首页 > 文献资料
-
丹酚酸 A、B 及其分子药对配伍对肾纤维化过程中 CTGF 及 Par-3的干预作用
目的：观察丹酚酸 A、B 及其分子药对配伍对肾纤维化中 CTGF 及 Par-3表达的影响。方法：采用50只雄性 SPF 级SD 大鼠随机分为5组：正常组、造模组、丹酚酸 A 组、丹酚酸 B 组及丹酚酸 A ＋B 组。除正常组外，其余大鼠均造成 UUO模型。各组予相应药物治疗2周，腹主动脉采血检测大鼠 Cr、BUN；免疫荧光观察大鼠肾组织 CTGF、Par-3表达情况。结果：1）肾功能检测：模型组大鼠血清 Cr，BUN 水平显著高于正常组（P ＜0．05）。丹酚酸 A 组大鼠血清 Cr 水平明显低于模型组（P ＜0．05）；丹酚酸 A 组和丹酚酸 B 组大鼠血清 BUN 水平明显低于模型组（P ＜0．05）；各治疗组间比较，血清 Cr 和BUN 水平差异无统计学意义（P ＞0．05）。2）CTGF 免疫荧光检测：和正常组相比，模型组大鼠肾组织肾小管上皮细胞阳性细胞数目明显增多，荧光强度明显增强（＋＋＋）；经丹酚酸 A、B 及组分配伍治疗后，CTGF 荧光强度较模型组明显减弱，其中以丹酚酸 A ＋B 组减弱较为明显（±），丹酚酸 B 组次之（＋）。3）Par-3免疫荧光检测结果：模型组大鼠肾组织肾小管上皮细胞阳性细胞数目比正常组明显减少，荧光强度明显减弱（±）；经丹酚酸 A、B 及组分配伍治疗后，丹酚酸 A、B、A ＋B组 Par-3荧光强度较模型组明显增强，其中以丹酚酸 A ＋B 组增强较为明显（＋＋＋），丹酚酸 B 组次之（＋＋）。结论：经丹酚酸 A、B 及其分子药对配伍治疗后，可一定程度改善大鼠肾功能，但无统计学意义；丹酚酸组分配伍组能显著抑制大鼠肾组织 CTGF 的表达、促进 Par-3的表达，其效果优于丹酚酸 A 和丹酚酸 B 组。该机制可能与其促进 Par-3在 UUO 大鼠肾组织中的表达和减少 CTGF 的表达有关。
-
内质网蛋白29在肾小管上皮细胞转分化中的作用
目的:观察TGF-β1诱导的正常大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E)转分化过程中内质网蛋白29(ERP29)表达变化及上调表达ERP29蛋白对TGF-β1诱导NRK52E细胞极性蛋白Par-3的影响.方法:应用TGF-β1(10 ng/ml)刺激NRK52E细胞,采用Western印迹和免疫荧光方法分别检测内质网蛋白29、Par-3mRNA及蛋白的表达;应用Lipofect-mine2000将ERP29质粒瞬时转染NEK52E细胞,采用Western印迹方法检测细胞极性蛋白Par-3表达变化.结果:TGF-β1刺激后,NRK52E细胞内质网蛋白29表达呈时间依赖模式逐渐下调,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).脂质体转染外源性质粒pcDNA/ERP29上调表达ERP29可显著上调表达细胞极性蛋白Par-3.结论:TGF-β1诱导NRK52E细胞转分化进程中内质网蛋白29表达显著下调,基因转染上调表达ERP29可显著提高细胞极性蛋白Par-3表达,提示ERP29在维持细胞极性、阻抑转分化进程中发挥重要作用.
