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荧光定量聚合酶链反应技术检测孕妇外周血中游离胎儿DNA的可行性研究
目的:探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术用于孕妇外周血浆中游离胎儿DNA检测的可行性.方法:利用FQ-PCR技术特异性扩增Y基因性别决定区(SRY)并定量分析妊娠中期(18~25周)孕妇血浆中含量.结果:148例男胎孕妇血浆标本中,SRY基因检出率为98.65%.139例女胎孕妇血浆标本中未检测到SRY基因.结论:FQ-PCR技术在孕妇外周血游离胎儿DNA的检测中具有较高的灵敏性和特异性,FQ-PCR技术可应用于非创伤性产前诊断.
关键词: 胎儿DNA 荧光定量聚合酶链反应 非创伤性产前诊断 -
孕妇血浆和血清中胎儿DNA在产前诊断中的应用
长久以来许多学者致力于研究利用孕妇外周血中的胎儿细胞进行非创伤性产前诊断,虽然取得了一些重要进展,但母血中的胎儿细胞数量稀少,富集效率不高且价格昂贵,成为常规应用的主要障碍.母体血浆中存在较高浓度胎儿DNA的发现,为非创伤性产前诊断开辟了一个新途径.
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用妊娠妇女血中胎儿DNA进行产前诊断
近年来非创伤性产前诊断成为研究的热点。孕妇血浆或血清中存在高浓度的胎儿DNA,用PCR方法检测母血中的胎儿DNA有望成为非创伤性产前诊断的方法。
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未甲基化Maspin基因在孕妇分娩前后含量变化探讨
本研究旨在检测在孕妇分娩前后未甲基化maspin基因的含量变化及表达水平,为寻找一种更加安全、可靠、简便、快捷、易于被患者接受的非创伤性产前诊断创造条件.报告如下.
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未甲基化Maspin基因在孕妇分娩前后含量变化探讨
本研究旨在检测在孕妇分娩前后未甲基化maspin基因的含量变化及表达水平,为寻找一种更加安全、可靠、简便、快捷、易于被患者接受的非创伤性产前诊断创造条件.报告如下.
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母体血浆游离HLCS基因用于无创伤性产前诊断DS的研究
唐氏综合征,又名21三体或先天愚型,属于常染色体遗传病.有三种分型:游离型、异位型和嵌合型.三种分型临床表现严重程度不一样,但是通常都表现出智力低下、特殊面容、不育、身材矮小、颈椎脆弱、常伴有先天性心脏病或其他器官畸形.DS患儿的出生为患者个人、家庭、社会造成沉重的经济负担和强大精神压力.
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母亲血浆中胎儿RhCcEe基因的检测
目的 探讨用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测孕妇血浆中胎儿RhCcEe基因的可行性.方法 用QIAamp DNA Kit抽提孕妇血浆DNA,应用9个(D3S1358、VWA、FGA、D5S818、D13S317、D7S820、D8S1179、D21S11、D18S51)具有高度多态性的短串联重复序列(STR)位点,对孕妇血浆样本中DNA进行STR等位基因扩增.同时检测孕妇丈夫外周血来源DNA,通过胎儿父源性等位基因在孕妇血浆中的检出确认胎儿DNA的存在.通过FQ-PCR法检测34例孕妇血浆中胎儿RhCcEe基因,并对出生后婴儿脐带血进行RhCcEe血清学表型分析,回顾性评价胎儿基因分型结果 的准确性.结果 在10例母亲表型为ee纯合子的样本、11例母亲表型为CC纯合子的样本、5例母亲表型为EE纯合子的样本及8例母亲表型为cc纯合子的样本中均分别检测到了母亲所缺少的E、c、e、C基因,这与出生后婴儿外周血血清学分型相吻合.结论 FQ-PCR法是一种灵敏度和准确性高,且特异性强的非创伤性产前诊断胎儿RhCcEe基因型的方法 ,当母亲为纯合子时,血将中胎儿RhCcEe基因分型具有临床意义,可用于新生儿溶血病的预防和诊断.
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孕妇外周血血浆胎源性牙釉质蛋白基因和DYS19位点检测
目的:检测孕妇外周血血浆胎源性牙釉质蛋白(Amelogenin)基因和DYS19位点,探讨其对男性胎儿性别诊断的可能性与准确性.为伴性遗传病的产前诊断提供参考.方法:采集22例正常孕妇外周血2 mL,以1例未婚无妊娠史女性为阴性对照、1例正常男性为阳性对照.提取血浆DNA作为PCR模板,以巢式PCR技术分别扩增Amelogenin基因和DYS19位点.并将实验结果与娩出后的新生儿实际性别比较.结果:孕妇外周血血浆中Amelogenin基因检测与娩出后新生儿实际性别符合率为95.5%.DYS19位点榆测符合率90.9%,2指标检测结果与胎儿实际性别符合率较高(kappa=0.909,P:0.088;kappa=0.820,P=0.120).Amelogenin基因与DYS19位点检测的一致率为95.2%.结论:Amelogenin基因和DYS19位点预测胎儿性别符合率无差异.联合检测Amelogenin基因和DYS19位点,可以提高诊断结果的可信度.
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对孕妇外周血中胎儿细胞进行基因检测的三种方法比较
目的建立用孕妇外周血中胎儿细胞进行基因分析的技术.方法采用引物延伸预扩增(primed extension preamplification,PEP)法加PCR、多重引物原位合成技术(primed in situ labeling,PRINS)和巢式聚合酶链反应(nested PCR)检测孕妇外周血中单个胎儿细胞的性别决定区Y基因(sex-determination region Y gene,SRY)基因片段.结果 PEP加PCR方法检测SRY基因的敏感性为97.39%(149/153),特异性为99.17%(119/120).PRINS技术检测SRY基因的敏感性为97.56%(40/41),特异性为100%(35/35).巢式PCR检测SRY基因的敏感性为80.00%(24/30),特异性为87.50%(14/16).结论 PEP加PCR技术和 PRINS技术是对孕妇外周血中单个胎儿细胞进行基因诊断的可靠技术,其敏感性高、特异性强,有望成为利用孕妇外周血中单个胎儿细胞进行非创伤产前诊断的常规方法.
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孕妇外周血中胎儿DNA在新生儿溶血病产前诊断中的应用
孕妇外周血浆(血清)中存在胎儿游离DNA,为非创伤性产前诊断提供了研究基础.本文综述近年来孕妇外周血中胎儿DNA检测方法的发展,以及在新生儿溶血病和其他遗传性疾病中的应用.
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孕妇外周血中游离胎儿核酸的研究进展
非创伤性产前诊断一直是人类遗传学发展的长期目标,从非细胞成分中如母血浆和血清中检测胎儿DNA为非创伤性产前诊断的开展提供了可能.实时定量PCR分析技术的发展,使母血浆和血清中胎儿DNA检测的敏感性和特异性接近100%,同时胎儿核酸领域的研究也扩展到了母血浆中胎儿RNA和胎儿表遗传标记物的检测.
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表观遗传学DNA甲基化与非创伤性产前诊断
表观遗传学研究与DNA序列改变无关,仅发生表现型改变的过程,DNA甲基化是表观遗传学具特征的标志之一,DNA甲基化技术的进展将其应用领域扩大到非创伤性产前诊断.甲基化特异性PCR可快速、灵敏地根据胎儿和母亲之间DNA甲基化的差异从母血浆中检测胎儿DNA.