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121个染色体平衡易位携带者PGD周期COH的卵巢反应性分析
目的:探讨常染色体平衡易位对女性携带者控制性超促排卵(COH)中卵巢反应性的影响.方法:回顾分析于我院行胚胎植入前遗传学诊断(PGD)的109对常染色体平衡易位夫妇,共121个周期,其中夫妇中仅女方为平衡易位携带者56例(63个周期,研究组),包括罗伯逊易位携带者23例(27个周期),相互易位携带者33例(36个周期);夫妇中仅男方为平衡易位携带者53例(58个周期,对照组),包括罗伯逊易位携带者30例(32个周期),相互易位携带者23例(26个周期).分析COH过程中,研究组和对照组的女方卵巢反应性指标和妊娠结局.结果:两组的女方年龄、体重指数(BMI)、基础内分泌及窦卵泡数(AFC)均无显著差异(P＞0.05).两组的卵巢反应性指标,包括Gn总量、HCG注射日E2水平、获卵数、D3胚胎数、可移植胚胎数及移植胚胎数,以及移植周期临床妊娠率、早期流产率及种植率均无显著差异(P＞0.05).单独就罗伯逊易位携带者或相互易位携带者而言,两组的各指标均无显著差异.排除可能影响COH卵巢反应性的女方因素,研究组与对照组的各指标均无显著差异.结论:染色体平衡易位,包括罗伯逊易位或相互易位并不影响COH中的卵巢反应性.应将染色体平衡易位女性携带者视为正常卵巢反应性,采用合适剂量的促性腺激素进行控制性促排卵.
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人类白细胞抗原基因型的胚胎植入前遗传学诊断
目的 建立人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)基因配型,为开展HLA配型的胚胎植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)联合或不联合单基因病的临床工作提供技术支持.方法 采用多重置换扩增(multiple displacement amplification,MDA)的方法扩增3～5个滋养层细胞的全基因组,并用多重聚合酶链式反应(PCR)方法扩增多个短串联重复多态性(polymorphic short tandem repeat,STR)位点,通过毛细管电泳技术验证STR位点的特异性.结果 微量细胞全基因组的扩增成功率为93.75％,筛选了HLA基因的5个杂合度高、特异性强的STR位点,等位基因脱扣(allele drop-out,ADO)率为10.34％.结论 微量细胞MDA结合多重PCR的方法可以同时检测HLA-A、HLA-B、DRA、DQB位点,扩增成功率高,ADO率低,可以有效地筛选出相匹配的胚胎,为同胞患儿提供造血干细胞来源具有可行性.
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常染色体平衡易位携带者控制性促排卵周期卵巢反应性分析
目的 探讨常染色体平衡易位及类型对胚胎植入前遗传学诊断(PGD)周期控制性促排卵(CoS)中卵巢反应性的影响.方法 回顾性分析379对染色体平衡易位夫妇行PGD的426个COS周期,其中男方正常女方为平衡易位携带者182个周期(研究组,A组),包括罗氏易位44个周期(A1组),相互易位138个周期(A2组);女方正常男方为平衡易位携带者244个周期(对照组,B组),包括罗氏易位65个周期(B1组),相互易位179个周期(B2组).比较各组间COS中女方卵巢反应性指标.结果 研究组与对照组间年龄、体质量指数(BMI)、基础内分泌(FSH、E2、LH)、窦卵泡数(AFC)、促性腺激素(Gn)用量和使用时间、第2日和第3日胚胎数、囊胚数、卵子成熟率、囊胚形成率等均无统计学差异(P＞0.05);A组hCG注射日E2水平、正常信号囊胚数[(5 469.8±2 365.1) ng/L,1.4±1.4]均显著低于B组[(6 033.3±2 587.5) ng/L,1.8±1.8](P＜0.05),A组取卵数、MⅡ卵子数、形成囊胚数均低于B组,但是无统计学差异(P＞0.05);A1组hCG注射日E2水平、正常信号囊胚数[(5 573.2±2 146.1) ng/L,1.5±1.5]显著低于B1组[(6 565.0±2961.1) ng/L,2.8±2.2](P＜0.05);A2组取卵数(14.6±6.6)显著低于B2组(16.5±6.7)(P＜0.05).结论 ①女方常染色体平衡易位可能影响COS中卵巢反应性;②女方罗氏易位形成平衡或正常胚胎几率低于男方罗氏易位者.
