101乙醇和乙醛对人乳腺上皮细胞中苯并[a]芘-DNA加合物形成的影响

低剂量双酚A及其与苯并芘联合染毒对人乳腺上皮细胞MDM2基因的影响

目的 观察BPA与B[a]P联合作用对3种乳腺上皮细胞MDM2及TP53基因表达的影响.方法 采用细胞增殖荧光法检测环境相关剂量BPA对3种乳腺上皮细胞S期细胞比例的影响,采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹的方法分别检测环境相关剂量水平(10-9、10-7 mol/L) BPA及其与10-6 mol/L B[a]P联合作用对3种乳腺上皮细胞中MDM2和TP53基因及其编码的蛋白表达水平的影响.结果 环境相关剂量的BPA可以引起MCF-7细胞S期细胞比例增高;环境相关剂量的BPA单独作用对3种类型乳腺上皮细胞MDM2和TP53基因表达水平无显著影响;B[a]P单独作用可以引起MCF-10A细胞中MDM2基因表达水平的轻微增加及MCF-7细胞中MDM2基因表达的显著增加;在MCF-7细胞中BPA与B[a]P联合作用可明显增加B[a]P所引起的MDM2基因表达上调,而在HMEC和MCF-10A细胞未发现该现象,蛋白水平与mRNA水平的改变基本一致,同时p53/mdm2比值降低.结论 环境相关剂量的BPA与B[a]P联合作用可以在雌激素受体表达阳性的MCF-7细胞中引起MDM2基因及其蛋白产物表达水平的显著上调,提示环境暴露剂量的BPA可能通过雌激素受体依赖的作用途径增加化学致癌物致乳腺癌发生风险.

正常人乳腺上皮细胞的原代培养

目的 研究正常人乳腺上皮细胞原代培养的可行性,以及激素对其增殖的影响.方法 从乳房区段切除术切除组织中获取正常人乳腺组织,用胶原酶溶液消化乳腺组织分离得到较纯净的上皮细胞,用烧灼法结合酶消化法解决细胞纯化问题.细胞形态观察和电镜检测鉴定细胞.结果 正常人乳腺上皮细胞的原代培养是可行的.1×10-5的雌二醇和孕酮混合液可以促进细胞增殖.

双酚A与苯并[α]芘联合作用对三种乳腺上皮细胞的DNA损伤效应

[目的]观察双酚A(BPA)与苯并[α]芘(BaP)联合作用对三种乳腺上皮细胞DNA损伤的影响. [方法]采用对DNA双链断裂标志pH2AX免疫荧光检测的方法,观察环境相关剂量水平(10-9,10-7 mol/L)BPA、10-9 mol/L17-β-雌二醇(雌激素对照)及其与10-6 mol/L BaP联合作用对人乳腺上皮细胞(HMEC)、人永生化乳腺上皮细胞MCF-10A(CRL-10317)和人乳腺上皮肿瘤细胞MCF-7三种乳腺上皮细胞的DNA损伤效应(以二甲基亚砜作为溶剂对照),并应用实时荧光定量聚合酶链反应法检测三种细胞雌激素受体α和雌激素受体β的基因ESR1、ESR2mRNA水平的相对表达量.[结果] BPA对三种类型乳腺上皮细胞pH2AX阳性率均无明显影响.BaP可明显增加HMEC和MCF-7两种乳腺上皮细胞pH2AX阳性率:单独染毒时两种细胞pH2AX阳性率分别由(34.7±2.2)％和(3.1±0.3)％增至(63.6±1.2)％和(13.3±0.4)％；与10-7 mol/LBPA、10-9 mol/L 17-β-雌二醇分别联合作用可使MCF-7的pH2AX阳性率增至(15.1±0.2)％、(17.5±1.0)％,与单独染毒组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).三种细胞内ESR1、ESR2基因表达有差异,其中ESRI基因表达差异明显,在MCF-7中的表达水平高,为HMEC的1 080倍、MCF-10A的5222倍. [结论]BPA与BaP联合作用与BaP单独作用相比,可引起MCF-7的DNA双链断裂损伤加剧,该作用可能与雌激素受体表达水平相关.

牛初乳IGF-I对体外培养人乳腺上皮细胞系HBL-100影响的研究

实验研究了牛初乳IGF-I对体外培养人乳腺上皮细胞系HBL-100的影响.筛选IGF-I对HBL-100的佳作用浓度并研究其对细胞生长曲线、细胞群体倍增时间、细胞生长饱和密度的影响.采用HPLC法对乳糖含量进行测定,以反映牛初乳IGF-I对人乳腺上皮细胞系HBL-100泌乳能力的影响.实验确定佳IGF-I浓度为200 ng/ml,细胞倍增时间短为13.8 h,细胞生长饱和密度达到8.602×105/ml;高浓度的牛初乳IGF-I有抑制人乳腺上皮细胞生长的趋势;牛初乳IGF-I可以明显促进HBL-100细胞乳糖的合成.