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嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞凋亡与COX-2表达及凋亡机制初步探讨
目的 研究嘌呤霉素氨基核苷(PA)诱导的足细胞凋亡及环氧合酶-2(COX-2)在足细胞中的表达情况,初步探讨足细胞凋亡的机制.方法 条件永生性小鼠的足细胞,经诱导分化成熟后,采用PA诱导足细胞凋亡,分别在诱导后0、8、24和48 h检测足细胞活性和凋亡水平,并检测足细胞凋亡过程中caspase-3的活性水平,同时运用Western blot技术检测足细胞P53及COX-2的表达.结果 随时间的延长,PA诱导的足细胞凋亡逐渐增多,在24 h及48 h较明显(P<0.05).各组细胞caspase-3水平无明显差异.24 h及48 h PA组P53表达较正常对照组明显增多(P<0.05).正常足细胞表达COX-2,用PA干预后,24 h及48 h COX-2表达明显增加(P<0.05).结论 PA诱导的足细胞凋亡呈时间依赖性,随时间的延长,足细胞凋亡逐渐增多;PA诱导的足细胞凋亡过程中COX-2、P53表达明显增多;足细胞凋亡过程与caspase-3无关.
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雷马曲班对PAN诱导足细胞凋亡的影响
目的：探讨血栓素A2受体（TXA2R）拮抗剂雷马曲班对嘌呤霉素氨基核苷（PAN ）诱导足细胞凋亡的影响。方法条件永生性小鼠足细胞株分为 A 组（雷马曲班30 nmol／ml）、B组（PAN 100μg／ml）和D组（PAN 100μg／ml＋雷马曲班30 nmol／ml），另设对照C组。流式细胞术检测细胞凋亡率，CCK‐8法检测细胞增殖活性，RT‐PCR和Western blot分别检测 TXA2R mRNA和蛋白表达。结果与D、C组比较，B组足细胞凋亡率、TXA2R mRNA及蛋白水平均升高（P＜0．01或P＜0．05），增殖活性下降（P＜0．01或P＜0．05）。A 组足细胞凋亡率、增殖活性、TXA2R mRNA及蛋白水平均与C组相仿（P＞0．05）。结论雷马曲班对PAN诱导的足细胞凋亡具有抑制作用；其机制可能通过下调TXA2R表达而实现。
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肾八味胶囊对肾病综合征模型小鼠血清IL-6的影响
目的:观察肾八味胶囊对肾病综合征(NS)模型小鼠24 h尿蛋白和血清白介素6(IL-6)的影响,以探讨该方对NS的免疫治疗作用机制.方法:给小鼠一次性尾静脉注射嘌呤霉素氨基核苷(Puromycin aminonucleoside,PA)复制NS模型,40只小鼠随机分为模型组、肾八味低剂量组、肾八味高剂量组、至灵胶囊组、生理盐水组,采用BCA法检测各组小鼠24 h尿蛋白,采用酶联免疫吸附法检测小鼠血清IL-6的含量.结果:模型组小鼠24 h尿蛋白和血清IL-6均较生理盐水组显著升高,中药灌服后能显著降低NS小鼠24 h尿蛋白和血清IL-6的含量.结论:降低血清IL-6的含量可能是肾八味胶囊治疗NS的作用机制之一.
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骨髓间充质干细胞移植对嘌呤霉素氨基核苷肾病大鼠足细胞修复作用的研究
目的 探讨骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)移植对嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PAN)肾病大鼠足细胞修复作用及其对裂孔隔膜分子Nephrin表达的影响,为BMSCs移植治疗肾病综合征提供实验依据.方法 45只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为3组,每组15只.模型组:一次性腹腔注射PAN(0.15 mg/g)造模;BMSCs组:PAN造模+BMSCs移植(细胞移植前经Brdu标记示踪);对照组:不予以造模.实验第10天杀鼠,留取标本行血、尿、肾组织超微结构检测,免疫组化检测肾脏Brdu标记阳性细胞的表达,半定量RT-PCR及Western blot方法检测Nephrin表达变化.结果模型组大鼠出现大量蛋白尿、血白蛋白降低、胆固醇升高,伴有广泛足突的融合.与模型组比较,BMSCs组尿蛋白、血胆固醇降低,血白蛋白回升及足突融合现象改善,差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化显示,BMSCs组肾组织中可见阳性细胞,模型组及对照组未见阳性细胞;半定量RT-PCR及Western blot显示,模型组Nephrin相对表达量较对照组明显下降,BMSCS组与模型组比较有所增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 BMSCs移植对PAN肾病大鼠足突融合有一定的改善,Nephrin表达的变化可能在其中发挥了作用.
