.989 0、6bw 0.011 0,15a 0.534 1、15b 0.465 9;广西瑶族和汉族人群的HPA-7-14w、HPA-16-28w基因均以aa纯合子形式存在.在本组广西瑶族人群中发现2例罕见的HPA-6bb纯合子基因型个体,而在汉族人群中发现了1例中国人群中罕见的HPA-4ab基因型个体.结论 建立了完善的HPA-1-28w PCR-SSP基因分型检测技术体系,并成功应用于广西瑶族和汉族人群的HPA-1-28w基因筛查和分型研究;广西瑶族、汉族人群HPA基因频率分布在HPA-2,-3,-5,-15系统和HPA-6w等均不同(P＜0.05),藉此有助于了解广西瑶族和汉族人群HPA的免疫学特点.
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血小板无效输注风险度与HPA-1-16基因鉴定价值
血小板无效输注一直为输血界所关注,尤其是近10来年有关国内各地区人类血小板抗原(HPA)基因鉴定报道的日渐增多,这已成为输血领域的热点问题.笔者以血小板无效输注产生的免疫性原因为切入点,综合国内相关报道,分析中国大部分地区汉族人群随机输注血液制品后产生血小板无效输注的风险度与HPA基因多态性分布的相关性,重点阐述中国大部分地区汉族人群供受血者行HPA-1-16基因鉴定,以及进行血小板匹配性输注与建立供血者HPA基因数据库的临床实用价值.
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人类血小板抗原1-16基因与血小板输注无效风险研究
目的 探讨HPA-1-16基因多态性分布与血小板输注无效相关性.方法 应用PCR-SSP法对上海地区268名汉族人群行HPA-1-16基因检测;应用ELISA法对49名反复输血的恶性血液病患者行血小板抗-HLA-Ⅰ与抗-HPA筛查试验.结果 上海地区汉族人群HPA-1-16系统中,HPA-1-6,15系统等位基因频率1a=0.988 9,1b=0.011 1,2a=0.888 1,2b=0.111 9,3a=0.598 9,3b=0.401 1,4a=0.996 3,4b=0.003 7,5a=0.990 7,5b=0.009 3,6a=0.983 2,6b=0.016 8,15a=0.641 8,15b=0.358 2,均呈多态性分布;其余HPA-7-14,16系统等位基因均呈单线性分布.HPA-1,2,4-6,15系统主要以aa纯合子基因型频率分别为0.977 6,0.779 9,0.992 5,0.981 3,0.966 4,0.432 8.在HPA-2、3、15系统中出现bb纯合子基因型,其频率均为0.003 7,0.153 0,0.149 2外,其余系统均未出现bb纯合子基因型.另外,在HPA-1-6,15系统中出现ab杂合子基因型,其频率分别为0.022 4,0.216 4,0.496 3,0.007 5,0.018 7,0.033 6,0.418 0,以HPA-3杂合度高,其次次序为HPA-15、HPA-2.在随机输血中,HPA不合发生率以HPA-3为高(0.365 0),其次分别为HPA-15(0.354 1)、HPA-2(0.179 0).49名反复输血的恶性血液病患者中,有61.22%(30名)输血后相继出现抗-HLA-Ⅰ,而始终未检出抗-HPA.结论 上海地区汉族人群血小板输注无效的主要原因是抗-HLA-Ⅰ所致;只需检测供者与受(患)者的HPA-2、-3、-15基因相合,就可基本达到血小板匹配性输注.
