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205例急性髓系白血病患者IDH1基因突变的检测及其临床意义分析
本研究检测205例急性髓系白血病(AML)患者IDH1基因R132突变并探讨其临床特征.提取205例成人AML患者初发时外周血或骨髓单个核细胞基因组DNA,通过PCR的方法分别扩增IDH1基因的第4号外显子后进行测序比对.结果发现,205例AML患者中9例有IDH1基因R132突变,突变率4.39％,R132H型突变6例,R132L,R132G,R132S突变各1例,其中5例为AML-M2型白血病,与其他类型比较有统计学意义(P=0.002)；9例患者血小板中位数45.5×109/L,低于IDH1为野生型患者(P=0.003)；IDH1突变患者在性别、年龄、初发白细胞计数、血红蛋白水平及骨髓幼稚细胞比例上与IDH1为野生型的患者相比无明显差异(P＞0.05).9例患者中4例为正常核型,在71例CN-AML中的突变率为5.63％；合并FLT3/ITD突变5例,与IDH1为野生型患者比较有明显差异(P =0.017)；合并c-kit突变的1例；合并NPM1突变2例；无合并CEBPA突变者,与野生型比较有明显差异(P=0.031)；无合并WT1突变者.结论:IDH1基因R132突变在中国人AML中发生率为4.39％,以R132H突变为主,易在AML-M2型中发生,具有低血小板计数,易合并FLT3/ITD突变,不易合并CEBPA突变等特征.
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急性髓系白血病患者IDH1基因突变及其临床意义
目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者IDH1基因突变的发生率,并了解其临床特征及预后.方法:采用基因组DNA-PCR方法扩增IDH1基因4号外显子,应用基因测序分析其基因突变,同时检测NPM1、FLT3-TKD、FLT3-ITD、C-KIT、CEPBA、TET2及JAK2V617及MLL突变情况,对患者进行随访判定其疗效和预后.结果:192例AML患者中,13例患者被检测到IDH1基因突变,突变率为6.77％ [95％ CI(5.70％-13.38％)].IDH1基因突变测序图表现为双峰形,均为杂合突变,其中c.G395A(p.R132H)8例,c.C394T(p.R132C)4例,c.C394A(p.R132S)1例,R132H和R132C较为常见,13例均为错义突变,突变组的中位年龄为52岁,而未突变组中位年龄为40岁,两者存在着显著的差异(P =0.010).IDH1突变在M1及M2中的发生率明显高于其他FAB亚型,两者在性别、初诊外周血白细胞计数、血红蛋白量、血小板计数、外周血原始细胞、骨髓原始细胞比例之间无明显的统计学差异.IDH1基因突变与NPM1基因突变有一定的相关性,但与FLT3-TKD、FLT3-ITD、C-KIT、TET2及JAK2V617F及MLL突变并无明显的相关性.此外,IDH1突变易发生于正常核型或预后中等风险核型的患者中,11例发生在正常核型患者中,突变率为10.28％,2例发生在核型异常患者中,有明显的统计学差异.在预后中等风险核型的AML患者中,IDH1突变组化疗完全缓解率(CR)低于未突变组,同时IDH1突变患者3年总生存率(OS)低于未突变患者,有明显统计学差异(P＜0.05).结论:IDH1基因突变更易存在于年龄偏大AML患者中,在预后中等风险核型患者中IDH1基因突变与患者的临床特点、疗效有一定相关性,提示是预后不良的分子学标志.
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mIDH1真核表达载体的构建及其对U87细胞增殖的影响
目的 构建人mIDH1基因的真核表达载体及U87稳转细胞系,观察mIDH1对胶质瘤U87细胞体内外增殖的影响.方法 以IDHI-cDNA为模板,采用PCR方法扩增IDH1片段,IDH1片段经双酶切、连接重组至真核表达载体p-EGFP-C1,构建IDH1野生型(wIDH1)重组质粒,利用点突变技术通过IDH1真核表达载体构建突变型IDH1(mIDH1)真核表达载体,并通过双酶切产物明胶电泳及DNA测序鉴定该重组质粒.Lip2000脂质体介导突变型IDH1转染U87胶质瘤细胞,利用G418筛选构建稳定转染p-EGFP-mIDH1真核表达载体的单克隆细胞株,构建稳转细胞系,CCK-8法检测U87细胞体外增殖能力,裸鼠成瘤实验检测mIDH1细胞系与对照U87细胞系的体内增殖. 结果 mIDH1重组质粒经双酶切及测序鉴定证明mIDH1重组质粒构建成功,顺利转染U87胶质瘤细胞并高效表达,体外可抑制胶质瘤细胞的增殖,体内可减缓裸鼠皮下成瘤速度.结论 p-EGFP-mIDH1真核表达载体可在U87胶质瘤细胞系中稳定表达,并可抑制胶质瘤细胞的增殖.
