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微量高通量细胞培养法在脑炎病毒分离中的应用
目的 建立用微量高通量、多细胞谱培养法分离未明原因脑炎患儿中病毒的方法,探讨脑炎患儿中肠道病毒的感染情况.为大量、及时分离病毒、病毒鉴定和分子流行病学研究奠定基础.方法 将8株不同的细胞接种于96孔细胞培养板中,每种细胞接种一行,细胞长成单层后孔内接种脑脊液标本,每孔5-10μl,每份标本纵向接种8孔(8种细胞系),35℃、5%CO2培养.出现细胞病变(cytopathic effect,CPE)者传代培养两次.两次均出现CPE者视为细胞培养阳性,-70℃保存用于病毒鉴定.将培养物首先用肠道病毒通用引物做逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)并测序,进行初步筛查.结果 93份标本中有56份出现明显的CPE,病毒分离率为60.22%(56/93),其中在MA104细胞出现病变者40份,阳性率为43.01%.其中6份培养物的RNA用肠道病毒通用引物得到了扩增,序列测定确定为肠道病毒.结论 微量多细胞培养法具有简便、快速等特点,适合用于病毒的初步筛查.
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多细胞株微量培养法在病毒性脑炎、脑膜炎患儿病原学检测的应用研究
目的 探讨多细胞株微量培养法在病毒性脑炎、脑膜炎病原学检测中的应用价值.方法 将脑脊液(CSF)标本过滤除菌后分别接种于含有青霉素和链霉素微量细胞培养板单层细胞上,每份标本平行接种8株细胞:MA104、MDCK、HEL、HEK293、Vero、Hep-2、Hela和BHK-21.静置培养,获得稳定的病毒株.以肠道病毒(EV)组合血清鉴定引起病毒性脑炎、脑膜炎的常见病毒类型.结果 126份病毒性脑炎、脑膜炎患儿CSF标本82份分离到病毒,阳性率63.0％,其中MA104阳性率为57.1％,MDCK阳性率为19.8％,HEL阳性率为11.9％,HEK阳性率为7.1％,Vero阳性率为6.3％,Hep-2阳性率为4.8％,Hela阳性率为4.0％,BHK-21阳性率为2.4％.病变细胞经血清学鉴定,78例鉴定出病毒株,鉴定率为92.8％,这些病毒中EV所占比例较高,为69.2％；ADV占11.5％,HSV-Ⅰ占5.1％,HSV-Ⅱ占6.4％；CMV占5.1％,INF占2.6％.结论 MA104细胞是分离CSF中病毒较敏感的细胞,可以作CSF中病原分离的首选细胞；联合多株细胞可提高细胞病变检出率.多株细胞微孔板培养法分离CSF病毒具有推广应用价值.
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微量细胞培养法在病毒性脑炎脑膜炎患儿病原学检测的应用价值探讨
目的探讨微量细胞培养法在病毒性脑炎、脑膜炎病原学检测中的应用价值及北方地区病毒性脑炎、脑膜炎的病原学构成.方法应用微量细胞培养法对122例临床诊断为病毒性脑炎、脑膜炎患儿的咽分泌物、粪便及脑脊液进行病毒分离.结果 122例脑炎、脑膜炎患儿共取鼻咽分泌物、粪便及脑脊液标本366份,分离到病毒69株,总阳性率为18.9%(69/366);其中脑脊液中分离到10株病毒,阳性率为8.2%(10/122).122例患儿中51例病毒分离阳性,其中肠道病毒25例,腺病毒Ⅲ型11例,单纯疱疹病毒Ⅰ型 9例,流感病毒 4例及巨细胞病毒2例.结论微量细胞培养法病毒分离具有操作简便、准确可靠、省时省物的优点,值得推广.
