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健脾消癌方对大肠癌肝转移裸鼠模型肝组织PI3K/Akt通路相关蛋白表达的影响
目的:研究健脾消癌方对大肠癌肝转移裸鼠模型肝组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路相关蛋白表达的影响,探讨其拮抗大肠癌肝转移的作用机制.方法:随机抽取10只BALB/C-nu裸鼠作为空白组,其余裸鼠建立人大肠癌细胞肝转移裸鼠模型,建模3d后取存活裸鼠30只,随机分为模型组,健脾消癌方组(41.6 g·kg-1),人参皂苷Rg3组(5.2 mg·kg-1),各组裸鼠灌胃相应药物及生理盐水4周后脱颈处死,观察各组裸鼠肝转移情况,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定肝组织第10号染色体同源缺失性磷酸酶和张力蛋白基因(PTEN),磷酸化第10号染色体同源缺失性磷酸酶和张力蛋白基因(p-PTEN),Akt,磷酸化蛋白激酶(p-Akt)蛋白表达情况.结果:健脾消癌方及人参皂苷Rg3组肝转移率明显低于模型组(P＜0.05);与空白组比较,模型组中p-PTEN,p-Akt蛋白表达明显升高(P＜0.05),与模型组比较,健脾消癌方组与人参皂苷Rg3组肝组织中p-PTEN,p-Akt蛋白表达明显降低(P＜0.05);健脾消癌方组与人参皂苷Rg3组p-PTEN,p-Akt表达差异无统计学意义.与空白组比较,模型组PTEN,Akt蛋白表达明显降低(P＜0.05);与模型组比较,健脾消癌方组与人参皂苷Rg3组PTEN,Akt蛋白表达量明显升高(P＜0.05);健脾消癌方组与人参皂苷Rg3组PTEN,Akt蛋白表达差异无统计学意义.结论:健脾消癌方可拮抗大肠癌肝转移,其作用机制可能与升高PTEN蛋白表达,降低p-PTEN,p-Akt蛋白表达有关.
关键词： 健脾消癌方 大肠癌 肝转移 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B通路 -
miR-499对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响
目的:探讨miR-499对缺氧/复氧诱导的原代心肌细胞凋亡的影响,探讨其与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路的关系.方法:通过对原代培养新生大鼠心肌细胞行缺氧3 h/复氧4 h,模拟大鼠心肌缺血再灌注损伤;将细胞分为4组:正常对照组、缺氧/复氧组(A/R组)、缺氧/复氧+miR-499激动剂agomir预处理组(Agomir组)、缺氧/复氧+miR-499激动剂agomir+PI3K特异性阻断剂LY294002组(Agomir+LY294002组).采用MTT方法检测各组心肌细胞活力,分别采用荧光定量PCR方法和Western blot法检测各组心肌细胞中miR-499、PI3K mRNA及Caspase-3、p-PI3K和p-Akt蛋白表达水平的变化.结果:与正常对照组相比,A/R组心肌细胞活力下降,miR-499及PI3K mRNA表达量减少,p-PI3K及p-Akt蛋白表达量减少,Caspase-3蛋白表达量增加(P<0.05);但经Agomir处理后,心肌细胞活力增加,miR-499及PI3K mRNA表达量增加;p-PI3K及p-Akt蛋白表达量增加;与A/R组相比,Caspase-3蛋白表达量减少(P<0.05);而agomir的作用可被LY294002即PI3K阻断剂抑制.结论:miR-499可以减少缺氧/复氧所诱导的心肌细胞的凋亡,这可能与其活化PI3K/Akt信号通路有关.
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可溶性CD40配体联合LY294002对胃癌细胞生长的抑制作用
目的 观察可溶性CD40配体(sCD40L)联合磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路特异性阻断剂LY294002对胃癌AGS细胞体外生长及凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 将细胞分成对照组(仅加入含10％胎牛血清的RPMI 1640培养液)、LY294002组(20 μmol/L)、sCD40L组(2 mg/L)和LY294002+ sCD40L组.噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖变化;流式细胞术观察细胞周期和凋亡变化;透射电镜检测细胞形态变化;Western blot检测细胞PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达的变化.结果 与单独使用sCD40L或LY294002比较,sCD40L与LY294002联合应用后细胞生存率显著降低,LY294002组、sCD40L组及联合用药组细胞生存率分别为(65.72±3.19)％、(70.14±2.98)％、(41.25±2.74)％(P＜0.05).LY294002及sCD40L单独作用胃癌AGS细胞48 h后均可使细胞周期分布发生明显改变,细胞周期阻滞于G1期,两者联合作用比单独用药周期阻滞明显增强(P＜0.05).对照组、sCD40L组、LY294002组、联合用药组细胞凋亡率分别为(4.10±0.86)％、(4.23±0.74)％、(8.97±1.23)％、(29.32±2.37)％,与对照组比较,sCD40L组细胞没有明显的凋亡,LY294002组细胞有一定的凋亡,两者联合作用后细胞凋亡明显增多(P＜0.05).与对照组比较,sCD40L促进PI3K、p-Akt蛋白表达升高;与LY294002联合作用后,PI3K 、p-Akt蛋白表达明显降低(P＜0.05).结论 阻断PDK/Akt信号通路可显著增强sCD40L对人胃癌AGS细胞生长的抑制作用.
关键词： 胃癌 可溶性CD40配体 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B通路 肿瘤治疗 -
小鼠脑爆震伤中PI3K/Akt通路及相关凋亡蛋白表达情况
目的 探讨小鼠脑爆震伤后不同时间点磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路及相关凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表达情况.方法 将50只雄性小鼠通过随机数字表法分为对照组(n=10)和模型组(n=40),再将模型组根据造模成功后时间分为3 h组、6 h组、12 h组和24 h组,每组各10只.测定各组脑组织含水量与伊文思蓝含量,并采用Western blot以及实时荧光定量PCR等技术检测各组小鼠脑组织中PI3K、Akt、Bcl-2、Bax的含量和mRNA的表达变化.结果 模型组各时间点脑组织含水量与伊文思蓝含量较对照组均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).Western blot检测与实时荧光定量PCR检测结果一致.Akt、PI3K和Bcl-2表达,3 h组、6 h组均较对照组显著降低,6 h组达到低,差异均有统计学意义(P<0.05);12 h组、24 h组较6 h组有所升高,但仍低于对照组,且与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).Bax表达,3 h组、6 h组、12 h组均较对照组显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);24 h组较12 h组有所降低,但仍高于对照组,且与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 颅脑爆震伤中PI3K/Akt通路和凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表达变化对其判断和治疗有一定提示作用.
关键词： 颅脑爆震伤 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B通路 Bcl-2 Bax
