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大黄素对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的影响
目的:研究大黄素(emodin,EMO)对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的影响.方法:分离培养大鼠前体脂肪细胞,按照EMO添加剂量不同,把培养板中接种细胞的培养孔随机分为0,5,10,20,40,80,160 μmol·L-1处理组;采用MTT比色法和流式细胞术测定EMO对大鼠前体脂肪细胞增殖的影响;采用油红O染色提取法,检测脂肪细胞内甘油三酯积聚量的变化;采用形态学观察,检测前体脂肪细胞分化的形态学变化.结果:20～160μmol·L-1的EMO对大鼠前体脂肪细胞的增殖与分化呈剂量和时间依赖性地抑制作用,并可在一定程度上诱发前体脂肪细胞凋亡.结论:EMO具有潜在的减肥降脂作用.
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BRL37344增强3T3-L1前体脂肪细胞pERK1/2蛋白水平
BRL37344是一种选择性β3受体激动剂,有研究表明其在动物模型中表现出良好的抗肥胖作川[1].本实验研究了BRL37344对细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signalregulated kinase,ERK1/2)的影响,推测其能够抑制前体脂肪细胞分化.
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大黄酸对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的影响
目的 研究大黄酸(rhein,Rh)对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的影响.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术测定RH对大鼠前体脂肪细胞增殖的影响.采用油红O染色提取法,检测脂肪细胞内甘油三酯积聚量的变化;采用形态学观察,检测前体脂肪细胞充脂率、充脂程度及形态变化.结果 RH在5～160 μmol·L-1内,对前体脂肪细胞增殖与分化的抑制作用呈剂量和时间依赖性变化,并可在一定程度上诱发脂肪细胞凋亡.结论 Rh可抑制前体脂肪细胞的增殖与分化,具有潜在的减肥降脂作用.
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肥胖与慢性炎症
肥胖是指体内脂肪组织的过多堆积,因此脂肪组织(AT)与肥胖关系密切.AT主要由成熟的脂肪细胞、前体脂肪细胞、内皮细胞、神经纤维和巨噬细胞等细胞组成.
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前体脂肪细胞分化相关的miRNA表达变化
目的 诱导前体脂肪细胞 3T3-L1分化,检测 microRNA(miRNA)表达水平的变化.方法体外培养前体脂肪细胞,诱导分化为成熟脂肪细胞.应用实时定量PCR技术检测前体脂肪细胞分化前后 miRNA 的表达水平.结果在前体脂肪细胞3T3-L1分化前后,11种miRNA表达升高(miR-10b,-26a,-26b,-103,-99a,-101,-101b,-151,-152,-422b,-98),5种miRNA表达下降(miR-34c,-423,-96,-182,-183).结论 miRNA可能参与调控脂肪细胞分化.
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表达谱基因芯片筛选前体脂肪细胞分化相关基因的研究
目的:运用基因芯片技术研究前体脂肪细胞分化相关基因表达谱的变化.方法:体外培养前体脂肪细胞(3T3-L1),诱导分化为成熟脂肪细胞.提取脂肪细胞总RNA,纯化mRNA后逆转录制备目标序列,应用含有45038种小鼠基因cDNA的表达谱芯片Mouse430_2进行差异表达谱分析.结果:在前体脂肪细胞分化的基因表达谱中差异表达基因共有640条,其中表达水平显著变化的有38条(表达水平改变5倍以上),上调基因24条,下调基因14条.差异表达基因中有细胞凋亡相关基因、原癌基因和抑癌基因、细胞信号和传递蛋白基因等多种基因.这些基因可能与脂肪细胞分化相关疾病的发病机制有关.结论:采用基因芯片技术筛选脂肪细胞分化相关基因,可能为脂肪细胞分化相关疾病病因和发病机制的研究提供新思路.
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miR-26b慢病毒载体构建及其在人前体脂肪细胞中的表达验证
目的 构建人miR-26b慢病毒表达载体,并检测其在人前体脂肪细胞中过表达效果.方法 以人脂肪细胞基因组DNA为模板,PCR扩增包含miR-26b所在区域上下游100 bp左右的基因组DNA,克隆慢病毒表达载体,进一步包装成慢病毒并感染人脂肪细胞,荧光定量PCR检测miR-26b表达.结果 成功构建miR-26b慢病毒载体,病毒感染效率为75％左右,miR-26b过表达效率达2倍以上.结论 成功构建了miR26b慢病毒表达载体,可用于研究miR-26b在人脂肪细胞中的分子机制.
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小鼠11β-HSD1基因真核表达载体的构建及应用
目的 构建小鼠11β-羟类固醇脱氢酶(11β-HSD1)基因的慢病毒真核表达载体PLJM1-11β-HSD1-GFP,建立小鼠前体脂肪细胞(3T3-L1)高表达11β-HSD1基因的稳定感染细胞株,为11β-HSD1基因的功能研究奠定基础.方法 利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从小鼠肝脏cDNA中扩增11β-HSD1开放阅读框ORF,构建针对11β-HSD1基因的真核表达载体,转化感受态DH5α菌株,抽提质粒并进行测序鉴定.用测序成功的质粒和慢病毒包装质粒共同转染293T细胞,产生慢病毒并转染3T3-L1细胞.根据绿色荧光效率挑取单克隆细胞团筛选出稳定细胞株,通过Western blot鉴定PLJM1-11β-HSD1-GFP转染成功.结果 经酶切、PCR及测序验证,PLJM1-11β-HSD1-GFP真核表达载体构建成功,并包装慢病毒,绿色荧光效率90%以上,并利用其慢病毒悬液成功感染3T3-L1细胞,筛选出的稳定感染细胞株的3T3-L1细胞成功高表达11β-HSD1蛋白.结论 成功构建了11β-HSD1基因的真核表达载体,并建立高表达11β-HSD1的稳定感染细胞株PLJM1-11β-HSD1-GFP-3T3-L1,为进一步研究11β-HSD1基因的功能,特别是在肥胖中的研究奠定了基础.
关键词： 11β-HSD1基因 真核表达载体 前体脂肪细胞 肥胖
