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参麦方对缺血心肌组织蛋白S-亚硝基化的影响
目的:观察参麦方对急性心肌缺血的保护作用及其对心肌蛋白S-亚硝基化的影响.方法:SD大鼠分为给药组与模型组,给药组灌胃参麦方(3 g·kg-1)5 d后,结扎冠状动脉左前降支造成心肌缺血再灌注损伤(myo-cardiai ischemia/reperfusion injury,MI/RI);测定血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)含量,以评价心肌损伤程度;Griess法测定血清一氧化氮(NO)含量,Western blot法检测心肌组织内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达变化;分别采用Biotin Switch法和DAN荧光法对心肌蛋白S-亚硝基化水平进行检测.结果:与模型组比较,参麦方给药组血清CK,LDH活性明显下降(P<0.05),表明参麦方具有良好的抗心肌缺血效果.此外,血清NO含量显著升高且心肌组织eNOS表达上调(P<0.01).相对分子质量90～117×103的心肌蛋白发生明显的S-亚硝基化,其S-亚硝基化水平由(4.42±0.60) μmol·g-1上升至(8.78±1.37)μmol·g-1(P<0.01).结论:促进缺血心肌组织蛋白的S-亚硝基修饰可能是参麦方抗心肌缺血再灌注损伤的主要作用途径之一.
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脑缺血再灌注中一氧化氮对神经元凋亡的影响
脑缺血再灌注过程中,脑组织一氧化氮(NO)含量呈"双峰样"变化.作用也随其在机体内含量变化具有不同表现;NO主要通过4条信号通路影响细胞凋亡.NO可通过分子修饰使相关蛋白发生S-亚硝基化,调节信号通路,进而影响细胞凋亡.
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光谱测定法检测蛋白质S-亚硝基化修饰
目的:探讨用光谱测定法对蛋白质的S-亚硝基化修饰进行检测.方法:以牛血清白蛋白(BSA)作目标蛋白,在酸性条件下用亚硝酸盐使BSA发生S-亚硝基化修饰,Hg2+离子解离亚硝基化蛋白的NO基团,所生成的NO与磺胺形成的重氮化物,再与乙二胺形成显色产物,其光密度值在一定的范围内与NO基团的浓度成线性关系,用亚硝酸盐所制作的标准曲线可定量检测目标蛋白的S-亚硝基化修饰.结果与结论:亚硝酸盐在4.0×10-3～6×10-2 mmol/L浓度范围与显色产物的光密度值存在良好线性关系,在总体蛋白中可检测到的S-亚硝基化蛋白的比率为1/10.光谱测定法是检测蛋白质S-亚硝化修饰的一种简便易行的方法.
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蛋白质巯基-亚硝基化修饰在肺部疾病及脓毒症中作用的研究进展
蛋白质巯基-亚硝基化修饰(S-nitrosylation,以下简称S-亚硝基化)是一种新发现的蛋白质翻译后修饰方式,即一氧化氮(nitric oxide,NO)作用于蛋白质半胱氨酸巯基生成亚硝基巯醇.S-亚硝基化调控生物体内多种蛋白质的功能和活性,而由NO介导的S-亚硝基化已被证实参与了肺内细胞凋亡、气道高反应性、肺动脉压增高、炎症反应、免疫抑制等多个病理生理过程,本文就S-亚硝基化在肺部疾病及脓毒症发生发展过程所起的作用综述如下.
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NMDA受体介导脑缺血/再灌注诱导GluR6巯基亚硝基化的研究
目的:研究脑缺血再灌注以及联合给予脑缺血和NMDA (N-甲基-D-天冬氨酸)受体抑制剂MK801对大鼠海马CA1区GluR6巯基亚硝基化以及海马CA1区锥体细胞凋亡的影响.方法:采用四动脉结扎法构建大鼠全脑缺血再灌注模型,给予SD大鼠腹腔注射NMDA受体特异性抑制剂MK801(3 mg/kg).主要运用‘生物素转化法’(Biotin-Switch method)、SDS-PAGE、免疫印迹、焦油紫染色等方法对GluR6的巯基亚硝基化(S-亚硝基化)、蛋白表达水平以及海马CA1区锥体细胞的凋亡水平进行研究.结果:脑缺血/再灌注显著促进GluR6的巯基亚硝基化以及海马CA1区锥体细胞的凋亡,给予NMDA受体特异性抑制剂MK801能够显著抑制脑缺血/复灌诱导增加的GluR6的S-亚硝基化以及海马CA1区锥体细胞的凋亡.结论:脑缺血/再灌注早期NMDA受体介导了GluR6的巯基亚硝基化以及海马CA1区锥体细胞的凋亡,从而为临床治疗缺血再灌注脑损伤提供了理论依据.
