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结核分枝杆菌感染小鼠巨噬细胞中LincRNA Cox2的作用研究
目的 探讨结核分歧杆菌感染巨噬细胞中lincRNA-cox2的表达及作用机制. 方法 应用实时定量PCR检测感染牛分枝杆菌(BCG,MOI≈10∶1)的小鼠巨噬细胞(RAW264.7)中lincRNA-cox2的差异表达.对感染BCG的RAW 264.7细胞给予p38MAPK通路特异性抑制剂SB203580(10 μmol/L)、JNK通路特异性抑制剂SP600125(10μmol/L)、ERK通路特异性抑制剂U0126(10 μmol/L),以确定lincRNA-cox2起作用的信号通路.用小分子RNA干扰真核载体转染技术诱导lincRNA-cox2沉默,检测结核菌感染后相关炎症因子TNF-α的差异表达. 结果 RAW264.7细胞感染BCG后lincRNA-cox2显著上调(t值分别为:0.9771,1.650,P=0.0391,P＜0.05,差异有统计学意义);阻断p38MAPK通路和JNK通路后lincRNA-cox2显著下调(p38MAPK通路抑制剂组t值分别为:3.777,0.5659,P=0.0483,P＜0.05;JNK阻断组t值分别为:3.777,0.4998,P=0.0458,P＜0.05,差异有统计学意义);沉默lincRNA-cox2的RAW264.7细胞感染BCG后TNF-α水平显著降低(t值分别为:318.8,64.42,74.68,P值分别为0.0186,0.0226,P＜0.05,差异有统计学意义). 结论 结核菌感染后可能通过激活p38MAPK、JNK通路上调RAW264.7细胞中lin-cRNA cox2的表达,进而促进炎症因子TNF-a的释放,起到控制结核感染的作用,可以为结核病在基因水平上的诊断和治疗提供参考.
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lincRNA-cox2对小鼠RAW264.7巨噬细胞极化的影响
目的：观察小鼠RAW264.7巨噬细胞不同极化状态下lincRNA-cox2表达变化,初步探讨lincRNA-cox2对巨噬细胞极化的影响。方法以IFN-γ/LPS刺激小鼠RAW264.7细胞诱导M1型极化,IL-4刺激RAW264.7细胞诱导M2型极化,采用实时荧光定量PCR( RT-PCR)检测各组细胞lincRNA-cox2的表达。设计并合成针对 lincRNA-cox2基因的 siRNA 及无关序列,脂质体转染RAW264.7细胞,48 h后分别加入IFN-γ/LPS或IL-4继续诱导M1/M2型巨噬细胞,采用酶联免疫试验( ELISA)检测细胞因子IL-12及IL-10的分泌量；RT-PCR检测与巨噬细胞极化相关的iNOS、TNF-α、Arg-1、Fizz1的表达。将lincRNA-cox2-siRNA转染M1型巨噬细胞,检测其对M1极化表型的影响。结果 RT-PCR结果显示,M1型巨噬细胞的lincRNA-cox2表达水平显著高于未极化细胞和M2型巨噬细胞。与对照组相比,lincRNA-cox2-siRNA转染RAW264.7细胞后,经IFN-γ/LPS诱导的M1型巨噬细胞中IL-12分泌降低, iNOS和TNF-α表达下降；而经IL-4诱导的巨噬细胞中IL-10产生增加, Arg-1和Fizz1表达升高。 lincRNA-cox2-siRNA转染M1型巨噬细胞后,IL-12分泌降低,IL-10产生增加,其特点向M2样巨噬细胞转换。结论 lincRNA-cox2参与调控小鼠巨噬细胞的极化,促进M1型巨噬细胞极化,抑制M2型巨噬细胞极化。
关键词： 巨噬细胞极化 长链非编码RNA lincRNA-cox2 -
人参皂苷Rg1对LPS致心肌细胞损伤的保护作用及其对细胞lincRNA-COX2表达的影响
目的 探讨人参皂苷Rg1对脂多糖(LPS)诱导的小鼠心肌细胞损伤的保护作用及其对促炎分子lincRNA-COX2表达的影响.方法 分离培养原代BALB/c乳鼠的心肌细胞,用终浓度为25、50、100 μmol/L人参皂苷Rg1预处理12 h后,分别加入终浓度为10 mg/L的LPS刺激6 h(25、50、100 μmol/L人参皂苷Rg1+LPS组),以单纯10 μg/L LPS(LPS组)、未经人参皂苷Rg1及LPS处理(对照组)作对照,ELISA法检测心肌细胞培养上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)蛋白分泌;MTT法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞活性氧(ROS)生成;RT-qPCR法检测细胞内lincRNA-COX2表达变化情况.结果 与LPS组相比,25、50、100 μmol/L人参皂苷Rg1+LPS组细胞培养上清液中的TNF-α、IL-6蛋白浓度呈剂量依赖性地减少,心肌细胞中lincRNA-COX2表达被抑制,心肌细胞的存活率相应提高.结论 人参皂苷Rg1能够保护LPS所致小鼠心肌细胞损伤,其机制可能与抑制炎症因子TNF-α、IL-6分泌,下调促炎因子lincRNA-COX2表达有关.
关键词： 人参皂苷Rg1 炎症因子 心肌细胞 lincRNA-cox2
