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电磁辐射对N9小胶质细胞STAT3核转位以乃磷酸化水平的影响
目的 研究STAT3信号分子是否参与电磁辐射诱导的小胶质细胞活化.方法 Western-blot检测小胶质细胞STAT3蛋白质表达及磷酸化表达变化,凝胶迁移率实验(Electrophoretic Mobility Shift Assay,EMSA)检测小胶质细胞STAT3的DNA结合活性的变化.结果 电磁辐射后小胶质细胞STAT3磷酸化增强,STAT3核转位与DNA结合活性在辐照后6-24 h增加,并以12h为明显.结论 STAT3信号分子参与了电磁辐射诱导的小胶质细胞活化过程.
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氯化钴诱导化学缺氧对N9小胶质细胞的损伤作用及机制
目的 研究氯化钴(CoCl2)对N9小胶质细胞的损伤作用及机制.方法 不同剂量CoCl2处理N9小胶质细胞后,XTT法检测细胞活力;倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;硫代巴比妥酸(TBA)显色法检测细胞上清液中丙二醛(MDA)含量;Hoechst 33258染色检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期变化.结果 CoCl2(50～1 000 μmol·L-1)处理24 h后,细胞活力明显降低(P＜0.01),且呈剂量依赖性.细胞形态发生明显改变,部分细胞出现皱缩、破碎,细胞密度减小,随CoCl2剂量增大,细胞形态损伤程度进一步恶化.MDA含量检测结果显示,氯化钴处理后,细胞上清液中MDA含量明显增多(P＜0.05).Hoechst 33258染色结果显示,氯化钴处理组的细胞凋亡比例较对照组明显增多(P＜0.01),且比例随CoCl2剂量增大而增多.细胞周期检测结果显示,CoCl2可使细胞周期阻滞于G1/G0期.结论 CoCl2可呈剂量依赖性损伤 N9小胶质细胞,机制与诱导细胞凋亡、引发氧化应激反应及细胞周期阻滞有关.
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脂多糖刺激N9小胶质细胞释放炎性因子的时间和剂量效应
目的 研究脂多糖刺激N9小胶质细胞释放炎性因子的时间和剂量效应.方法 不同剂量脂多糖刺激N9小胶质细胞,在不同时间点,酶联免疫吸附试验检测培养基中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,硝酸还原酶法检测培养基中一氧化氮(NO)水平,Western blot检测细胞质和细胞核中核转录因子-κB(NF-κB)蛋白水平.结果 刺激6、12 h后,各脂多糖组培养基中IL-1β和NO水平与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),刺激24 h后1 000、10 000 μg· L-1脂多糖组培养基中的IL-1β和NO水平均较对照组升高(P＜0.01).刺激30 min后,各脂多糖组培养基中TNF-α水平与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),刺激6、24 h后,各脂多糖组培养基中TNF-α水平均较对照组升高,差异有统计学意义(P＜0.01),且1 000μg·L-1脂多糖组TNF-α水平高.Westernblot检测结果显示,各脂多糖组细胞质和细胞核内NF-κB蛋白水平较对照组显著增多(P＜0.01),其中1 000μg·L-1脂多糖组细胞质和细胞核中NF-κB蛋白水平高.结论 1000 μg·L-1脂多糖是激活N9小胶质细胞诱发其炎症反应的佳剂量,脂多糖作用6h主要促进TNF-α的释放,作用24h后则IL-1β和NO的释放明显增加.
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不同氧糖剥夺时间和不同介质对N9小胶质细胞活力的影响
目的 研究不同氧糖剥夺(OGD)时间和不同介质对N9小胶质细胞活力的影响,以建立体外小胶质细胞的OGD模型.方法 以平衡盐溶液(BSS)和无糖DMEM作为OGD介质,OGD10、30和60 min并复氧复糖24h后,倒置相差显微镜下观察N9小胶质细胞形态变化,四氮唑盐复合物(XTT)比色法检测细胞活力变化,比较分析不同OGD持续时间和不同介质产生的结果差异.结果 氧糖剥夺/复氧复糖后,各OGD处理组不规则细胞比例增多,部分细胞发生皱缩,细胞轮廓不清,折光度较差,细胞密度减小.各BSS介质的OGD处理组与对照组相比,N9小胶质细胞的活力产生不同程度降低,差别均有统计学意义(P＜0.01).各OGD处理组相比,OGD 30 min组和OGD 60 min组细胞活力低于OGD 10 min组,差别有统计学意义(P＜0.01).各无糖DMEM介质的OGD处理组与对照组相比,N9小胶质细胞的活力产生不同程度降低,差别均有统计学意义(P＜0.01),且随着OGD处理时间的延长,细胞活力逐渐减小,各OGD处理组间细胞活力差别有统计学意义(P＜0.05).OGD 10 min处理后,无糖DMEM介质组细胞活力比BSS介质组细胞活力高(P＜0.01),OGD 30 min处理后,无糖DMEM介质组细胞活力仍比BSS介质组细胞活力高(P＜0.05),OGD 60 min处理后,2组间差别无统计学意义(P＞0.05).结论 OGD处理后,N9小胶质细胞形态发生改变,细胞活力与OGD持续时间呈负相关,体外小胶质细胞的OGD模型制备成功.模型中,2种OGD介质对细胞活力影响的差别随着OGD处理时间的延长逐渐缩小并终消失.
