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地黄饮子对转基因果蝇AD模型mTOR信号通路中4E结合蛋白和p70核糖体S6蛋白激酶表达的影响
目的:研究地黄饮子对转tau基因果蝇mTOR信号通路中4E结合蛋白(4E-BP)和p70核糖体S6蛋白激酶(p70S6K)表达的影响,探讨其防治AD的疗效和作用机制.方法:将果蝇分为3组,即空白组、地黄组、模型组,空白组为正常CS果蝇喂普通培养基,地黄组为转tau基因果蝇喂2％浓度地黄饮子培养基,模型组为转tau基因果蝇喂普通培养基,均喂养5d.采用荧光定量PCR技术检测果蝇4E-BP和p70S6K的mRNA表达,Western blot方法检测4E-BP和p70S6K蛋白的表达.结果:地黄饮子能够降低4E-BP和p70S6K的mRNA和蛋白的表达,且与模型组比较差异均具有统计学意义(P＜0.01).结论:地黄饮子通过调控mTOR信号通路中4E-BP和p70S6K的mRNA和蛋白的表达,调节了细胞周期,抑制了细胞的凋亡,提高转tau基因果蝇AD模型学习记忆能力.
关键词： 地黄饮子 转基因果蝇 4E结合蛋白 p70核糖体S6蛋白激酶 -
阿尔茨海默病发病机制和动物模型研究进展
阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）是一种慢性中枢神经系统退行性疾病，病因不明、发病机制复杂，因此动物模型的建立对探索其发病机制及寻找防治疾病的药物具有重要意义。在动物模型中，转基因小鼠模型和转基因果蝇模型已成为研究热点。该文就阿尔茨海默病的发病机制和动物模型的研究现状进行综述。
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地黄饮子对转tau基因果蝇AD模型PI3K/AKT/dTOR信号通路基因表达的影响
目的 观察地黄饮子对转tau基因果蝇AD模型PI3 K/AKT/dTOR信号通路基因表达的影响,探讨其防治阿尔茨海默病的药物疗效和作用机制.方法 将果蝇分为3组,即空白组、地黄饮子组、模型组.空白组为正常CS果蝇喂普通培养基,地黄饮子组为转tau基因果蝇喂2％浓度地黄饮子培养基,模型组为转tau基因果蝇喂普通培养基,各组均喂养5天.采用果蝇嗅觉记忆测试检测果蝇学习记忆能力,并运用荧光定量PCR法检测地黄饮子对转tau基因果蝇PI3K、AKT、dTOR mRNA表达的影响.结果 ①嗅觉记忆测试中,各组进入有纱布障碍的离心管的果蝇数目变化趋势:空白组果蝇数量变化幅度小,其次是地黄饮子组果蝇,模型组果蝇变化幅度大.各组进入无纱布障碍的离心管的果蝇数目变化趋势:地黄饮子组果蝇前4h进入离心管的数量变化速度较慢,4h后数量变化速度明显高于其他组的果蝇;模型组果蝇进入离心管的数量整个过程比较缓慢,并且低于其他组果蝇;空白组的果蝇开始4h进入离心管的数量变化较快并高于地黄饮子组果蝇,4h后数量变化减慢明显并低于地黄饮子组果蝇.②与空白组比较,模型组和地黄饮子组PI3K、AKT、dTOR mRNA表达差异均有统计学意义(P＜0.05).地黄饮子组与模型组比较,PI3K、AKT、dTOR mRNA表达增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 地黄饮子可以改善转Tau基因果蝇的学习记忆能力,并上调转tau基因果蝇PI3K、AKT、dTOR mRNA的表达.
关键词： 地黄饮子 阿尔茨海默病 转基因果蝇 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 -
线粒体未折叠蛋白反应在Sir2抑制帕金森转基因果蝇中的作用
目的：探讨Sir2对帕金森病( PD)转基因果蝇是否有神经保护作用及与线粒体未折叠蛋白反应( UPRmt )的相关性。方法选用Mhc-GAL4启动子，利用经典的GAL4-UAS系统构建Mhc-GAL4/UAS系统Pink1 B9 PD转基因果蝇模型，通过遗传干预使Sir2在Mhc-GAL4/UAS系统PD转基因果蝇运动神经元内过表达，观察Sir2过表达对果蝇运动神经元变性是否具有神经保护作用，然后通过 RNAi 技术抑制UPRmt相关基因热休克蛋白60(Hsp60)、GCN-2的表达，观察Sir2过表达对抑制果蝇运动神经元变性的作用，以及验证这种作用是否与UPRmt相关。结果 Sir2过表达明显抑制了PD转基因果蝇运动神经元变性，显著改善了果蝇运动能力，而在 UPRmt被抑制后， Sir2的保护作用明显减弱。结论Sir2对PD转基因果蝇具有神经保护作用，而这种神经保护作用与UPRmt相关。
关键词： 帕金森病 Sir2 转基因果蝇 线粒体未折叠蛋白反应 -
阿尔茨海默病转基因果蝇模型β淀粉样蛋白对胆碱能突触的毒性影响
目的 研究β淀粉样蛋白(Aβ)多肽对阿尔茨海默病(AD)转基因果蝇大脑中胆碱神能经元突触的影响.方法 分别建立转Aβ40,Aβ42基因果蝇AD两个模型组,以野生果蝇(canton-s)作为对照组.采用生物素染色和激光共聚焦成像记录投射神经元的形态;通过全细胞膜片钳方法记录各组投射神经元胆碱能的自发突触后电流和微兴奋性突触后电流;检测各组果蝇的嗅觉短期记忆能力.结果 与对照组相比较,Aβ42组的自发突触后电流的频率和振幅均有明显降低,差异有统计学意义(P ＜0.05);Aβ42组微兴奋性突触后电流的频率明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).在巴甫洛夫的嗅觉相关的短期学习记忆测试中,与对照组相比较,Aβ40,Aβ42两组果蝇学习记忆指数均明显降低,差异有统计学意义(P均＜0.05).结论 Aβ肽对胆碱能突触传递的影响提示,其可能是由Aβ肽引起胆碱能神经元变性和记忆不断下降的可能机制之一.
