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1例人感染腺病毒55型病原体的分离鉴定及进化分析
目的 对1例人感染腺病毒55型病原体进行分离鉴定及进化分析.方法 选取2015年5月安庆市某流感监测哨点医院采集的一例被诊断为急性上呼吸道感染患者的咽拭子标本作为研究样本,提取标本总核酸,采用人腺病毒通用引物进行real-time荧光定量PCR检测.将检出的阳性标本感染Hep-2细胞进行病毒分离.对成功分离的腺病毒毒株进行六邻体基因的扩增、 纯化并测序.测序结果提交GeneBank上Blast,同源分析确定型别、制作系统进化树以及分析六邻体基因和氨基酸序列. 结果 对咽拭子标本中的病毒核酸进行荧光定量PCR 检测,结果显示,腺病毒核酸DNA检测呈阳性(Ct<24).同源比对结果显示,该株的六邻体(Hexon)基因与辽宁株、江苏株、河北株、山西株、安庆株(GenBank号分别为KP896483、KX289874、KP896478、FJ643676、KP279748)的同源性可达100%,与安徽株(KC551973)可达99.96%,存在一个核苷酸C→T的无义突变.进一步的分析显示,该株与参考株在系统发生树上处于同一进化分支,Hexon蛋白氨基酸的同源性为100%. 结论 此ADR标本由人腺病毒55型感染引起,其Hexon蛋白氨基酸没有出现变异.
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成人睾丸中一种新的calpastatin同源蛋白的克隆和分析
目的:克隆人精子发生相关的基因.方法:使用人胚胎和成人睾丸cDNA探针与本室制作的人睾丸cDNA微阵列杂交,差异杂交的克降进行序列测定和分析.结果:发现calpastatin在睾丸中表达的一种新的同源蛋白,在睾丸中高度表达.结论:calpastatin在睾丸中是以一种新的同源蛋白形式表达,可能与精子发生相关.
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从MT2和HeLa细胞及人和黑猩猩PBMC的DNA扩增出与GBV-C高同源性的核苷酸
目的：检测人源性细胞株DNA及人和黑猩猩外周血单核细胞(PBMC)DNA中是否存在与GBV-C基因组同源的核苷酸序列.方法：用PCR模板制备试剂盒提取MT2和HeLa细胞DNA及6例人和1例黑猩猩PBMC DNA，DNA经DNase的RNase消化后再用苯酚-氯仿提取.直接以上述DNA为模板，用GBV-C 5＇-NCR和NS3区引物进行套式PCR(dPCR)扩增.dPCR产物进行核苷酸序列分析，并用引物介导原位扩增(PRINS)DNA序列特异荧光标记技术确定扩增片段在染色体上的位置.结果：从MT2和HeLa细胞DNA及4例人PBMC DNA标本中获得GBV-C 5＇-NCR引物扩增片段.从MT2和HeLa细胞DNA及5例人和1例黑猩猩PBMC DNA标本中获得NS3区引物扩增片段.这些扩增产物的核苷酸序列与GBV-C基因组同源性为73.80％-79.15％.PRINS检测结果显示dPCR阳性的PBMC及其染色体上有荧光着色.结论：MT2和HeLa细胞DNA及人和黑猩猩PBMC DNA中存在与GBV-C 5＇-PCR和/或NS3区同源性较高的核苷酸序列，这些序列位于dPCR阳性的PBMC染色体上.
