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风轮菜总黄酮不同极性部位的抗氧化作用研究
目的：探讨风轮菜总黄酮的不同极性部位对缺氧／复氧诱导的 H9c2心肌细胞损伤的保护作用。方法：建立缺氧／复氧 H9c2心肌细胞损伤模型，对风轮菜总黄酮10％甲醇部位（2＃）、20％甲醇部位（3＃）、30％甲醇部位（5＃）进行药物浓度筛选，采用 MTT 法测定细胞存活率。收集培养细胞及其上清液测定乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）及过氧化氢酶（CAT）的活性和丙二醛（MDA）的含量。结果：与正常对照组比，模型组 H9c2心肌细胞经过缺氧4h 复氧24h 造模后，细胞活力显著降低。与模型组比较，2＃、3＃、5＃给药组显著增加 H9c2心肌细胞活力。与正常对照组比较，模型组的 SOD、GSH-Px 及 CAT 的活性均显著降低，而 LDH 活性、MDA 含量均升高，2＃、3＃、5＃给药组可呈浓度依赖性显著增加 SOD、GSH-Px 及 CAT 活性，降低 LDH 活性及 MDA 含量。结论：2＃、3＃、5＃对缺氧／复氧诱导的 H9c2心肌细胞损伤具有保护作用，其与增强细胞清除氧自由基能力、降低脂质过氧化物的产生有关。
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大鼠 H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤模型肌浆网钙调控相关蛋白表达及当归补血汤的干预作用
目的：建立缺氧/复氧大鼠 H9c2心肌细胞损伤模型，观察心肌细胞肌浆网钙调控相关蛋白表达及当归补血汤对 H9c2细胞缺氧/复氧损伤钙超载的影响。方法 JC-1染色流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位， Fluo-3 AM 钙离子荧光探针检测细胞内钙离子浓度，RT-PCR 荧光相对定量检测大鼠心肌肌浆网 Ca 转运 ATP酶（SERCA2a）、L 型钙通道（CAV1.3）、兰尼碱受体（RyR1，RyR2）、受磷蛋白（PLB）、肌集钙蛋白（ CASQ）的mRNA 表达水平。结果与正常对照组比较，模型组细胞早期凋亡显著增加（P ＜0.05），细胞内钙离子浓度增加明显（P ＜0.05），CAV1.3mRNA 表达水平显著升高（P ＜0.05），RyR1和 CASQmRNA 表达明显降低（P ＜0.05）。SERCA2a 和 PLB mRNA 表达水平亦降低但差异无统计学意义。当归补血汤干预后，与模型组比较，能够显著降低复氧损伤细胞的早期凋亡率（ P ＜0.05），细胞内钙离子浓度降低，差异具有统计学意义（P ＜0.05）。SERCA2a 和 CASQ mRNA 水平显著增加（P ＜0.05），PLB 和 RyR1 mRNA 虽有不同程度的增加， CAV1.3mRNA 水平降低，但差异均无统计学意义（P ＞0.05）。结论 H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤后出现明显的钙超载及肌浆网钙调节蛋白调节紊乱现象，当归补血汤能够通过升高肌浆网钙调节蛋白 SERCA2a 和CASQ mRNA 的表达，减轻复氧后钙超载，降低复氧损伤 H9c2心肌细胞早期凋亡率。
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黄精多糖通过 TLR4-MyD88-NF-κB通路抑制缺氧／复氧 H9c2心肌细胞炎性因子释放
目的：探讨黄精多糖（Polygonatum sibiricum polysac-charides，PSP）对缺氧／复氧（hypoxia-reoxygenation，H／R）诱导H9c2心肌细胞 Toll 样受体4（Toll-like receptor 4，TLR4）-髓样分化因子88（myeloid differentiation factor 88，MyD88）-核因子-κB（nuclear factor κB，NF-κB）信号通路的调节作用。方法体外培养 H9c2心肌细胞并随机分组：正常对照组（C组）、模型组（H／R 组）、黄精多糖组（PSP 组）、TLR4抑制剂（TAK-242组）和 PSP ＋TAK-242组。C 组细胞用正常培养液常规培养27 h；H／R 组细胞进行缺氧21 h／复氧6 h 处理；TAK-242组、PSP 组和 PSP ＋TAK-242组的细胞在缺氧培养21 h 前分别加入含 TAK-242、PSP 和 PSP ＋TAK-242的培养基培养12 h，在常规条件下复氧6 h。