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脑缺血再灌注中nNOS介导的ASK1巯基亚硝基化促进其激活
目的本文主要研究在脑缺血再灌注早期,神经性一氧化氮合酶(nNOS)来源的NO是否能够引起凋亡信号调节激酶蛋白1( ASK1)巯基亚硝基化,以及ASK1的巯基亚硝基化与其激活的关系.方法SD大鼠分为正常对照组,缺血复灌6h组,7NI给药组,AMT给药组,生理盐水对照组.采用四动脉结扎去结扎法构建大鼠全脑缺血再灌注模型.运用SDS-PAGE、免疫印迹、免疫沉淀和免疫组织化学方法对蛋白质的磷酸化以及蛋白质之间的相互作用进行研究；蛋白质的S-亚硝基化的检测主要是通过“生物素转化法”(Biotin— Swich method).结果 nNOS的抑制剂7NI能够降低ASK1的亚硝基化水平,进而降低了ASK1的磷酸化水平(P＜0.05)即ASK1的活性.结论 7NI通过降低nNOS介导的ASK1巯基亚硝基化,对SD大鼠海马区脑缺血再灌注损伤的神经元起到保护作用.
关键词： S-亚硝基化 7NI 凋亡信号调节激酶蛋白1 神经性一氧化氮合酶 脑缺血 -
一氧化氮的心脏保护作用研究进展
一氧化氮(nitric oxide,NO)作为体内重要的气体信号分子,对缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)心脏具有重要的保护作用.NO通过环磷酸鸟苷酸(cyclic guanosine monophosphate,cGMP)依赖的蛋白激酶(cGMP-dependent protein kinase,PKG)以及蛋白质巯基(-SH)亚硝基化(S垭硝基化)在心脏I/R过程中发挥保护作用.文章综述体内NO的合成及其在心脏I/R过程中的作用、NO的心脏保护机制、NO在临床心脏保护中的应用.为NO的心脏保护作用的进一步研究提供参考.
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MK801对大鼠全脑缺血/再灌注ASK1信号通路影响以及神经元的保护
目的 探讨MK801(dizocilpine,地佐环平)对全脑缺血/再灌注后神经型一氧化氮合成酶(nNOS)介导的凋亡信号调节激酶1(apoptosis signal-regulating kinase 1,ASK1)信号通路及海马CA1区细胞凋亡的影响.方法采用四动脉结扎法构建大鼠全脑缺血模型.SD大鼠腹腔注射MK801(30 mg·kg-1).通过"生物素转化法"(Biotin-Swich method)检测蛋白质的S-亚硝基化.然后运用免疫印迹、免疫共沉淀和免疫组织化学等方法对蛋白质的磷酸化以及蛋白质之间的相互作用进行研究;应用焦油紫染色的方法检测脑缺血/再灌注后海马CA1区的细胞凋亡情况.结果 脑缺血/再灌注引起了ASK1的S-亚硝基化;MK801明显地抑制了脑缺血/再灌注诱导的ASK1的S-亚硝基化的增加;MK801明显降低了Thr845的磷酸化水平、增加了Ser83位的磷酸化水平,从而降低了ASK1的活性;MK801引起ASK1下游MKK4/7-JNK信号通路及下游凋亡的核通路也产生了相应的变化.结论 MK801能够抑制SD大鼠全脑缺血/再灌注引起ASK1的S-亚硝基化,进而影响ASK1凋亡信号通路,对神经元损伤起到保护作用.
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二硫键异构酶在神经变性疾病中的调控机制
二硫键异构酶(protein-disulphide isomerase,PDI)作为巯基-二硫键交换反应的催化剂,可促进蛋白二硫键的生成和错配二硫键的重排;同时它具有分子伴侣活性,能抑制错误折叠蛋白的聚集.在神经变性疾病如帕金森症、阿尔兹海默症、肌萎缩侧索硬化症、多聚谷氨酰胺疾病中,PDI可通过抑制错误折叠蛋白的聚集以及遍在蛋白化,起到神经保护作用.但是PDI能被过量的一氧化氮亚硝基化,导致其蛋白质构象改变和功能障碍,影响神经元的连通性和可塑性,触发神经元的凋亡通路.本文就新研究综述了PDI的结构功能、调控机制及在神经变性疾病的作用.
