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疣毒净诱导H8细胞凋亡作用机制
目的:观察疣毒净制剂对人宫颈永生化细胞H8细胞增殖和凋亡的影响,探讨其可能的作用机制.方法:以转染HPV16基因后稳定传代的人宫颈永生化细胞株H8细胞为研究对象;经1,2,3,4,5 g·L-1疣毒净干预H8细胞24,48,72 h,同时设立空白组,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖抑制作用;荧光显微镜下观察1,2,3,4,5 g·L-1疣毒净干预24 h后,经Hoechst 33342染色的细胞凋亡情况;流式细胞仪检测1,2,3,4,5 g·L-1疣毒净干预24 h后,经AnnexinV/碘化丙啶(PI)双染后细胞早期凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测1,2,3,4,5 g·L-1疣毒净干预24 h后H8细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)蛋白表达情况.结果:与空白组比较,2,3,4,5 g·L-1疣毒净对H8细胞的生长抑制呈明显的浓度-时间依赖效应(P＜0.05);经Hoechst 33342染色后,荧光显微镜下可见1,2,3,4,5 g·L-1疣毒净给药后细胞均出现明显的核染色质浓缩,3,4,5 g·L-1疣毒净干预下圆形亮蓝色凋亡小体逐渐增多;流式细胞仪检测到1,2,3 g·L-1疣毒净干预24 h后细胞的早期凋亡率分别为(23.73±5.72)％,(63.9±3.59)％,(71.53±1.59)％,与空白组(6.53±0.85)％比较早期凋亡率显著升高(P＜0.01);与空白组比较,疣毒净组凋亡执行蛋白Caspase-3及其底物PARP蛋白均明显下调(P＜0.05),呈浓度下调趋势,二者下调的趋势一致.结论:疣毒净能明显抑制宫颈永生化细胞H8细胞增殖,诱导早期凋亡,可能是通过激活Caspase-3-PARP途径来执行的.
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重组人乳铁蛋白诱导人口腔癌Tca8113细胞自噬及凋亡
目的 研究重组人乳铁蛋白(rhLF)对人口腔癌Tca8113细胞增殖及凋亡的影响.方法 MTT法检测不同浓度的rhLF作用细胞不同时间对其增殖的影响,并分别用不同浓度的rhLF处理细胞后观察其对集落克隆形成的影响;不同浓度的rhLF处理细胞后线粒体膜电位的变化.采用免疫荧光技术检测rhLF处理前后自噬体的形成情况.免疫蛋白印迹法(Western blot)检测不同浓度rhLF处理细胞后细胞自噬相关蛋白P62和LC3表达变化,AnnexinⅤ-PI双染色检测rhLF对细胞凋亡的影响;Western blot检测不同浓度的rhLF处理细胞后聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达变化.所有数据采用SPSS 13.0统计软件包进行统计学分析.结果 rhLF对口腔癌Tca8113细胞的增殖及存活有明显的增殖抑制作用,并呈药物浓度和时间依赖性,且各药物处理组与对照组相比有统计学意义(P<0.05).rhLF抑制口腔癌Tca8113细胞克隆形成;JC-1荧光检测显示口腔癌Tca8113细胞经rhLF处理后其线粒体膜电位下降;rhLF处理后形成自噬体,不同浓度rhLF处理细胞后细胞自噬相关蛋白P62表达下降及LC3-Ⅱ表达增加,0、100、200μg/ml的rhLF处理口腔癌Tca8113细胞48 h的凋亡率为3.9%、8.2%、42.6%,组间差异有统计学意义(P<0.05).Western blot结果显示,rhLF处理口腔癌Tca8113细胞后PARP、Caspase-3被激活.结论 rhLF能显著抑制Tca8113细胞的增殖并诱导其细胞凋亡,其机制与线粒体凋亡途径的激活应激有关.
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阿格列汀对糖尿病大鼠肾脏病理改变的影响
目的 探讨糖尿病(DM)大鼠肾病中肾脏病理改变、细胞凋亡的机制及阿格列汀对细胞凋亡的影响.方法 8周龄雄性Wistar大鼠50只,随机分为对照组(n=10),DM组(n=20),阿格列汀组(n=20).各组正常饮食,腹腔注射小剂量链脲佐菌素构建糖尿病模型.模型稳定后,给予对照组、糖尿病组生理盐水灌胃,阿格列汀组以一定剂量阿格列汀研钵磨碎后生理盐水稀释灌胃.于21 w末监测血糖、血肌酐、尿素氮等生化指标,21 w末处死大鼠后苏木素-伊红(HE)染色、PAS染色、Masson染色等病理检测肾功能及损伤情况;免疫组化、Western印迹检测肾组织受体相互作用蛋白(RIP)3、Caspase-3、聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)的表达情况.结果 与对照组相比,糖尿病组系膜细胞基底膜增厚,细胞外基质堆积,RIP3、Caspase-3、PARP表达增多,阿格列汀组肾脏病理损伤较轻,相应表达减少,但比对照组稍多,Western印迹结果阿格列汀组相对对照组变化不大.结论 阿格列汀可能通过改善细胞凋亡通路中的死亡受体通路中的RIP3的表达改善肾脏细胞的凋亡程度,延缓肾脏病理损伤的进展.
关键词： 阿格列汀 糖尿病肾病 细胞凋亡 受体相互作用蛋白3 聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶
