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大黄(庶)虫超微粉剂对肝纤维化大鼠肝组织蛋白表达的影响
目的:利用荧光差异凝胶电泳技术(2D DIGE)研究大黄蜜虫超微粉剂对大鼠肝纤维化组织蛋白表达的影响.方法:采用超微粉碎技术对大黄(蜜)虫丸原药材进行剂型改进,用猪血清复制大鼠免疫性肝纤维化模型.实验动物分为正常组、模型组、给药组.正常组ip等渗生理盐水0.5 mL,其余组ip猪血清0.5 mL,每周2次,连续12周.药物组于造模之日起ig给予大黄蜜虫超微粉水溶液(剂量0.27 g·kg-1),正常组与模型组ig等容积生理盐水,每天1次,连续12周.第12周末处死大鼠,取血与肝组织.检测指标包括肝组织病理学变化:HE染色与Masson染色观察肝纤维化程度；血清纤维化指标:透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)；血清肝功能指标:丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST).同时利用2D DIGE和质谱分析技术比较模型组与给药组大鼠肝组织蛋白表达量的差异,用免疫印迹法及免疫组化法对差异蛋白进行验证.结果:模型组肝组织假小叶形成,肝组织胶原纤维含量与血清ALT,AST及HA,LN,PCⅢ,Ⅳ-C指标显著高于正常组(P＜0.01).给药组肝脏无假小叶形成,肝组织胶原纤维含量与血清ALT,AST及HA,LN,PCⅢ,Ⅳ-C指标显著低于模型组(P＜0.01).2D DIGE结果显示有58个表达量差异大于2倍的蛋白质点,初步鉴定了12个,并验证了Regucalcin,ERp57,CAⅢ蛋白在各组大鼠肝组织的表达,与2D DIGE结果一致.结论:大黄蜜虫超微粉剂能显著降低大鼠肝组织纤维化程度、降低血清纤维化及肝功能指标,提示其对实验性免疫性肝纤维化有较好防治作用；它能调节大鼠肝纤维化组织Regucalcin,ERp57,CAⅢ蛋白表达量,这些蛋白可能通过细胞钙稳态失调、过氧化应激、炎症反应、免疫反应、纤维组织癌变等机制参与肝纤维化的病理过程.
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心肌缺血血瘀小型猪模型差异蛋白质组学研究
目的:利用基于荧光差异凝胶电泳(DIGE)技术的差异蛋白质组学的方法筛选心肌缺血血瘀证小型猪血浆差异表达的蛋白,以期发现心肌缺血血瘀证特征性的差异蛋白质或蛋白质群.方法:对模型动物施行冠脉Ameroid环缩术,通过动态观察,综合评价,明确术后4周动物表现为冠心病(心肌缺血)血瘀证稳定的时间点.4周时前腔静脉取血,枸橼酸钠抗凝并加入蛋白酶抑制剂,血样处理后进行荧光双向差异凝胶电泳(2D-DIGE),运用Decyder软件分析得到差异蛋白点,进行MALDI-TOF/TOF分析,获取蛋白样品的肽质量指纹图.结果:共筛选出31个差异表达蛋白质点,其中17个蛋白质点在4周模型组中下调,14个蛋白点上调.对其中15个蛋白点采用质谱技术成功鉴定.白蛋白、血红素蛋白、烟酸受体在4周模型组中低表达,CH4and secrete domain of Swine IgM、mutatedimmunoglobulin heavy chain、肌球蛋白、磷脂酶C、白细胞抗原相关酪蛋白磷酸酶相关蛋白、磷酸核糖焦磷酸相关蛋白-1、Ig gamma 4 chain constant region在4周模型组中高表达.结论:初步发现白蛋白、碱性磷酸酶、肌球蛋白、白细胞抗原相关酪蛋白磷酸酶相关蛋白、磷酸核糖焦磷酸合成酶相关蛋白1、血红素蛋白、烟酸受体、CH4and secrete domain of Swine IgM、mutated immunoglobulin heavy chain、磷脂酶C可能与心肌缺血血瘀证相关,有待于进一步的验证及机制研究.
