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miR-218在上皮性卵巢癌细胞株SKOV3中的生物学功能
目的 探讨微小RNA-218(miR-218)在上皮性卵巢癌细胞株SKOV3中发挥的生物学功能.方法 采用实时定量PCR方法检测上皮性卵巢癌细胞株中miR-218的表达.通过转染miR-218模拟体、miR-218抑制剂外源性地增高或者降低miR-218在SKOV3中的表达,利用MTT、流式细胞术、癌细胞侵袭迁移实验观察miR-218对SKOV3增殖、凋亡和侵袭转移的作用.结果 miR-218能增强SKOV3增殖能力(P＜0.05),而与细胞凋亡、侵袭转移无相关性(P＞0.05).结论 miR-218在上皮性卵巢癌细胞株SKOV3中发挥调节细胞增殖的作用.
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宫颈癌组织miR-218、Stat3表达变化及其临床意义
目的 探讨宫颈癌组织微小RNA-218(miR-218)和信号转导及转录活化因子3(Stat3)表达变化及其临床意义.方法 选择宫颈癌患者96例(观察组),疑似宫颈癌但组织病理检查宫颈正常者58例(对照组),取两组宫颈组织,采用RT-PCR法检测miR-218、Stat3 mRNA表达.分析宫颈癌组织miR-218、Stat3 mRNA表达与患者临床病理参数的关系.结果 观察组、对照组miR-218 mRNA相对表达量分别为0.57±0.12、1.09±0.51,Stat3 mRNA相对表达量分别为0.56 ±0.15、0.21±0.06,两组比较P均＜0.05.宫颈癌组织miR-218 mRNA表达与Stat3mRNA表达呈负相关关系(r=-0.719,P＜0.05).宫颈癌组织miR-218 mRNA表达与临床分期、组织分化程度、淋巴结转移有关(P均＜0.05),与患者年龄、病理类型、肿瘤直径、绝经状况及宫旁浸润无关(P均＞0.05).宫颈癌组织Stat3 mRNA表达与组织分化程度、淋巴结转移有关(P均＜0.05),与患者年龄、病理类型、临床分期、肿瘤直径、绝经状况及宫旁浸润无关(P均＞0.05).结论 宫颈癌组织miR-218 mRNA表达下调,Stat3 mRNA表达上调;二者表达变化与宫颈癌的发生、发展有关.
关键词： 宫颈癌 微小RNA-218 信号转导及转录活化因子3 分化程度 淋巴结转移 -
胃癌组织中miR-218和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、xIAP、SurvivinmRNA的表达观察
目的 观察胃癌组织中微小RNA-218(miR-218)和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、xIAP、Survivin mRNA的表达变化,并探讨其意义.方法 胃癌患者80例,手术过程中留取癌组织及癌旁组织,采用实时定量PCR法对胃癌组织及癌旁组织中的miR-218和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、xIAP、Survivin mRNA进行检测,分析其相关性.以胃癌组织中miR-218相对表达强度的平均值为界,将胃癌患者分为miR-218高表达组与miR-218低表达组,对比分析其临床病理参数及预后.结果 胃癌组织中miR-218及Bcl-2、Bax、xIAP、Survivin mRNA的相对表达强度分别为0.3077±0.1181、0.8177±0.2726、0.2481±0.1108、0.5995±0.2613、0.8209±0.3426,癌旁组织中分别为0.5659±0.2260、0.2774±0.1167、0.4444±0.2019、0.2987±0.1478、0.2470±0.1122,两种组织各指标相比,P均<0.01.胃癌组织中miR-218与Bcl-2 mRNA的表达呈负相关(r=-0.341,P<0.01),miR-218与Bax mRNA的表达呈正相关(r=0.522,P<0.01),Bcl-2 mRNA与Bax mRNA的表达呈负相关(r=-0.439,P<0.01),Bcl-2 mRNA与Survivin mRNA的表达呈正相关(r=0.235,P<0.01).80例胃癌患者中,胃癌组织中miR-218高表达组42例、低表达组38例;miR-218高表达组中TNM分期Ⅰ期+Ⅱ期21例、Ⅲ期+Ⅳ期21例,miR-218低表达组中Ⅰ期+Ⅱ期9例、Ⅲ期+Ⅳ期29例,两组相比,P<0.05;miR-218高表达组中淋巴结转移者29例,miR-218低表达组中淋巴结转移者34例,两组相比,P<0.05;胃癌组织中miR-218高表达组、低表达组的5年生存率分别为66.67％、28.95％,两组相比,χ2=9.789,P<0.01.结论 胃癌组织中miR-218呈低表达;miR-218可能通过参与凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Survivin基因表达的相互调节而参与肿瘤细胞凋亡过程;胃癌组织中miR-218低表达预示肿瘤处于较高临床分期、淋巴结转移可能性较大,患者预后较差.
