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缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的研究
目的：探讨缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡和凋亡相关基因表达的相关机制。方法取体外新生大鼠心肌细胞作为试验样本，将其随即平均分配为四组，A组为对照组，B组为模拟缺血组，C组为缺血2 h后再灌注1h组，D组为缺血持续3 h组。采用TUNEL法对各组样本心肌细胞凋亡情况进行检测，并采用免疫组织化学法对Bcl-2/Bax基因的表达情况进行检测。结果在心肌细胞I/R后，检测到明显的阳性凋亡细胞，同时D组和C组细胞凋亡指数明显高于B组，差异具有显著性（P<0.05）；免疫组织化学检测结果表明，Bax蛋白表达明显上调，Bcl-2基因表达明显下调。结论缺血和缺血再灌注均会造成心肌细胞凋亡，同时心肌细胞的凋亡同Bcl-2/Bax基因的表达之间存在一定的相互作用关系。
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补肾方对β淀粉样蛋白所致大鼠海马神经元细胞毒作用的影响
目的:建立Aβ所致的神经细胞毒模型,探讨补肾方的药效及作用机理.方法:原代培养大鼠海马神经元.用25μmol/L聚集状态的Aβ1-42建立神经细胞毒模型.采用LDH释放量来检测神经元存活率,通过透射电镜、流式细胞计判断神经元凋亡,应用免疫细胞化学法研究凋亡相关基因(Bcl-2、Bax、c-Jun)的蛋白表达.结果:神经元经Aβ1-42处理后,LDH释放增加;电镜显示细胞体积缩小、染色质固缩、或浓聚成块状位于核周边、滑面内质网扩张;流式细胞计可见亚二倍体峰;Bcl-2的蛋白表达减少,而Bax与c-Jun表达增加补肾方使LDH释放减少,电镜下具有凋亡形态特征的细胞减少,流式细胞计显示凋亡率下降,Bcl-2蛋白表达增加,c-Jun表达减少,而Bax表达变化不明显.Tacrine组神经元存活率增加,但其它指标的变化不明显.结论:①补肾方对Aβ1-42神经细胞毒有保护作用,可提高细胞存活率,抑制凋亡.②其作用机制可能是通过提高bcl-2、降低c-Jun基因的蛋白表达而实现.③Tacrine对神经元存活率有提高作用.但抑制神经元凋亡的作用似不明显.补肾方对抑制Aβ所致神经元凋亡明显优于Tacrine.
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调心方对β淀粉样蛋白所致大鼠海马神经元凋亡的调控作用
目的探讨调心方的药效及作用机制.方法原代培养大鼠海马神经元,Aβ 1-42诱导神经细胞毒模型.采用FDA与PI双染检测神经元存活率,Hoechst 33258染色、TUNEL判断神经元凋亡,免疫细胞化学研究Caspase-3表达,Northern Blot、RT-PCR研究凋亡相关基因(bcl-2、bax、c-jun、c-fos)表达.结果神经元经Aβl-42处理后,活细胞数减少,染色质浓缩、核碎裂,TUNEL染色阳性神经元增多,Caspase-3表达增加,bcl-2 mRNA表达减少,而bax与c-jun表达增加、c-fos的表达变化不明显.调心方可显著改善上述变化.结论调心方对Aβ 1-42神经细胞毒有保护作用,可提高细胞存活率,抑制凋亡.其机制可能通过提高bcl-2 mRAN水平,降低bax和c-jun mRAN水平,减少Caspase-3表达而实现.
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热休克因子1调控的细胞凋亡相关基因的筛选与鉴定
[目的] 观察热休克因子1在热休克反应时对细胞凋亡相关基因表达的调控,同时筛选和初步鉴定热休克因子1调控的下游凋亡相关基因.方法采用热休克因子1基因敲除小鼠热休克反应模型,抽提热休克因子1基因敲除小鼠和野生型小鼠心肌和肺组织的总RNA进行基因芯片实验,观察凋亡相关基因表达的情况;同时采用生物信息学技术对上述差异表达基因的启动子区进行分析,筛选含有热休克元件的基因;通过逆转录-聚合酶链反应进一步验证热休克因子1对上述基因表达的调控.结果热休克反应后,野生型小鼠与热休克因子1基因敲除小鼠组织中差异表达的细胞凋亡相关基因有40个.经Genomatix和TESS软件分析发现其中Fasl、 Fas、 Bim、 Bak等8个基因的启动子区含有热休克因子1结合位点.经逆转录-聚合酶链反应证实,热休克反应使Fasl在热休克因子1基因敲除小鼠的表达较野生型小鼠明显增高,而在稳定转染热休克因子1的Raw264.7细胞,Fasl的表达较转空载体细胞明显降低.结论热休克因子1可调控Fasl等多个细胞凋亡相关基因的表达.