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多巴胺诱导SH-SY5Y细胞帕金森病模型中GRP78的表达
目的:探讨神经毒素多巴胺(DA)诱导SH-SY5Y细胞帕金森病(PD)细胞模型中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达.为深入研究PD的发病机制提供理论依据.方法:建立多巴胺诱导SH-SY5Y细胞帕金森病模型,实验组加入DA(溶解于0.2%维生素C,DA终浓度为200 μmol·L~(-1)),对照组加入等体积的0.2%维生素C,分别孵育24 h,台盼蓝染色检测细胞存活率,Hoechst33342染色检测细胞凋亡.分别提取实验组和对照组细胞总蛋白,应用荧光差异双向凝胶电泳(DIGE)技术获得蛋白点的差异表达,应用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)鉴定差异蛋白质.结果:实验组细胞存活率为53.2%,与对照组细胞存活率(100%)比较显著下降(P<0.05).荧光染色,实验组可见细胞核呈同缩状或碎裂状,呈典型的凋亡形态学改变;对照组可见细胞胞核着均匀一致蓝色.DIGE分析,实验组表达增高的一个蛋白质点,经质谱分析鉴定确认为GRP78.结论:多巴胺能够诱导SH-SY5Y细胞凋亡,凋亡过程中GRP78表达增高,提示GRP78增高可能与PD的发病机制有关.
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葡萄子原花青素对糖尿病大鼠主动脉载脂蛋白A-I表达的影响
目的 观察葡萄子原花青素(GSPE)对链脲佐菌素(SIZ)诱导的糖尿病大鼠主动脉栽脂蛋白A-I(apoA-I)的影响.方法 雄性Wistar大鼠随机分成对照组(C组,n=10)、糖尿病组(DM组,n=9)和糖尿病GSPE治疗组(DM+GSPE组,n=13).24周后处死动物,留取主动脉标本,HE染色观察各组动物主动脉形态变化,并应用荧光差异凝胶电泳技术观察GSPE对糖尿病大鼠主动脉apoA-I表达的影响.结果 糖尿病组大鼠主动脉内皮细胞肥大,结构紊乱,平滑肌细胞增生,内弹力板破坏,管腔变小,经GSPE治疗后,上述变化均未出现,血管结构接近对照组.糖尿病组大鼠apoA-I表达较对照组明显下降(DM组/C组:-1.68),而应用GSPE治疗后apoA-I表达上调(DM+GSPE组/DM组:1.77).结论 GSPE能够促进STZ诱导的糖尿病大鼠主动脉apoA-I表达,该机制可能与GSPE的血管保护作用相关.
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血清荧光差异凝胶电泳分析胰腺癌特异标志物
本研究运用荧光差异凝胶电泳(DIGE)对胰腺癌患者血清及正常人血清进行蛋白质差异分析,寻找新的胰腺癌血清标志物.
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蛋白质组学技术鉴定帕金森病模型中的3种新蛋白质
目的 利用蛋白质组学技术对MPP+诱导的PC12细胞帕金森病(PD)模型进行研究,以期发现PD发病机制中的新蛋白.方法 建立MPP+诱导的PC12细胞PD模型并提取细胞总蛋白,荧光差异凝胶电泳(D1GE)进行蛋白样品标记与分离,应用DeCyder软件分析蛋白质差异表达信息,运用MALDI-TOF质谱鉴定差异蛋白质.结果 质谱分析和数据库检索鉴定了3种可能同PD发病相关但在有关PD研究文献中尚未见报道的新蛋白质,他们分别足与线粒体功能相关的蛋白MPPs,具有分子伴侣活性的蛋白NAC和与免疫炎症相关的蛋白gc1qBP.结论 这些新发现蛋白可能与PD的发病机制密切相关.