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高分辨率熔解曲线分析法检测胶质瘤中异柠檬酸脱氢酶1基因突变
目的 采用高分辨率溶解曲线分析法检测胶质瘤中异柠檬酸脱氢酶1(IDHl)基因突变,探讨其应用于临床检测的可行性.方法 首先采用高分辨率溶解曲线分析法检测9例胶质瘤患者中IDH1基因·的突变情况,并以直接测序法对结果进行验证.结果 通过高分辨率熔解曲线分析法,确认9例胶质瘤患者中有6例发生了IDH1突变,其中5例为R132H(CGT＞ CAT),l例为R132C(CGT＞ TGT),其余检测均为野生型.经直接测序对以上9例标本进行验证,证实所有患者的突变情况与高分辨率熔解曲线分析法的结果一致.结论 应用高分辨率熔解曲线分析法检测临床样本IDH1突变与直接测序法比较具有操作简便、快速、结果准确的优点,适合在临床开展.
关键词： 胶质瘤 突变 IDH1基因 高分辨率熔解曲线分析 -
血液肿瘤患者IDH1/IDH2基因突变发生率及其血液病分布特点研究
目的 研究血液肿瘤患者IDH1/IDH2基因突变发生率和其血液病的分布特点.方法 选取300例不同病情的血液患者骨髓的样品,其中245例是血液肿瘤患者,55例是非血液肿瘤患者,对比检查IDH2和IDH1基因是否在血液肿瘤患者中有突变行为.结果 实验共发现了7个错义的突变基因,其中2个为IDH2基因突变,4个为IDH1基因突变;还有2个IDH1同义突变.4个IDH1的突变类型是:199M、R132C、R131D及R132H,前3个突变患者都出现在3例急性髓系的白血病患者中,后1例出现在急性淋巴细胞的白血病患者中.2个IDH2的错义突变类型是:P167R和R172K,这2例也都出现在急性髓系的白血病患者中.在发生IDH1错义基因突变的4例患者中,其体内白细胞的计数明显升高,且患者年龄均大于60岁.在发生IDH2基因突变的2例患者中,其体内白细胞的计数明显降低,且患者的年龄均小于60岁.结论 96例的急性白血病患者的检测中,共发现了9例突变患者,其IDH的突变率是9.3％,且7例发生于急性髓系的白血病患者中,说明急性髓系的白血病的发病和IDH的突变有紧密的联系.
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PTEN和mTOR蛋白在IDH1基因分型胶质母细胞瘤及P13K/Akt/mTOR信号通路中的表达及其相关性
目的 研究P13K/Akt/mTOR信号通路中PTEN和mTOR蛋白在IDH1基因分型-突变型与野生型胶质母细胞瘤中的表达及意义.方法 采用免疫组化方法检测胶质母细胞瘤手术后组织标本共52例(其中IDH1突变型胶质母细胞瘤10例,IDH1野生型胶质母细胞瘤42例),检测PTEN和mTOR蛋白在这两种不同基因分型胶质母细胞瘤中的表达情隋况及相关性.结果 PTEN蛋白在IDH1突变型与野生型胶质母细胞瘤的表达率分别为20.00％ (2/10)和73.81％(31/42),mTOR蛋白的表达率分别为70.00％(7/10)及35.71％ (15/42),PTEN和mTOR蛋白在IDH1两种基因分型的胶质母细胞瘤的表达差异均有统计学意义(P ＜0.01或P＜0.05).PTEN和mTOR的表达呈负相关关系(r=-0.724,P＜0.0l).结论 PI3K/AKT/mTOR信号转导通路中两个位点调节因子PTEN及mTOR在IDH1突变型与野生型GBM中分别表达降低及增高,且两种蛋白表达呈负相关的关系,提示PTEN和mTOR在IDH1突变型与野生型胶质母细胞瘤的分子通路中扮演着重要的调控作用.
