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附子理中汤通过激活AMPK通路及抑制NF-κBp65通路降低非酒精性脂肪肝大鼠肝脏损伤
探究附子理中汤(Fuzi Lizhong decoction,FZLZD)对非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠肝脏的保护作用及相关机制.32只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为4组,对照组,模型组,易善复(Yishanfu,YSF)组(200 mg·kg-1 ·d-1),FZLZD组(10 g·kg-1 ·d-1),每组8只.采用脂肪乳持续4周灌胃制备大鼠非酒精性脂肪肝模型.确定造模成功后,各给药组大鼠持续给药4周.8周后处死各组大鼠,HE染色检测大鼠肝组织病理学变化;采用全自动生化分析仪检测各组大鼠空腹血清中血脂含量(总胆固醇,T-Chol;甘油三酯,TG;低密度脂蛋白胆固醇,LDL-C;高密度脂蛋白胆固醇,HDL-C)以及肝功能(丙氨酸氨基转移酶,ALT;总蛋白,TP;白蛋白,ALB);称重法计算各组大鼠肝指数;酶联免疫吸附反应(ELISA)检测肝组织中炎症因子TNF-α,IL-6的分泌水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肝组织中脂肪代谢相关因子SREBP-1c,FASN的mRNA水平;Western blot法检测肝组织中p-AMPK,p-NF-κBp65蛋白表达量.结果显示,与对照组比较,模型组大鼠肝组织出现明显的病理学变化:肝小叶轮廓不清,肝细胞呈弥漫性脂肪样空泡病变,并呈炎性浸润,胞核固缩、着色深;与模型组比较,各治疗组大鼠肝组织病变均出现显著缓解,尤其以FZLZD组缓解程度为显著.与对照组比较,模型组大鼠血清中血脂(T-Chol,TG,LDL-C,HDL-C)、肝功能(ALT,TP,ALB)及肝指数均显著升高(P＜0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠血脂及肝功能各指标均显著降低(P＜0.01),FZLZD组大鼠肝指数显著降低(P＜0.05),而YSF组大鼠肝指数无显著变化.与对照组比较,模型组大鼠肝组织中炎症因子TNF-α,IL-6分泌水平及SREBP-1c,FASN的mRNA水平均显著升高(P＜0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠肝组织中炎症因子TNF-α,IL-6分泌水平及SREBP-1c,FASN的mRNA水平均显著降低(P＜0.01);与YSF组比较,FZLZD组TNF-α,IL-6分泌水平及SREBP-1c,FASN的mRNA水平差异显著(P＜0.01).与模型组比较,FZLZD组大鼠肝组织中p-AMPK蛋白表达量显著升高(P＜0.01),而p-NF-κBp65蛋白表达量显著降低(P＜0.01).附子理中汤能显著改善NAFLD大鼠肝脏病理变化,降低血脂含量,改善肝功能,降低肝指数,这可能与其激活AMPK通路进而抑制SREBP-1c,FASN的表达以及抑制NF-κBp65通路进而降低炎症因子的释放密切相关.
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丹参酮ⅡA对乳腺癌细胞MCF10DCIS.com抑制作用的实验研究
目的:研究丹参酮ⅡA(TSN)对乳腺癌细胞MCF10DCIS.com的抑制作用及其与AMPK通路的相关性.方法:培养乳腺癌细胞MCF10DCIS.com,给与不同浓度丹参酮ⅡA(0.0001～1.0 mmol/L)进行干预,通过MTT实验测定TSN对细胞活力的影响,细胞克隆实验测定TSN对细胞增殖的影响,通过蛋白免疫印迹法测定AMPK通路相关蛋白的表达.结果:0.1～1.0 mmol/L的TSN培养乳腺癌细胞MCF10DCIS.com的细胞活力值分别为(61.1±9.4)％和(21.7±4.3)％,克隆实验细胞团块数的相对比值分别为(58.2±8.7)％和(16.4±5.7)％,与对照组相比均有统计学意义(均P＜0.05).0.01mmol/L丹参酮ⅡA处理后,Sestrin2与p-AMPK蛋白相对表达值分别为(30.4±4.7)％和(32.5±5.7)％,与对照组相比均有显著统计学意义(P＜0.01)结论:丹参酮ⅡA对乳腺癌细胞MCF10DCIS.com的增殖具有抑制作用,其机制可能与AMPK通路的激活相关.
