首页 > 文献资料
-
巢式-PCR检测蜱体中土拉弗氏菌的fopA基因及血清学调查
为调查陕西省部分地区是否存在土拉弗氏菌病,采集子午岭山区的的蜱标本及人群血标本.蜱标本提取体内细菌DNA,采用巢式PCR法进行检测并对阳性标本进行基因分型;对人群血清采用免疫吸附实验进行血清学抗体检测;统计处理应用SPSS软件.结果在富县、陇县共采集3个蜱种1 116只蜱标本,其中达吉斯坦革蜱、日本血蜱、嗜群血蜱3个蜱种25只蜱标本检测到土拉弗氏菌的fopA基因,总阳性率为2.24％;不同蜱种阳性率存在差异,以日本血蜱的阳性率高(15.39％).从25份阳性标本中选取10份进行序列测序,获得核酸序列与土拉弗氏菌B亚种菌株序列AF247690.2 100％同源.对阳性标本进行SSTR9区域扩增,共有6种不同的拷贝数,其中以拷贝数9的占多数(40.00％).利用MEGA (4.0)软件进行聚类分析显示主要分为两大群.检测当地居民血清标本725份,检测出土拉弗氏菌病血清IgG抗体阳性者37份,阳性率5.10％.本文首次证实陕西省土拉弗氏菌病的存在,对预防控制具有重要指导意义.
-
巢式PCR扩增IS6110技术用于诊断结核病的实验研究
目的:探讨巢式聚合酶链反应(PCR)技术在部队结核病患者诊断中的实用价值.方法:根据结核分枝杆菌特有的插入序列IS6110基因序列,设计内外引物组成套式PCR,用于结核分枝杆菌DNA的检测,并与Bactec快速培养法和涂片抗酸染色镜检法比较.结果:套式PCR对分枝杆菌参考菌株的检测,仅人型和牛型结核分枝杆菌呈阳性.检测24例非结核病患者痰标本呈阴性.以巢式-PCR,Bactec快速培养法和抗酸染色涂片法分别检测116份可疑结核病患者痰标本,阳性率分别为67.2%,40.5%,37.1%.培养与涂片阳性者,PCR检测均呈阳性,巢式-PCR检出率明显高于后两法结果,且有显著性差异(P＜0.01).结论:巢式-PCR用于部队结核病患者的实验室诊断,具有灵敏、特异、准确、快速的特点,有较好的实用价值.
-
EB病毒基因BARF1在鼻咽癌中的表达及其意义
目的 EB病毒与鼻咽癌(特别是低分化鳞癌)密切相关.BARF1基因是EBV裂解期中的早期基因,本研究通过检测BARF1基因在鼻咽癌组织中的表达,希望能进一步揭示EB病毒与鼻咽癌的关系及致癌的可能机制.方法对经病理确诊的47例鼻咽低分化鳞癌病人分别取癌组织、癌旁组织及相对正常鼻咽黏膜和 13例其他头颈部恶性肿瘤癌组织及8例正常人鼻咽黏膜组织(均证实有EB病毒潜伏感染),采用巢式-PCR技术检测BARF1在这些组织中的表达情况.结果鼻咽癌组织BARF1基因表达率为 91.5%(43/47),其中39例相对强表达,4例弱表达;癌旁组织BARF1基因表达率为 46.8%(22/47),其中11例相对强表达,11例弱表达;相对正常黏膜BARF1基因表达率为 6.4%(3/47),3例均为弱表达;携带EB病毒的其他头颈部恶性肿瘤组织、正常人鼻咽黏膜组织均未检测到BARF1基因表达.结论从相对正常鼻咽黏膜到癌旁组织再到鼻咽癌组织BARF1基因的表达趋势为从不表达到表达,从弱表达到强表达.说明EB病毒与鼻咽癌的发生确实存在密切相关性;提示启动BARF1基因的表达有可能是EB病毒致鼻咽癌的重要条件之一.
-
巢式PCR法构建人细胞色素P4501A1基因cDNA全长T载体
目的构建含限制性内切酶位点KpnI,XhoI的人细胞色素氧化酶(CYP1A1)基因cDNA全长的pGEM-T载体.方法从培养的MCF-7细胞中抽提总RNA并根据人细胞色素P4501A1(CYP1A1,GeneBank NM000499)开放阅读框设计两对引物,采用巢式-PCR方法扩增CYP1A1 mRNA全长,凝胶分离并回收扩增的DNA片断,与T载体连接后转化大肠埃希菌DH5a,挑选3个阳性克隆,扩增培养后抽提重组质粒并进行PCR及酶切鉴定,再行测序分析.结果重组质粒PCR扩增得到1568的片段,KpnI,XhoI限制性内切酶消化质粒证实目的片断成功插入至载体,测序分析也进一步证明了目的片段与GeneBank中CYP1A1 mRNA的序列同源性为99.9%.结论该实验成功地构建了含CYP1A1基因cDNA全长区域的T载体克隆,巢式-PCR是一种简便、特异、灵敏的方法,可用于基因的检测和载体的构建.
关键词： 巢式-PCR 细胞色素P450基因 T载体 测序分析 -
马内菲青霉菌的鉴定及药敏分析
目的 设计马内菲青霉菌特异性引物,探讨马内菲青霉菌病早期诊断的方法及抗生素治疗的药物选择.方法 马内菲青霉菌按常规方法放在25℃和37℃进行真菌培养;参照NCCLS M27-A,M38-P对3株马内菲青霉菌的酵母相和菌丝相进行小抑菌浓度(MIC)测定;PCR的鉴定采用马内菲青霉菌18S rRNA的特征序列,设计内引物Pm1,Pm2和外引物FSF,FSR进行巢式-PCR扩增,并对产物进行产物鉴定.结果 马内菲青霉菌为双相性真菌,25℃为青霉相,在沙保弱琼脂平板上产生具有特征性的红色色素,37℃为酵母相,无色素产生;微量稀释法比较马内菲青霉菌在25℃菌丝相和37℃酵母相时的MIC值,结果显示伊曲康唑敏感性强,其次是酮康唑、5-氟胞嘧啶和氟康唑,弱的为二性霉素B;3株马内菲青霉菌经巢式-PCR扩增后大约有400 bp片段,其他真菌如白色假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、曲霉菌则没有.结论 巢式-PCR可以快速鉴定马内菲青霉菌,48 h培养的单个菌落、10 h可以鉴定出结果,而培养则需4～7 d,巢式-PCR对马内菲青霉菌病早期诊断有重要的临床指导意义.医生应结合临床症状及早应用抗真菌药物.
