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异长春花苷内酰胺注射给药对心血管系统影响的实验研究
目的：观察异长春花苷内酰胺大剂量注射给药对麻醉Beagle犬心血管系统的影响，并考察其体外对离子通道的抑制作用。方法：采用生理记录仪观察异长春花苷内酰胺静脉注射前后不同时间点Beagle犬收缩压（Sys），舒张压（Dia），平均动脉压（MBP），心率（HR），心电图PR间期、QRS间期、QT间期、QTcb间期、QTcv间期等指标的变化；应用全细胞膜片钳技术考察不同浓度异长春花苷内酰胺对CHO-hERG细胞上hERG钾离子通道和HEK-293-Nav1.5细胞上Nav1.5钠离子通道的抑制作用。结果：与空白对照组相比，异长春花苷内酰胺60、18 mg·kg-1剂量组、溶媒对照组（含吐温-80）于给药后15 min Sys、Dia、MBP、HR明显降低（P<0.05），给药结束后各项指标可见恢复。与溶媒对照组相比，各给药剂量组在各观测时间点无显著性差异。与空白对照组及自身给药前相比，60、18、6 mg·kg-1剂量组、溶媒对照组于给药后15 min QT、QTcb、QTcv间期明显延长（P<0.05），给药结束后可见一定程度的恢复。与溶媒对照组相比，各给药剂量组QT、QTcb和QTcv间期在各观测时间点无显著性差异。异长春花苷内酰胺对hERG钾离子通道和Nav1.5离子通道抑制作用较弱，IC50为560.8μmol·L-1及>900μmol·L-1，远远大于阳性对照药。结论：异长春花苷内酰胺大剂量单次静脉注射对Beagle犬可能有一定的降低血压、减慢心率及延长QT间期的作用，停药后可恢复。其中血压降低、心率减慢与溶媒中所含吐温-80有关。体外对hERG钾离子通道和Nav1.5离子通道无明显影响，提示异长春花苷内酰胺对动物QT间期的影响可能为其它作用机制所致。
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心脏NAv1.5通道蛋白与心律失常关系研究进展
NAv1.5通道蛋白是一个复杂的大分子跨膜蛋白，核心由1个α亚基和1个或多个β亚基组成。 NAv1.5通道蛋白由SCN5A基因编码而成，参与心脏细胞动作电位的形成及电冲动的传导。 SCN5A基因突变后可引起NAv1.5通道蛋白功能的异常，临床上一些致死性遗传性心律失常的发生与SCN5A基因的突变相关，特别是心脏的离子通道性疾病，这个发现也为与NAv1.5通道蛋白相关的恶性心律失常的诊治提供了新方向。本文主要阐述人类心脏钠离子通道蛋白NAv1.5及与其相关的一些疾病的研究进展。
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电压门控钠通道在卵巢癌中功能性表达的研究
目的:探讨电压门控钠通道(voltage-gated sodium channels,VGSC)不同亚型表达及与卵巢癌转移的关系.方法:以人卵巢癌细胞和卵巢肿瘤组织标本为研究对象,用RT-PCR,激光共聚焦,MTT及Transwell小室法,检测卵巢癌细胞中VGSC表达的亚型及VGSC特异性阻断剂河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)对卵巢癌体外侵袭性的影响.结果:卵巢癌高转移细胞系(CAOV3,A2780,SKOV3)中高表达的VGSC亚型Nav1.5与卵巢癌的恶性生物学特性明显相关;30μmol/L TTX对CAOV3,A2780,SKOV3细胞体外的侵袭力的抑制率约为50%,差异有统计学意义(P<0.05),对不表达Nav1.5的低转移卵巢癌细胞Anglne的转移级联过程则没有明显影响.结论:VGSC亚型Nav1.5与卵巢癌的体外转移明显相关,可能成为卵巢肿瘤的潜在标记物和治疗靶点.
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中药甘松挥发油对HEK细胞Nav1.5电流电压及电导电压的影响
目的 应用膜片钳技术研究HEK细胞Nav1.5电流电压依赖性Na+电流失活与激活曲线, 甘松挥发油对电流-电压关系(I-V),电导-电压关系(G-V)曲线的影响, 以及对快Na+通道失活(H-I)的影响.方法应用膜片钳技术研究HEK细胞Nav1.5电压依赖性Na+电流失活曲线, I-V和H-I曲线.结果正常自然依赖性失活曲线向超极化移位,移动速度10 min内是4 mV.甘松挥发油能降低I-V曲线Na电流的峰电位,但不能改变其Na电位(ENa)从内流向外流的反转电位的方向.G-V曲线明显向超极化方面移动,Vg1/2 =(-59.8±4.22) mV是对照自然失活曲线;Vg1/2 =(-58.8±5.69) mV 是10 PPM甘松挥发油;Vg1/2 =(-68.0±4.36) mV是药物被洗脱后失活曲线(P＜0.01,n=6).在除去自然移动值后10 PPM甘松挥发油的Na电位失活作用明显.甘松挥发油应用前, 应用10 PPM甘松挥发油以及药物洗脱后H-I曲线与自然失活曲线比较,校正自然失活因素后10 PPM甘松挥发油实际移动Vg1/2是(18.0±4.50) mV (P<0.01, n=5),洗脱40 min后接近对照状态.结论甘松挥发油对I-V,G-V曲线有向超极化移位的影响.对快Na+通道有加速失活与抑制激活的作用, 然而电压依赖性Na失活是可逆性的.这一作用奠定了甘松挥发油抗心律失常的作用机制.