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香叶木素对非酒精性脂肪肝病幼鼠的保护作用
目的 探索香叶木素对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝病幼鼠的影响.方法 高脂饮食诱导非酒精性脂肪肝病大鼠模型.酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血脂及炎症因子水平.苏木素伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick labeling,TUNEL)染色分析肝脏组织病变及细胞凋亡.蛋白印记检测p-AMPKα1,AMPKα1,CPT-1,PPAR-α,SREBP-1c,FAS,p-P38,P38,p-AKT,AKT,p-AKT,AKT表达.结果 与对照组相比,高脂饮食组大鼠TC,TG,LDL-c水平升高,HDL-c水平下降(P＜0.01).与高脂饮食组相比,香叶木素(10,20,50 mg/kg)组大鼠TC,TG,LDL-c水平降低,HDL-c水平上升(P＜0.01).香叶木素可缓解高脂饮食诱导的肝脏组织病变.高脂饮食组大鼠肝脏组织细胞凋亡高于对照组(P＜0.01).香叶木素(10,20,50 mg/kg)组大鼠肝脏组织细胞凋亡低于高脂饮食组(P＜0.01).高脂饮食组大鼠p-AMPKα1,CPT-1和PPAR-α表达低于对照组(P＜0.01).与高脂饮食组相比,香叶木素(20,50 mg/kg)组大鼠p-AMPKα1,CPT-1和PPAR-α表达升高(P＜0.01).高脂饮食组大鼠SREBP-1c和FAS表达高于对照组(P＜0.01).与高脂饮食组相比,香叶木素(10,20,50 mg/kg)组大鼠SREBP-1c和FAS表达下降(P＜0.01).而且,高脂饮食组大鼠IL-6,IL-1β和TNF-α水平高于对照组(P＜0.01).与高脂饮食组相比,香叶木素(20,50 mg/kg)组大鼠IL-6,IL-1β和TNF-α水平下降(P＜0.01).另外,香叶木素可逆转compound C对AMPK通路的抑制作用.结论 香叶木素激活AMPK通路减轻高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝病幼鼠脂质代谢异常,肝脏组织病变,细胞凋亡及炎症反应.
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2-脱氧葡萄糖通过激活AMPK通路抑制类风湿关节炎血管新生
目的 通过观察2-脱氧葡萄糖(2-DG)对佐剂关节炎(AA)大鼠滑膜组织血管翳形成的抑制及对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移和体外成管的作用,探讨2-DG抑制类风湿关节炎血管新生的机制.方法 采用滑膜病理组织HE染色观察滑膜组织血管翳形成;CCK-8法检测HUVEC的细胞增殖活性;Transwell小室法检测HUVEC的迁移;体外基质胶成管实验检测HUVEC的成管数;Western blot检测p-AMPK以及抗凋亡蛋白Bel-2的表达;使用AMPK阻断剂CompoundC阻断HUVEC细胞的AMPK信号通路.结果 2-DG(200 mg/kg)明显减轻AA大鼠滑膜组织血管翳生成(P＜0.01);体外实验结果显示,2-DG(0.5 mmol/L和或5 mmol/L)可明显抑制HUVEC的增殖、迁移和体外成管(P＜0.01或P＜0.001),加入AMPK受体阻断剂Compound C(5 μmol/L),2-DG对HUVEC的活化的抑制作用被明显阻断(P＜0.01);Western blot结果显示2-DG(5 mmol/L)可以增加P-AMPK的蛋白表达,减少Bcl-2的蛋白表达,差异有统计学意义(P.＜0.05).结论 2-DG可能通过激活AMPK通路减少Bcl-2的表达抑制内皮细胞增殖、迁移和体外成管,从而抑制类风湿关节炎血管新生.
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枸杞多糖通过上调脂联素的表达缓解小鼠动脉粥样硬化
目的 探究枸杞多糖(LBP)对动脉粥样硬化(AS)小鼠体内脂联素(APN)表达的调控及其调脂抗炎作用机制.方法 普通饲料喂养的C57BL/6J小鼠为对照组,采用高胆固醇饲料喂养ApoE-/-小鼠成功建立AS模型,随机分为模型组和3个LBP组(高、中、低剂量分别为100、50、25 mg/kg).继续喂养4周后,取主动脉血和组织,分别检测血脂、炎症因子、内皮素-1 (ET-1)、APN及其受体(AdipoRl)、AMPK通路相关指标的表达;3T3-L1前脂肪细胞经诱导分化后分为对照组、LBP组和LBP+BML-275组,检测各组中三酰甘油(TG)、炎症因子、APN、AdipoR1、AMPK通路相关指标的表达.结果 与对照组比较,模型组小鼠出现典型的AS病理变化,TG、总胆固醇(TC)、一氧化氮(NO)、ET-1、白介素-6 (IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平明显升高,高密度脂蛋白(HDL-C)、APN和AdipoR1、PPARα、AMPKα、p-AMPKα蛋白表达和酰基辅酶A氧化酶(ACO) mRNA表达均明显降低;与模型组比较,LBP组中AS病理变化得到明显改善,TG、TC、NO、ET-1、IL-6和TNF-α的水平降低,HDL-C、APN和AdipoR1、PPAR-α、AMPKα、p-AMPKα蛋白及ACO mRNA表达升高,并且这些变化呈剂量相关性.3T3-L1脂肪细胞中,与对照组比较,LBP组的APN、AdipoRl、PPARα、AMPKα、p-AMPKα和ACO的表达均明显升高,TG、IL-6和TNF-α的水平明显降低;与LBP组比较,LBP+BML-275组TG、IL-6和TNF-α水平明显升高.结论 LBP通过上调APN和AdipoR1表达,激活APN/AMPK通路,发挥调脂抗炎作用,从而减缓小鼠动脉粥样硬化.