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基因测序在胚胎植入前遗传学诊断应用的研究进展
经过30多年的发展,基因测序技术已从初的Sanger测序发展至当今以单分子测序为特点的测序.早期的Sanger测序可应用于单基因疾病的检测,但其可检测的通量小、速度慢,逐渐被荧光原位杂交(FISH)、比较基因组杂交(CGH)、芯片检测技术等取代.下一代测序(next-generation sequencing,NGS)技术作为胚胎植入前遗传学诊断(preimplataion genetic dignosis,PGD)的新检测手段,不仅能检测染色体非整倍性、染色体结构异常以及单基因疾病,而且精度更高,弥补了芯片检测易受探针影响的缺陷.新近建立的基于NGS的非整倍体测序与连锁分析(mutated allele revealed by sequencing with aneuploidy and linkage analyses,MARSALA)技术可以同时检测染色体疾病和单基因疾病.本文概述了基因测序技术的发展进程及其在PGD中的应用,介绍了包括近年开发的多重退火环状循环扩增(MALBAC)技术和MARSALA在内的NGS技术应用于PGD的优点和局限.
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基因测序技术在生殖领域的应用进展
基因测序技术自被发明以来在生命科学领域的研究中发挥着重要作用,利用测序技术对辅助生殖技术(ART)后代进行基因水平检测来评估ART的安全性,是一种非常有效的手段.而利用测序技术对植入前胚胎进行基因检测,不仅可以进行非整倍体筛查来选择优质胚胎进行移植,提高胚胎种植率,还可以避免遗传性疾病在家系内的传递;另外,利用测序技术对不孕不育患者进行基因方面检测,从而发现一些高敏感的致病基因,对于了解不孕不育疾病机理、发现治疗方案提供新的思路.
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父源性染色体异常胚胎植入前遗传学诊断的新研究进展
染色体异常是导致男性不育的一个重要原因.不同类型染色体异常的生殖细胞进行减数分裂时形成不同类型的配子,且各种异常配子所比例的实际值与理论值不相符.另外,正常胚胎率与正常配子率也不一致.本文对染色体结构异常(相互易位、罗伯逊易位、倒位、染色体复杂性重组)和数目异常(性染色体数目异常、常染色体数目异常)男性的正常精子率以及正常胚胎率进行综述.
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胚胎显微操作与妊娠早期人血清β-hCG值的关系
目的:探讨辅助生殖技术(ART)中的胚胎显微操作与妊娠早期血清β-hCG值的关系.方法:回顾性分析体外受精/卵胞质内单精子注射/胚胎植入前遗传学诊断(IVF/ICSI/PGD)新鲜囊胚移植的259个宫内妊娠周期,根据移植胚胎数及不同周期类型分组,比较移植14d、18d血清β-hCG水平的差异.结果:单囊胚移植组中,行IVF周期、ICSI周期和PGD周期间妊娠早期的血清β-hCG有统计学差异,其中常规移植14 d IVF周期血清β-hCG值为877.31±480.40 IU/L,显著高于ICSI周期711.86±485.64 IU/L,P＜0.05.移植18d时,两者血清β-hCG无统计学差异(4 198.32±2 306.48 IU/L vs 3 763.75±2 268.87 IU/L,P＞0.05).而PGD周期移植14d血清β-hCG值为556.22±418.94 IU/L,18d为3 027.22±2 455.80 IU/L,与IVF、ICSI周期相比均有显著统计学差异(P＜0.05);双囊胚移植组中,IVF周期、ICSI周期及PGD周期各组间14d、18d血清β-hCG比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:判断行ICSI、PGD周期患者妊娠与否时适度降低评估患者妊娠早期(移植14d、18 d)有效妊娠血清β-hCG值标准是可行且必要的.
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植入前遗传学诊断及筛查技术的实验室质量控制体系
近年来,随着分子生物学和辅助生殖技术(ART)的进步,胚胎植入前遗传学诊断(PGD)和胚胎植入前遗传学筛查(PGS)技术以其前所未有的速度在全球快速发展.本文从胚胎活检和遗传学诊断这2个方面,对PGD/PGS的实验室建立、人员培训及操作流程等方面做一综述,并提出了质量控制的具体评价指标.
