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冬凌草甲素抑制血管生成活性及作用机制
目的:研究冬凌草甲素抑制血管生成的活性及其作用机制.方法:采用体外和体内两种模式,研究冬凌草甲素在血管生成方面的抑制效应.通过体外培养心脏微血管内皮细胞,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的活力,酶联免疫吸附(ELISA)法测定血管内皮生长因子(VEGF)的含量;体内选择斑马鱼(Fli1-GFP)生物模式,观察冬凌草甲素对胚胎期血管生成和成鱼期血管损伤后再生的影响,并采用相对荧光定量PCR法检测VEGF通路上主要相关基因VEGFA,血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR)2,VEGFR3的表达量.结果:冬凌草甲素具有抑制血管生成活性的作用,可抑制体外内皮细胞活力,其半抑制浓度(IC50)8.04 mg·L-1,可使细胞血清中VEGF的表达量明显下降;可抑制斑马鱼胚胎期体节间血管生成,且抑制成鱼期血管损伤后再生,可能通过降低体内VEGFA,VEGFR2,VEGFR3基因的表达量从而抑制血管生成.结论:冬凌草甲素可有效抑制血管生成,为其抗肿瘤血管生成治疗提供了重要的科学依据.
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淋巴管内皮细胞的分离培养及生物学特性的观察
淋巴系统在人体新陈代谢过程中发挥着重要的作用,它参与了临床上诸多疾病如淋巴水肿、肿瘤等的发生、发展及转归过程,淋巴管内皮细胞(lymphatic endothelium, LEC)作为淋巴系统的功能细胞之一,在上述过程中扮演着重要角色,然而上述病理生理现象的基础研究进展缓慢,原因之一是目前所采用的LEC培养体系无论在细胞来源、所获得的细胞纯度方面均不理想.我们取新生小牛的胸导管,对其内皮细胞进行分离、原代培养及传代培养,观察其生长情况,并采用流式细胞术对其表面血管内皮细胞生长因子受体3(vascular endothelial growth factor receptor-3, VEGFR-3)的特异性表达进行检测.
关键词： 淋巴管内皮细胞 血管内皮细胞生长因子受体3 -
VEGFR-3 siRNA腺病毒表达载体对结肠癌细胞凋亡和侵袭的影响
目的：探讨靶向血管内皮细胞生长因子受体3(vascular endothelial growth factor receptor-3, VEGFR-3)基因的小干扰RNA ( small interfering RNA,siRNA)腺病毒载体对人结肠癌LoVo细胞系凋亡及侵袭的影响。方法将靶向VEGFR-3 siRNA腺病毒转染结肠癌LoVo细胞,以Western blotting检测VEGFR-3蛋白的表达,Hoechst 33342染色法和流式细胞仪检测LoVo细胞的凋亡情况,用Transwell小室测定LoVo细胞的侵袭力。结果实验组与空白对照组和阴性对照组比较,实验组中转染靶向VEGFR-3 siRNA腺病毒后结肠癌LoVo细胞中VEGFR-3蛋白的表达被下调(P<0.05)。 Hoechst 33342染色法和流式细胞仪检测LoVo细胞凋亡率明显升高(P<0.05),Transwell小室测定LoVo细胞侵袭能力下降(P<0.05)。结论靶向VEGFR-3 siRNA腺病毒能下调结肠癌Lo-Vo细胞中VEGFR-3蛋白的表达,从而诱导结肠癌LoVo细胞的凋亡,抑制其侵袭能力,因此,VEGFR-3可以作为结肠癌靶向治疗的一个潜在靶点。
