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血吸虫32 ku天冬酰胺内肽酶疫苗的研究现状
血吸虫病是一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病,主要流行于亚洲、非洲和拉丁美洲等地区.采用疫苗防治该病是当前研究的热点.本文对血吸虫32 ku天冬酰胺内肽酶的蛋白质疫苗、DNA疫苗和重组分枝杆菌疫苗等方面的研究现状进行了综述.
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兔颈动脉粥样硬化狭窄模型的建立及天冬酰胺内肽酶的表达
目的：探讨兔颈动脉粥样硬化（AS）狭窄模型中天冬酰胺内肽酶（AEP）的表达。方法将14只新西兰大白兔按随机数字表法分成模型组（8只）和假手术组（6只），模型组通过手术损伤颈动脉内膜。术后两组均给予含镁高脂饲料饲养兔10周，每2周进行体质量称量及血脂检验，术后第5周和第10周末均行MRI观察斑块形成及管腔狭窄情况，术后第10周末收集标本后切片，苏木素-伊红（HE）染色观察病理变化，免疫组化染色分析AEP表达水平。结果模型组1只兔损伤颈动脉死亡。高脂饲养后，两组兔体质量、血脂水平均较术前升高（ P ＜0．01）。模型组术后第5周和第10周末两次MRI示管腔狭窄率分别为（16±11）％和（53±20）％，组内差异有统计学意义（t ＝－4.83，P ＜0.01）；假手术组两次MRI均未见管腔狭窄。模型组HE染色可见内膜增生，AS斑块形成，斑块内脂质沉积，巨噬细胞、平滑肌细胞迁移浸润形成泡沫细胞；假手术组未见AS形成。AEP在模型组兔颈动脉组织中高表达，在假手术组中很少表达，吸光度值分别为0.0720±0.0280和0.0020±0.0009，差异有统计学意义（t ＝6.61，P ＜0.01）。结论通过损伤颈动脉内膜联合含镁高脂饲料饲养的方法可以确切、可靠、迅速地建立兔颈动脉AS狭窄模型；AEP在颈动脉AS性狭窄病变中呈高表达，可能参与了AS斑块的形成。
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肿瘤微环境双重响应性的智能型蛋白毒素给药系统的构建和表征
目的 利用蛋白重组技术和PEG定点修饰技术,制备具有肿瘤微环境双重响应性的智能型蛋白毒素给药系统.方法 利用基因重组技术,在天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)的C端引入天冬酰胺内肽酶(legumain)的底物天冬酰胺肽段和半胱氨酸残基,将所构建的突变体转化到大肠杆菌中表达目的蛋白并纯化.进一步将重组蛋白末端的半胱氨酸与具有巯基反应性的mPEG-Hz-Mal偶联合成TCS-Asn10-Hz-PEG,采用弱阳离子交换柱纯化TCS-Asn10-Hz-PEG,并在体外考察了TCS-Asn 10-Hz-PEG的酸敏感性和酶敏感性.结果 成功制备、分离和纯化得到了TC S-Asn 10-Cys,完成了mPEG-Hz-Mal 与TCS-Asn10-Cys的定点偶联,得到智能型蛋白毒素给药系统TCS-Asn 10-Hz-PEG.TCS-Asn10-Hz-PEG在体外pH 5.6的介质中和天冬酰胺内肽酶的作用下,能够水解或酶解释放出TCS,具有酸敏感特性和酶敏感特性.结论 本实验设计的蛋白毒素给药系统,具有酸敏感和酶敏感双重响应特性.
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血清AEP水平检测在脑胶质瘤诊断中的临床意义
目的 探讨血清天冬酰胺内肽酶水平检测对于脑胶质瘤诊断的临床意义.方法 选取初次诊断的脑胶质瘤患者74例及正常对照患者30例,于治疗前提取血清,用ELISA法测定血清AEP浓度.结果 通过统计学分析来推测血清天冬酰胺内肽酶水平在脑胶质瘤诊断中的作用.结果对照组与胶质瘤组、低级别与高级别胶质瘤组、对照组与低级别胶质瘤组、对照组与高级别胶质瘤组血清AEP水平均有显著性差异(P＜o.05),ROC曲线分析AEP诊断脑胶质瘤组和正常对照组时,曲线下面积(area under curve,AUC)为0.946,临界值161.08ng/ml,敏感度85.1％,特异度93.3％.血清AEP水平的高低是脑胶质瘤发生的危险因素,OR值为80.18(95％可信区间为16.66～385.80).结论 血清AEP水平可作为诊断脑胶质瘤的肿瘤标志物,对于胶质瘤的诊断有高度敏感性和特异性,可以作为胶质瘤临床诊断的方法之一.
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天冬酰胺内肽酶在兔糖尿病动脉血管狭窄模型中的表达水平研究
目的 研究天冬酰胺内肽酶(AEP)在兔糖尿病动脉血管狭窄模型建立中的表达水平和临床意义.方法 选取30只新西兰兔作为试验动物,随机分为3组,每组10只.A组普通饲料喂养10周,B组进行高糖高脂饲料喂养10周,C局部股动脉包裹IL-1β后,行高糖高脂饲料饲养10周.所有试验用兔均在饲养10周后行股动脉造影.在饲养完成前后检测血清AEP水平,记录饲养前后股动脉内径、血管内膜厚度及泡沫细胞阳性面积.结果 A、B、C3组兔模型喂养10周时血清AEP水平差异有统计学意义(P＜0.05),其中C组AEP水平显著高于A、B组,差异有统计学意义(P＜0.05).C组喂养后FBG与股动脉内径均显著低于A、B组,差异有统计学意义(P＜0.05).动脉内径差值与动脉内膜厚度差值负相关(r=-0.753,P=0.000).结论 IL-1β可用于兔糖尿病股动脉粥样硬化血管狭窄模型的建立,AEP可能参与兔糖尿病动脉粥样硬化病变过程.
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CBZ-AAN-Dox新前药的计算机辅助设计及合成与活性检测
目的 探究一种以多柔比星为母药的低毒新型抗肿瘤前药.方法 采用Sybyl 8.0的Sketch模块进行前药的计算机辅助设计,通过多种短肽共价偶联多柔比星形成前药库.虚拟筛选后用化学方法合成前药,通过硅胶柱和凝胶柱进行纯化,HPLC法检测与鉴定,体外特异性酶解试验及细胞毒性试验进行活性检测.结果 计算机辅助药物设计所得到的新型前药N-苄氧羰基-丙氨酰-丙氨酰-天冬酰胺-多柔比星物理及化学参数较好,其化学合成产物纯度为94％,其天冬酰胺内肽酶酶解Km和Vmax分别为(68±7)μmol/L,(3.9±0.6)μmol/(L·s),对2种体外培养肿瘤细胞株的毒性作用约降低了约90％.结论 计算机辅助药物设计在指导多柔比星前药合成过程中具有参考意义;前药合成与分离纯化方法简单可靠,分离效果好;新合成前药细胞毒性降低,可被天冬酰胺内肽酶酶解.