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β淀粉样蛋白对阿尔茨海默病转基因果蝇认知功能的影响
目的 探讨Aβ40、Aβ42、Aβ42Arc对阿尔茨海默病(AD)转基因果蝇认知功能的影响.方法 分别建立Aβ40、Aβ42、Aβ42Arc转基因AD果蝇模型.根据实验要求将果蝇分为4组,分别是野生果蝇对照组、Aβ40组、Aβ42组、Aβ42 Arc组.在整体动物水平上进行果蝇行为学研究,分别检测各组果蝇的嗅觉短期记忆能力、攀爬能力和平均寿命.结果 在巴甫洛夫嗅觉相关短期记忆测试、攀爬能力试验、平均寿命测试中,与对照组相比,3组转基因果蝇的嗅觉记忆能力、攀爬能力、平均寿命均明显降低.结论 Aβ的毒性作用会导致AD转基因果蝇认知功能下降.
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基于iTRAQ的蛋白质组学技术对Drp1基因过表达挽救帕金森病模型果蝇的机制研究
目的 应用iTRAQ技术探讨线粒体动力相关蛋白1(Drp1)基因过表达挽救PD模型果蝇的蛋白质组学变化以及挽救效应的分子机制.方法 将各果蝇品系分别杂交构建出不同实验果蝇:正常组、PD模型组(PINK1B9转基因疾病果蝇)和PD挽救组(Drp1基因过表达PD模型果蝇),并观察果蝇翅膀形态、运动能力及计算异翅率、飞行率.提取果蝇蛋白组分,以iTRAQ技术联用串联质谱分析蛋白质组的整体变化情况,并将各组果蝇蛋白鉴定结果 分别两两比较获得差异蛋白,后将鉴定得到的差异蛋白进行GO功能富集分析和KEGG信号通路富集分析.结果PD挽救组的异翅率与PD模型组相比明显降低(2.60％±0.47％vs.82.40％±12.47％),飞行率与PD模型组相比明显提高(89.70％±7.76％vs.3.30％±1.69％),差异均有统计学意义(P<0.05).蛋白质组学分析结果共鉴定得到3630个蛋白,其中PD模型组与正常组间鉴定得到的差异蛋白共282个,主要是铁离子相关蛋白;PD挽救组与PD模型组间鉴定得到的差异蛋白共170个,主要是锌离子相关蛋白.共同差异蛋白的信息显示Drp1基因过表达后逆转了绝大多数PD模型中相对正常果蝇异常表达的蛋白,其中21％的蛋白具有金属离子结合功能,且主要是锌离子结合功能.结论 金属离子代谢可能在PD发病及Drp1基因过表达挽救PD过程中有重要作用,尤其是锌离子代谢可能在挽救效应中起主要作用.
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UAS-Hey转基因果蝇品系的构建与鉴定
目的 构建UAS-Hey转基因果蝇品系,为研究Hey基因在果蝇发育中的功能提供工具.方法 利用逆转录PCR技术扩增果蝇Hey基因的编码序列,并亚克隆至pUAST表达载体,构建pUAS-Hey重组质粒.显微注射至野生型果蝇的胚胎,通过mini-white标记筛选出UAS-Hey转基因红眼果蝇.将这些转基因品系分别进行平衡与定位,并用PCR扩增方法鉴定.结果 成功构建了pUAS-Hey重组质粒,通过显微注射及转基因果蝇的筛选与平衡,共获得7个独立的转基因品系.PCR分析证实P[mini-white,UAS-Hey]已整合入各转基因品系的基因组,且处于可表达的区域.结论 成功构建了UAS-Hey转基因果蝇,为运用GAL4/UAS系统进一步研究Hey基因的功能与调控奠定了基础.