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通脉颗粒对嘌呤霉素氨基核苷肾病大鼠FDP、DD、Plg及MDA的影响
目的:观察通脉颗粒对嘌呤霉素氨基核苷肾病大鼠纤维蛋白降解产物(FDP)、D-二聚体(DD)、纤溶酶原(Plg)及丙二醛(MDA)的影响.方法:颈静脉插管缓慢注入嘌呤霉素氨基核苷(PAN,50mg/kg)并于此后13、16、19天尾静脉追加注射PAN 5mg/kg制备大鼠肾病模型.于造模后第二天开始灌胃给药,连续30天,收集造模后第5、10、15、20、25和30天24小时尿测定尿蛋白排泄.于第31天处死全部大鼠,取血和肾组织进行相关的检查,同时监测FDP、DD、Plg以及MDA等指标.结果:通脉颗粒在减少蛋白尿,改善肾组织病理损害的同时,能够调节FDP、DD、Plg的纤溶活性及清除MDA.结论:通脉颗粒对嘌呤霉素氨基核苷大鼠肾病模型的治疗作用,可能与改善纤溶功能和促进过氧化脂质的清除有关.
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nephrin及WT-1在嘌呤霉素大鼠肾病模型足细胞中的表达及意义
目的 应用嘌呤霉素氨基核苷(PAN)模型,研究足细胞相关蛋白nephrin和肿瘤蛋白-1(WT-1)在足细胞中的表达及在肾小球硬化进展过程中的意义.方法 单次尾静脉注射嘌呤霉素氨基核苷制作PAN模型,在4、14及20周处死大鼠,取其肾脏,切片,nephrin及WT-1免疫组化染色,半定量分析后进行统计学分析.结果 对照组免疫组化染色nephrin沿肾小球毛细血管襻呈较为均匀的黄褐色粗颗粒样的线状分布,4周时与对照组比较PAN组nephrin略有分布不均,部分区域染色减弱或消失(均值为10.23±1.256和8.23±0.88,P＜0.05),14周时在有节段性硬化的区域nephrin无表达(均值为7.58±0.71和10.23±1.26,P＜0.05),而在20周时硬化的区域基本无表达(均值为7.88±0.92和6.08±1.34,P＞0.05),与对照组比较均有明显减少.4周时WT-1在足细胞核表达,呈深棕黄色粗大颗粒,与对照组比较无统计学意义(均值为10.14±2.02和10.11±1.56,P＞0.05);14周时PAN组WT-1表达较对照组有所减少(均值为9.02±1.73和6.8±1.89,P＜0.05);20周时与对照组比较PAN组WT-1明显减少(均值为7.34±1.22和4.43±1.01,P＜0.05),足细胞数量随着时间的延长依次递减.结论 Nephrin的表达在肾小球硬化过程中进行性减少,甚至消失;WT-1的表达随着肾小球硬化的进展逐渐减少.Nephrin和WT-1表达的降低均反映足细胞的结构破坏和数量的减少,因此两者表达可反映足细胞损伤和肾小球硬化的关系.
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肾炎康血清干预嘌呤霉素氨基核苷诱导足细胞损伤研究
目的：探讨复方肾炎康对嘌呤霉素氨基核苷诱导足细胞损伤的保护作用。方法：原代培养大鼠足细胞，随机分为正常组，对照组，肾炎康低、中、高剂量组，厄贝沙坦组除正常组外，其余各组分别予以嘌呤霉素氨基核苷，正常组加正常大鼠血清，肾炎康低、中、高剂量组分别加肾炎康低、中、高剂量，厄贝沙坦组加厄贝沙坦，均干预48h。用原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡，实时定量PCR方法检测P53、Caspase 3mRNA，western印迹检测细胞中P53、Caspase 3蛋白变化。结果：嘌呤霉素氨基核苷作用下的各组足细胞凋亡率、P53、Caspase 3mRNA及蛋白表达均显著高于正常组（P＜0.05，P＜0.01），药物干预的各组足细胞凋亡率、P53、Caspase 3mRNA及蛋白表达均显著低于对照组（P＜0.05，P＜0.01），肾炎康高剂量组足细胞凋亡率、P53、Caspase 3mRNA及蛋白表达与厄贝沙坦组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：中药复方肾炎康能抑制嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞凋亡，其机制可能与抑制P53、Caspase 3表达有关。