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人胚肾细胞心脏钠通道电流的频率和电压依赖性阻滞及其失活
目的 用人胚肾(HEK)细胞研究纯心脏钠通道电流(Nav1.5)频率、电压依赖性及快、慢钠通道失活以及利多卡因对其影响.方法 用膜片钳技术,观察两次刺激脉冲间隔钠电流对频率,电压依赖性阻滞程度.通过两种不同刺激程序产生快、慢钠电流并记录其失活过程.并观察0.1 mmol/L利多卡因对钠电流的频率依赖性阻滞.结果 电压钳制在-140 mV时钠电流抑制随频率刺激脉冲间隔时间缩短而阻滞加重.完全恢复正常平均值为33.2± 5.77 ms(n=9),当电压钳制在-90,-100 mV时, 钠电流完全恢复正常延迟至1 015 ms.快钠电流失活随钳制电压降低而加重,并呈现负相关(r=-0.97,P<0.01), 慢钠电流失活随钳制电压变化不甚明显.0.1 mmol/L利多卡因在-100 mV电压钳制下,导致20%Na+电流抑制,静息状态下产生轻微阻滞;且抑制随刺激频率增加而增加.结论 HEK细胞Nav1.5通道电流频率依赖性阻滞恢复与刺激频率、钳制电压高低有关;快钠电流失活随钳制电压降低而加重并呈负相关;利多卡因对HEK细胞Nav1.5通道有加重频率依赖性阻滞作用且随刺激频率增加而增加.
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电压门控钠通道亚型Nav1.5在乳腺癌细胞中的表达及与细胞体外转移的关系
目的 观察电压门控钠通道(voltage-gated sodium channels,VGSCs)亚型在乳腺癌细胞中的表达及其与细胞体外转移的关系.方法 通过RT-PCR,Western blot,MTT及Transwell小室迁移和侵袭实验,检测乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7中VGSCs的表达及VGSCS特异性阻断剂河豚毒素(TTX)对细胞的毒性、迁移和侵袭特性的影响.结果 在MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞中同时存在NaV1.1,NaV1.4和NaV1.8的高表达;而在MDA-MB-231细胞中发现NaV1.3和NaV1.5、NaV1.6的表达量较MCF-7细胞中明显升高,尤其是NaV1.5的表达具有功能性意义.体外应用1μmol/L和30μmol/L TTX处理细胞后,与对照组相比,MDA-MB-231细胞的体外侵袭性分别下降了(12.50±0.19)%和(53.58±1.03)%.而MCF-7细胞的体外侵袭性却没有发生明显变化.结论 乳腺癌细胞MDA-MB-231中存在高表达的NaV1.5,TTX阻断VGSCs后显著抑制其体外侵袭力.
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HEK细胞NaV1.5电流对甘松挥发油浓度及电压依赖性阻滞
目的:研究甘松挥发油对人肾胚胎(HEK)细胞Nav1.5电流的影响.方法:应用细胞膜片钳技术研究甘松挥发油对鼠cDNA编码组成的纯钠通道在人胚胎肾细胞(HEK)表达的Nav1.5细胞离子通道电流的影响.结果:发现甘松挥发油对Na电流的阻滞作用受挥发油浓度影响,量一效反应量呈"S"曲线型,电压钳制影响表现为膜电位越低(电位上移)阻滞作用越强.结论:甘松挥发油对钠电位有明显阻滞作用,其作用随剂量增加而增加,随膜电位降低而作用加强.提示临床可用于因心肌缺血导致膜电位降低而诱发的心律失常.
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电压-门控钠离子通道Nav1.5与肿瘤关系研究进展
Nav1.5钠离子通道是电压-门控钠离子通道的一种,研究发现Nav1.5不仅在维持正常电生理活动中扮演着重要的角色,而且其多种变构体的表达被认为是和肿瘤形成有密切关系的胚胎基因的再表达.近的研究证明Nav1.5在人体许多肿瘤组织中的表达水平显著升高,如人脑胶质瘤、乳腺癌等.深入研究发现其在各种肿瘤细胞的增殖和迁移等过程起着重要的作用.本文将结合国内外对电压-门控Na+通道Nay1.5的新研究进展及本小组的工作,对Nav1.5及其与相关肿瘤的关系作一综述.
关键词： 电压-门控钠离子通道 Nav1.5 肿瘤 -
NGFR/NF-κB/Nav1.5表达与脑胶质瘤病理分级相关性研究
目的 探讨Nav1.5、NGFR、NF-κB三种蛋白的表达水平与脑胶质瘤临床病理分级之间的相关性.方法 收集遵义医学院附属医院病理科2010～2017年胶质瘤患者石蜡包埋标本,21例初治患者为研究对象,采用免疫组织化学法检测脑胶质瘤组织Nav1.5、NGFR及NF-κB三种蛋白的表达水平,采用免疫荧光法检测脑胶质瘤组织中NGFR及NF-κB蛋白的表达水平,分析Nav1.5、NGFR及NF-κB三种蛋白表达水平与脑胶质瘤患者临床病理分级之间的关系.结果 免疫组织化学方法显示,高级别(Ⅲ级、Ⅳ级)脑胶质瘤中Nav1.5、NGFRR及NF-κB蛋白的表达水平显著高于低级别(Ⅰ级、Ⅱ级)脑胶质瘤的Nav1.5、NGFR及NF-κB蛋白的表达水平,且与临床病理分级呈正相关(P＜0.05).免疫荧光方法显示,高级别脑胶质瘤组织NGFR和NF-κB蛋白表达水平显著高于低级别脑胶质瘤NGFR和NF-κB表达水平.结论 Nav1.5、NGFR及NF-κB三种蛋白在胶质瘤组织中的表达水平与胶质瘤病理分级呈正相关.
