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RNA稳定剂文献资料
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RNA稳定剂在显微切割抽提组织总RNA中的应用
随着人类基因组计划的完成以及cDNA微阵列等高通量技术的飞速发展,对特定组织细胞基因表达谱的研究,必需获取相应组织细胞的RNA,显微切割为获取特定RNA提供了可靠的工具[1,2].不同于常规RNA抽提技术,显微切割需经过冷冻切片、HE染色和显微镜下切割等众多在常温下操作的步骤,容易引起RNA降解.本研究旨在探讨显微切割时防止RNA降解的佳方法.
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棘阿米巴原虫全长cDNA文库的构建
目的 快速构建棘阿米巴滋养体全长cDNA文库,为棘阿米巴滋养体抗原的筛选和基因结构研究奠定基础.方法 以棘阿米巴滋养体分离株总RNA为模板,以经修饰的SMART寡聚核苷酸引物逆转录合成单链cDNA,采用长距PCR(long-Distance PCR,LD PCR)方法扩增得到双链cDNA,经蛋白酶K消化和Sf Ⅰ酶切后通过色谱柱CHROMA SPON-400按分子质量进行分离,进行1％琼脂糖凝胶电泳鉴定,回收纯化0.4～2.5 kb分离产物.取1μl PCR产物与λ噬菌体连接,以XL1-BLUE为受体菌扩增得到cDNA文库,分别用梯度法和随机测序法检测文库滴度与重组率. 结果 成功构建棘阿米巴cDNA文库,文库滴度为3.85×107 pfu/ml,插入片段大小在0.4～2.5 kb之间,重组率为100％(20/20). 结论 棘阿米巴滋养cDNA文库构建成功,为棘阿米巴滋养体抗原的筛选和基因结构研究奠定了基础.
