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人宫颈鳞状上皮细胞癌组织中钙激活性中电导钾离子通道的表达
目的 探讨人宫颈鳞状上皮细胞癌(简称鳞癌)组织中电导钾离子通道(IKCa1)mRNA及其蛋白产物与正常宫颈上皮组织中钙激活性的差异.方法 采用免疫组织化学法及RT-PCR法分别检测30例不同分化程度的宫颈鳞癌组织和18例正常宫颈上皮组织中IKCa1 mRNA及其蛋白产物的表达情况.结果 (1)IKCa1 mRNA阳性表达率15例子宫颈鳞癌组织中分别为73.3 %,表达水平为(1.2±0.5),18例正常宫颈上皮组织中分别为11.1%,表达水平为(0.9±0.2),差异均有统计学意义;(2)30例宫颈鳞癌组织细胞核及细胞膜上IKCa1蛋白产物均呈阳性表达;正常宫颈上皮组织中仅1例在鳞状上皮部位细胞膜部位有较弱表达,差异有统计学意义;(3)宫颈鳞癌组织中IKCa1 蛋白产物的表达与癌细胞分化程度呈正相关.结论 IKCa1的高表达与宫颈鳞癌的发生和发展密切相关.
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宫颈鳞状上皮细胞癌组织中钙激活性中电导钾离子通道蛋白产物表达分析
目的 探讨正常宫颈和宫颈癌组织中钙激活性中电导钾离子通道( IKCa1)与人类宫颈鳞状上皮细胞癌的相关性.方法 取2007年10月至2008年4月泸州医学院附属医院手术治疗的30例不同分化程度的宫颈鳞状上皮细胞癌患者病变部位组织作为实验组,同时期18例正常宫颈上皮组织作为对照组,分别采用免疫组织化学方法检测上述组织中IKCa1蛋白产物表达部位及表达水平.结果 IKCa1在30例宫颈鳞状上皮细胞癌组织细胞核及细胞膜上均呈阳性表达,阳性表达率为100.0％；18例正常宫颈上皮组织中仅1例在鳞状上皮部位细胞膜部位有较弱表达,阳性表达率为5.6％,IKCa1蛋白产物在宫颈鳞状上皮细胞癌组织中的表达程度及表达部位均与正常宫颈组织中存在明显差异(Z=-6.109,P=0.00,P＜0.05).在不同分化程度的宫颈鳞状上皮细胞癌组织中,高分化鳞癌组阳性表达率为40.0％,中分化鳞癌组阳性率为90.0％,低分化鳞癌组阳性率为100.0％；IKCa1蛋白产物表达程度与癌细胞分化程度呈负相关(X2=8.4,P＜0.05).结论 宫颈鳞状上皮细胞癌组织中IKCa1蛋白产物的表达明显高于正常宫颈组织；且IKCa1蛋白产物表达水平与癌细胞的分化程度呈负相关；过高表达的IKCa1与宫颈鳞状上皮细胞癌的发生和发展可能存在重要联系.
关键词： 钙激活性中电导钾离子通道 宫颈肿瘤 免疫组织化学 -
siRNA抑制IKCa1基因表达对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响
目的:研究siRNA(small interfering RNA)抑制钙激活性中电导钾离子通道(intermediate - conductance Ca2+- activated K+ channels,IKCa1)表达对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响.方法:构建含有IKCal基因的siRNA表达载体,脂质体法转染HeLa细胞,通过RT - PCR和Western Blot检测HeLa细胞IKCa1 mRNA和蛋白表达变化；WST-1检测细胞增殖能力；流式细胞仪分析HeLa细胞周期变化.结果:成功构建针对IKCa1基因的真核表达载体,所获表达载体转染HeLa细胞可使IKCa1mRNA和蛋白表达水平显著降低(P＜0.05),并能有效抑制HeLa细胞增殖(P＜0.05),使细胞周期停留在G0～G1期,S期细胞明显减少.结论:应用siRNA干扰技术能有效抑制IKCa1基因的表达,同时也可有效抑制宫颈癌HeLa细胞体外增殖活性.
关键词： 钙激活性中电导钾离子通道 小干扰RNA Hela细胞 -
KCa3.1表达改变对子宫内膜癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响
目的:探讨钙激活性中电导钾离子通道(intermediate-conductance Ca2+- activated K+ channels,KCa3.1)表达水平和活性改变对子宫内膜癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响.方法:将携有KCa3.1 RNA干扰(RNA interference,RNAi)片段的质粒转染子宫内膜癌HEC-1-A和Ishikawa细胞,应用实时荧光定量PCR(real time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)及Western 印迹法检测KCa3.1的表达变化;应用MTT法、BrdU掺入法、FCM及Western 印迹法检测KCa3.1特异性阻断剂TRAM-34和KCa3.1 RNAi表达质粒干扰后,子宫内膜癌细胞株增殖、细胞周期、凋亡及cyclin D1、cyclin E及survivin蛋白表达的改变.结果:KCa3.1 RNAi表达质粒可以明显抑制KCa3.1 mRNA及蛋白的表达,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01);TRAM-34及KCa3.1 RNAi可以明显抑制HEC-1-A和Ishikawa细胞的增殖,2株细胞的G0/G1期细胞百分比上升,S期细胞百分比下降,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),但细胞凋亡率与对照组相比无明显差异(P＞0.05);cyclin D1、cyclin E及survivin的蛋白表达水平降低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:抑制KCa3.1的表达及活性可以抑制子宫内膜癌细胞增殖,阻碍细胞周期进展,但对细胞凋亡无明显影响.
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阻断钙激活钾通道对宫颈癌细胞增殖及钾通道电流的影响
目的：观察钙激活性中电导钾离子通道(IKCa1)被阻断后对宫颈癌HeLa细胞增殖及IKCa1膜电位的影响。方法分别用IKCa1阻断剂克霉唑和RNA干扰法阻断HeLa细胞的IKCa1后,用RT-PCR技术检测HeLa细胞的IKCal mRNA,MTT法检测细胞OD值,膜片钳技术检测细胞IKCa1电流。结果克霉唑阻断IKCa1后,HeLa细胞的IKCa1 mRNA表达降低、IKCa1电流减弱、细胞 OD值下降,与对照组相比,P均<0.05。 RNA干扰法阻断IKCa1后,Hela细胞的IKCa1 mRNA表达下降、IKCa1电流减弱、细胞OD值降低,与空白对照组和阴性转染组相比, P均<0.05。结论阻断IKCa1能有效抑制HeLa细胞增殖,下调细胞IKCa1 mRNA的表达,降低其IKCa1电流；IKCa1通过调控HeLa细胞膜电位而影响其信号传递,调控HeLa细胞的增殖。