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高浓度氧暴露对N9小胶质细胞功能的影响
目的 探讨常压高浓度氧暴露对N9小胶质细胞功能的影响.方法 体外培养N9小胶质细胞,分别在900 ml/L高浓度氧中暴露2、6、12、16、24、48 h后(1)流式细胞术检测细胞存活率及凋亡率；(2)DCFH-DA荧光探针检测活性氧(ROS)含量的变化；(3)RT-PCR检测Toll样受体4(TLR4)mRNA表达变化；(4)ELISA检测N9细胞培养上清中IL-1β和TNF-α的含量；(5)免疫荧光化学染色检测TLR4蛋白的表达变化.结果 流式细胞术结果示,细胞凋亡率在高氧暴露12h后明显高于空气对照组(P＜0.05),16h达高峰(P＜0.01)；高氧暴露2h后,细胞内ROS含量明显增加,呈一定时间依赖性；TLR4 mRNA及蛋白表达水平明显高于空气对照组(P＜0.05)；高氧暴露后细胞上清中TNF-α及IL-1β含量随暴露时间延长而增加,均在6h开始升高,12～16 h达高峰(P＜0.05),IL-1β增高较TNF-α更为明显.结论 高氧暴露后N9小胶质细胞TLR4通路激活,产生大量神经毒性因子(ROS、IL-1β及TNF-α),细胞凋亡增加.
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不同刺激对N9小胶质细胞炎性细胞因子分泌及存活的影响
目的 探讨不同刺激对N9小胶质细胞炎性细胞因子分泌及存活的影响.方法 体外培养N9小胶质细胞,分为空白对照组(Control组)、M1型刺激组(LPS+ IFN-γ组)、M2型刺激组(IL-4组).刺激24 h后,通过实时荧光定量PCR及ELISA检测N9小胶质细胞在极化状态下细胞因子的表达;同时体外培养N9小胶质细胞,分为Control组、LPS组、IFN-γ组、LPS+ IFN-γ组及IL-4组,通过Hoechst-PI染色的方法检测不同因子对细胞死亡的影响,并用Western blot检测各组Caspase-3的表达.结果 LPS+ IFN-γ组N9细胞促炎因子表达明显高于Control组及IL-4组(P＜0.01),IL-4组N9细胞抑炎因子的表达明显高于Control组及LPS+ IFN-γ组(P＜0.01).在细胞存活方面,IFN-γ组及LPS+ IFN-γ组N9细胞的死亡数及Caspase-3的表达明显高于Control组、LPS组、IL-4组(P＜0.05,P＜0.01).结论 N9细胞可发生极化,在不同极化状态表达不同的炎性因子;IFN-γ可影响N9细胞的存活,其可能是通过Caspase-3而导致细胞死亡.
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高氧对脂多糖诱导N9小胶质细胞促炎症作用的影响
目的:观察常压高浓度氧对脂多糖诱导N9小胶质细胞Toll受体4、TNF-α表达时序变化,初步探讨高氧对小胶质细胞促炎反应的作用及调控机制.方法:体外培养N9小胶质细胞,随机分为6组(n=3):空气组、sLPS组、hLPS组、高氧组、高氧+ sLPS组、高氧+hLPS组.LPS浓度为100 ng/mL(sLPS)、1 mg/L( hLPS).高氧(900 mL/L)暴露时间分别为2h、6h、12 h、16 h、24h.RT-PCR检测TLR4的表达时序变化；Western blot检测处理12 h后各组TLR4蛋白表达；ELISA检测各组处理6h、12 h、16 h、24h培养上清中TNF-α的含量.结果:RT-PCR显示hLPS组在6h后、sLPS组在16 h后TLR4 mRNA均表达上调,并随LPS浓度增加、暴露时间延长逐渐升高(P＜0.05),24 h时hLPS组表达高.6h后在各个时间点高氧+ hLPS组与hLPS比较TLR4 mRNA下调(P＜0.05),在16 h、24h为明显(P＜0.05).Western blot检测12 h高氧+sLPS组、高氧+hLPS组TLR4蛋白水平均低于相应浓度的LPS组(P＜0.05).ELISA结果示在各个时间点高氧+ sLPS组、高氧+hLPS组与相应浓度的LPS组比较TNF-α均明显上调(P＜0.05).结论:高浓度氧暴露促进LPS诱导N9小胶质细胞的促炎症反应,TLR4可能参与此过程的负向调控.
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葛根素对脂多糖诱导N9小胶质细胞激活的抑制作用
目的:探索葛根素对脂多糖(LPS)诱导N9小胶质细胞激活的抑制作用,为其在神经退行性疾病的防治方面提供依据.方法:用MTT法检测脂多糖和葛根素对小胶质细胞的细胞毒性作用;用流式细胞术(FCM)检测葛根素对LPS诱导N9细胞内活性氧(ROS)产生的抑制作用;分别用Griess法和FCM检测细胞培养液和细胞内一氧化氮(NO)含量;用HE染色法观察LPS激活N9细胞,及葛根素恢复细胞静息状态下细胞的形态;以FCM检测细胞凋亡和细胞周期.结果:葛根素(100～200 μmol/L)能使LPS激活的N9细胞,从阿米巴样的活化形状明显恢复至静息态的圆形;LPS激活的N9细胞能产生大量的NO到培养液中,葛根素(50～200 μmol/L)能使NO的产生减少,其中,高浓度组(200 μmol/L)与LPS模型组相比,NO从23.45±0.19 μmol/L降至12.43±0.11 μmol/L(P<0.01).胞内ROS检测表明:葛根素(200 μmol/L)同样明显降低ROS的产生.葛根素对激活的N9细胞胞内ROS的产生具有抑制作用,高浓度组(200 μmol/L)能使其恢复至对照组水平;此外,葛根素能显著抑制LPS诱导的细胞凋亡,并恢复LPS对N9细胞G_0/G_1期的阻滞作用.结论:葛根素具有抑制小胶质细胞激活的作用.