PSP 和 TAK-242的终浓度分别是1.5 g·L －1和1μmol·L －1。处理结束后，采用MTT 法检测细胞活力，ELISA 法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）-α和白介素（interleukin， IL）-1β含量，Western blot 检测 NF-κB 和 inhibitor κBα（IκBα）的蛋白表达，荧光定量 PCR 法检测 H9c2心肌细胞中 TLR4、MyD88的 mRNA 表达。结果与 H／R 组比较，PSP组、TAK-242组和 PSP ＋TAK-242组均能明显提高 H／R 损伤后心肌细胞的存活率，减轻其炎性因子渗出，明显下调 NF-κB 的表达，抑制 H／R 诱导的 IκBα蛋白的降解，降低 TLR4和 MyD88基因的表达。结论PSP 保护 H9c2心肌细胞 H／R 损伤的机制可能与抑制 TLR4-MyD88-NF-κB 信号通路有关。
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胰岛素对脂多糖诱导的 H9c2心肌细胞损伤的保护作用及其机制
目的：观察胰岛素（IN）对脂多糖（LPS）诱导的 H9c2心肌细胞损伤的保护作用，并探讨解偶联蛋白2（UCP2）在其过程中的可能作用。方法采用随机对照分组的方法，把 H9c2心肌细胞培养24 h 后随机分为对照组、LPS 刺激组（LPS 组）、LPS ＋70 IU/ L 胰岛素组（IN 70 IU/ L 组）、LPS ＋350 IU / L 胰岛素组（IN 350 IU/ L 组）和 LPS ＋700 IU/ L 胰岛素组（IN 700 IU/ L 组）5组，胰岛素处理组于 LPS 刺激前15 min 加入相应剂量胰岛素，对照组加入与 LPS 等量的9 g/ L 盐水。然后 LPS 组和胰岛素处理组都接受 LPS 处理24 h。处理结束后检测乳酸脱氢酶（LDH）水平、丙二醛（MDA）水平、总超氧化物歧化酶（SOD）活力以及比色法检测细胞内活性氧（ROS）水平；细胞活力检测试剂盒检测细胞活力；实时反转录聚合酶链反应及蛋白印迹法分别检测 UCP2基因转录及蛋白表达。结果与对照组比较，LPS 组 LDH 水平、细胞内 MDA 及 ROS 水平均显著升高[LDH：（829.3±75.3）U/ L 比（223.5±23.6）U/ L，MDA：（60.90±5.73）nmol/ mgprot 比（19.70±1.99）nmol/ mgprot， ROS：（410.2±81.6）U/ well 比（94.3±18.5）U/ well，P 均﹤0.05]，细胞活力和 SOD 活力均降低[细胞活力：0.822±0.058比1.012±0.023，SOD：（49.20±5.81）U/ mgprot 比（89.80±2.57）U/ mgprot，P 均﹤0.05]，UCP2 mRNA 和 UCP2蛋白表达均升高（1.867±0.130比1.028±0.097，0.288±0.018比0.180±0.008，P 均﹤0.05）；与 LPS 组比较，350 IU/ L 和700 IU/ L 胰岛素预处理可降低细胞上清 LDH 水平、细胞内 MDA 和 ROS 水平[LDH：（568.2±35.7）U/ L、（622.8±27.6）U/ L 比（829.3±75.3）U/ L，MDA：（29.20±4.20）nmol/ mgprot、（42.10±2.32）nmol/ mgprot 比（60.90±5.73）nmol/ mgprot，ROS：（270.3±46.8）U/ well、（301.5±16.9）U/ well比（410.2±81.6）U/ well，P 均﹤0.05]，使细胞活力和 SOD 活力上高[细胞活力：0.960±0.029、0.906±0.039比0.822±0.058，SOD：（75.20±2.21）U/ mgprot、（61.20±3.38）U/ mgprot 比（49.20±5.81）U/ mgprot，P 均﹤0.05]，UCP2 mRNA 和 UCP2蛋白表达均升高（3.830±0.265、2.855±0.215比1.867±0.130，0.464±0.215、0.355±0.006比0.288±0.018，P 均﹤0.05）。与70 IU/ L 组及700 IU/ L 组比较，350 IU/ L 组的保护作用更明显。结论胰岛素可降低 LPS 诱导的 H9c2心肌细胞氧化损伤，可能是通过上调受损心肌细胞内 UCP2的表达，从而发挥细胞保护作用。
