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2,3,5-三苯基氯化四氮唑在增菌液中的应用研究
目的 确立2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)在增菌液中,对不同的细菌产生抑制和被完全抑制时的浓度.方法 用金黄色葡萄球菌、福氏志贺菌、沙门菌、大肠埃希菌、普通变形杆菌、副溶血性弧菌配制不同的菌液浓度,分别加到含1.0 mg／ml琼脂粉的普通营养肉汤增菌液中(副溶血性弧菌用3％氯化钠碱性蛋白胨水代替普通营养肉汤),再加入不同量的10.0 mg/ml TTC储备液,记录TTC对各菌产生抑制和被完全抑制时的浓度.结果 在菌量30.300 cfu/ml时,金黄色葡萄球菌、福氏志贺菌、沙门菌、大肠埃希菌、普通变形杆菌、副溶血性弧菌开始被抑制和被完全抑制时的TTC浓度分别为0.02、0.1、0.2、0.6、0.6、0.1 mg/ml和0.1、0,7、0.5、＞2.0、＞2.0、0.2 m/nl.结论 检测样品时,在增菌液中加入1.0 mg/ml的琼脂粉和适量的TTC可提高致病菌的检出率,可直观样品中细菌数量.选择含不同TTC浓度的增菌液,可选择性地进行筛选增菌,进一步提高检出率.
关键词： 2 3 5-三苯基氯化四氮唑 普通营养肉汤 检出率 -
H2受体介导组胺对大鼠海马缺氧缺糖诱导细胞水肿及活性降低的保护作用
目的探讨组胺对海马脑片缺血诱导细胞水肿及活性降低的作用,以及与受体亚型的关系.方法大鼠海马脑片以缺氧缺糖(OGD)诱导缺血损伤后,实时检测CA1区透光度变化评价细胞水肿;并测定2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)产物甲(月替),评价脑片活性.观察不同浓度组胺的作用,以及组胺受体拮抗剂对组胺作用的影响.结果组胺(0.01～10 μmol·L-1)明显抑制OGD诱导的海马脑片透光度增加,并提高脑片活性.H1受体拮抗剂苯海拉明(0.1～10 μmol·L-1)不影响组胺的作用,H2受体拮抗剂西咪替丁(0.1～10 μmol·L-1)则部分拮抗组胺的保护作用.结论组胺对大鼠海马脑片缺血诱导细胞水肿及活性降低有保护作用,该作用与H2受体有关.
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大鼠皮层及海马脑片体外培养影响因素的研究
目的 探讨大鼠皮层及海马脑片体外培养的影响因素和脑片培养的佳实验条件.方法 取大鼠离体皮层及海马脑片体外培养,2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测细胞活力,观察不同的培养时间、培养液中葡萄糖浓度及培养温度对脑片活性的影响,以确定佳培养条件.结果 随着脑片孵育时间的延长,脑片活力逐渐衰减,表现为TTC染色A490 nm值下降.培养人工脑脊液中低糖含量及培养温度升高均会降低脑片活性.结论 选择(35±0.5)℃,含1.1 mmol/L葡萄糖浓度的人工脑脊液4 h以内可作为脑片佳体外培养条件.
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评价小鼠脑片缺血性损伤及药物保护作用定量方法的改进
目的:通过改进和完善脑片孵育装置、脑片缺血性损伤的定量指标,建立一种简单、准确评价小鼠脑片缺血性损伤及药物神经保护作用的新方法.方法:设计和制作脑片孵育装置,并验证其适用性.以TTC为底物在小鼠脑片生物合成formazan标准品,并作分离、纯化和鉴定.以缺氧缺糖(OGD)方法诱导小鼠脑片损伤,用分光光度法在490 nm处测量皮质和纹状体formazan量,并观察依达拉奉和ONO-1078的保护作用.结果:脑片孵育装置具有良好的平行性和可操作性.获得了纯度为99.3%的formazan对照品,在0.05～1 mg/ml间与490 nm的吸收度有良好的线性关系(r=0.9997).随OGD时间延长,脑片皮质和纹状体formazan量逐渐减少;依达拉奉对此有显著保护作用,而ONO-1078无效.结论:脑片孵育新装置及formazan定量方法效率高、定量准确、简单易行,可用于缺血性脑损伤保护药物的筛选.
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复方曲肽对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用
目的：研究复方曲肽对大鼠缺血再灌注损伤的保护作用。方法将雄性SD大鼠随机分为正常对照( normal control,NC)组、大脑中动脉闭塞再灌注( middle cerebral artery occlusion reperfusion,MCAO/R)组及MCAO/R＋复方曲肽[ MCAO/R＋( troxerutin and cerebroprotein,TC)]组3组(每组10只)。缺血1 h再灌注23 h后,各组取6只动物接受神经功能评分后进行MRI检查,随后处死行2,3,5-三苯基氯化四氮唑染色检测脑梗死体积；各组另4只动物处死,免疫蛋白印迹检测缺血半暗带中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1( cysteinyl aspartate specific proteinase 1,Caspase 1)、Caspase 3及Caspase 8的表达。结果 MCAO/R组术后动物均出现了脑梗死病灶及神经功能的损伤,复方曲肽治疗可减小脑梗死体积并改善神经功能。 MCAO/R组缺血半暗带中 Caspase 1、Caspase 3、Caspase 8表达显著高于 NC组( P<0.05), MCAO/R＋TC组 Caspase 1、Caspase 3、Caspase 8表达低于MCAO/R组( P<0.05)。结论复方曲肽对缺血再灌注损伤具有明显的保护作用,其机制与复方曲肽抑制细胞凋亡相关基因表达从而达到抗凋亡作用有关。