-
内质网蛋白29在维持肾小管上皮细胞极性中作用
目的 观察内质网蛋白(ERP)29在大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型中表达变化及对细胞极性蛋白Par-3表达的影响.方法 选取清洁级雄性SD大鼠24只,随机分为假手术组(n=6)与模型组(n=18).假手术组打开腹腔及分离输尿管,未进行结扎;模型组打开腹腔,双结扎左侧输尿管后缝合切口,造模为UUO模型大鼠.模型组于术后第3、7、14天各处死6只大鼠,假手术组6只大鼠于第14天处死.取两组大鼠肾组织,Western印迹、免疫荧光、免疫组化法进行病理染色及检测E-钙粘素(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Par-3蛋白和ERP29蛋白表达情况.结果 Masson染色显示,模型组大量肾小管萎缩消失,广泛纤维化,且肾间质的纤维化程度逐渐加重.Western印迹及间接免疫荧光/免疫组化结果显示,模型组E-cadherin表达、细胞极性Par-3蛋白、ERP29表达下调;α-SMA表达上调.模型组14 d的E-cadherin蛋白表达与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05);模型组各时点α-SMA表达均较假手术组上调,差异有统计学意义(P<0.05);模型组14 d时Par-3蛋白表达下调显著,与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05);模型组各时间点ERP29蛋白表达与假手术组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 UUO大鼠模型中发生肾小管上皮细胞转分化过程中,肾小管上皮细胞中ERP29表达下调,可能通过减少细胞极性蛋白的表达而致上皮细胞极性丧失,提示ERP29在维持肾小管上皮细胞极性中发挥重要作用.
-
黄芪丹参“药对”干预肾纤维化抑制因子par-3的量效关系研究
目的 探讨黄芪丹参“药对”对大鼠肾间质纤维化的保护作用及其干预肾纤维化抑制因子par-3的量效关系.方法 将40只雄性SD大鼠随机分为正常组(n=8)和造模组(n=32).造模组采用单侧输尿管梗阻(UUO)建立肾间质纤维化模型,造模后分为模型组(n=8),黄芪丹参低剂量组(n=8)、中剂量组(n=8)、高剂量组(n=8).造模后第2天开始各组给予相应的干预措施；2周后处死大鼠,收集相应标本,检测肾功能、尿α1-微球蛋白,观察肾组织病理改变,并应用Western Blot方法检测肾组织pa r-3蛋白的表达情况.结果 ①与正常组比较,模型组及各治疗组血清Cr明显高于正常组(P＜0.05)；除高剂量组BUN水平无差异外,其余各组血清BUN明显高于正常组(P＜0.05).②与模型组比较,各治疗组尿α1-微球蛋白均降低(P＜0.05),各治疗组间差异无统计学意义(P＞0.05).③与模型组比较,各治疗组肾脏组织病理情况均有不同程度的改善.④黄芪丹参“药对”可以促进par-3的表达,并且随用药剂量的增高表达量增加.结论 黄芪丹参“药对”可通过促进par-3的表达,从而保护肾小管功能,减轻肾间质纤维化的进展,并呈一定的量效关系.
-
Par-3蛋白在转化生长因子β1介导的大鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用
目的 观察转化生长因子(TGF)β1诱导的正常大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E)转分化(EMT)过程中细胞极性蛋白Par-3的表达及上调Par-3蛋白表达对TGF-β1诱导NRK52E细胞转分化进程的影响.方法 应用TGF-β1(10 μg/L)刺激NRK52E细胞,采用RT-PCR、Western印迹和免疫荧光方法分别检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Par-3 mRNA和蛋白的表达;应用Lipofectmine 2000将pKH3-HA-Par-3质粒瞬时转染NEK52E细胞,采用Western印迹观察上调表达Par-3对上述指标的影响.结果 TGF-β1刺激后,NRK52E细胞α-SMA蛋白和mRNA水平上调,E-cadherin蛋白和mRNA的表达下调;Par-3蛋白表达呈时间依赖模式下调,72 h TGF-β1刺激组与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).但Par-3 mRNA水平在各时间点差异均无统计学意义(P＞0.05).脂质体转染外源性质粒pKH3-HA-Par-3上调表达Par-3可显著抑制TGF-β1诱导NRK52E细胞α-SMA蛋白的上调表达;逆转E-cadherin蛋白的下调表达.结论 在TGF-β1诱导NRK52E细胞转分化进程中细胞极性Par-3蛋白表达下调,基因转染上调表达Par-3可部分减轻EMT的程度,提示Par-3蛋白在TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化和肾脏纤维化中可发挥保护性作用.