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宫颈癌组织中miR-218和Survivin的表达及相关性研究
目的 探讨微小RNA-218(miR-218)和凋亡抑制基因Survivin在宫颈癌中的表达情况及临床意义.方法 采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测48例宫颈癌及48例正常宫颈组织中miR-218和Survivin基因的表达,免疫组化Envision法检测相应癌组织中Survivin蛋白的表达,分析miR-218和Survivin表达的相关性及其与患者临床病理特征的关系.结果 miR-218在宫颈癌组织中的表达明显低于正常组织,差异有统计学意义(P＜0.05);其表达与癌细胞分化程度及淋巴结转移有关(P＜0.05).Survivin在宫颈癌组织中的表达率为85.42％(41/48),显著高于正常宫颈组织,差异有统计学意义(P＜0.05);Survivin基因的表达与癌组织分化程度具有相关性(P＜0.05).MiR-218和Survivin基因的表达呈负相关(P＜0.05).结论 MiR-218在宫颈癌中的表达率降低,可能与宫颈癌的增殖、侵袭转移有关.
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微小RNA-218通过生存素对胆管癌细胞的作用
目的 检测微小RNA(miR)-218对胆管癌细胞的侵袭的影响及miR-218通过凋亡抑制基因生存素(Survivin)对胆管癌细胞的作用.方法 培养两种胆管癌细胞株(CCLP1)和(QBC939),将miR-218mimics(miR-218激动剂)及阴性对照转染CCLP1和QBC939细胞,设立miR-218组、阴性对照组及空白对照组,采用BD Martigel基底膜基质胶侵袭室测定其侵袭性,每组随机抽取3个结果.将CCLP1和QBC939细胞分别共转染miR-218 mimics和pMIR-Survivin、miR-218mimics和pMIR-Survivin-mut.分别设立miR-218组、阴性对照组及空白对照组,每组随机抽取3个结果,酶标仪检测荧光素酶活性,探讨miR-218与Survivin的相关性.结果 CCLP1细胞株中miR-218组细胞数为(28.33 ±4.16)个,阴性对照组细胞数为(72.00 ±8.72)个,NC组细胞数为(74.33±4.04)个;QBC939细胞株中miR-218组细胞数为(7.33±2.08)个,阴性对照组细胞数为(22.00±4.36)个,NC组细胞数为(22.00±4.00)个;与阴性对照组和NC组比较,转染miR-218mimics处理能显著抑制胆管癌细胞的侵袭能力,差异有统计学意义(CCLP1细胞株和QBC939细胞株其P值分别为0.000、0.004).荧光素酶活性检测结果显示,QBC939野生型miR-218组荧光素酶活性为1.489±0.079,阴性对照组为2.825±0.068,NC组为2.747±0.081;QBC939突变型miR-218组荧光素酶活性为3.078±0.138,阴性对照组为2.944±0.144,NC组为2.807±0.090;CCLP1野生型miR-218组荧光素酶活性为1.322±0.039,阴性对照组为2.362±0.129,NC组为2.368±0.154;CCLP1突变型miR-218组荧光素酶活性为2.202±0.073,阴性对照组为2.274±0.250,NC组为2.202±0.073;野生型的3'端非编码区(3'UTR)的报告基因载体的荧光素酶活性与其阴性对照组及空白对照组比较显著下降,差异有统计学意义(CCLP1细胞株和QBC939细胞株其P值分别为0.000、0.000),突变型无显著变化.结论 miR-218抑制胆管癌细胞的侵袭,在胆管癌的发生发展中起负性调节作用.miR-218可直接与Survivin 3'UTR相互作用,miR-218对于胆管癌的负性调节作用可能是直接通过Survivin发挥作用.
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微小RNA-218在胆管癌中的表达及其对胆管癌细胞凋亡的影响
目的 检测胆管癌中微小RNA(miRNA,miR)-218的表达水平及观察其对胆管癌细胞凋亡的影响.方法 培养两种胆管癌细胞株(CCLP1)和(QBC939)和非肿瘤胆管细胞株(H69),采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-218,分为CCLP1、QBC939、H69组,每组随机取3个结果,比较其在胆管癌细胞株与非肿瘤胆管细胞株中的差异.合成miR-218 mimics(miR-218激动剂),将miR-218minics及阴性对照转染CCLP1和QBC939细胞.设立miR-218组、阴性对照组及空白对照组,分别利用流式细胞术检测细胞凋亡情况,每组随机取3个结果.结果 miR-218在胆管癌细胞株CCLP1、QBC939及非肿瘤胆管细胞株中的相对定量分别为:1.000(以CCLP-1为对照)、0.602 ±0.108、25.199±5.128,miR-218在胆管癌细胞株CCLP1、QBC939中的表达显著低于非肿瘤胆管细胞株(H69) (P =0.000).CCLP1细胞株中miR-218组细胞凋亡率为0.121±0.010,阴性对照组细胞凋亡率为0.048±0.021,空白对照组细胞凋亡率为0.076±0.017;QBC939细胞株中miR-218组细胞凋亡率为0.118±0.039,阴性对照组细胞凋亡率为0.017±0.036,空白对照组细胞凋亡率为0.048±0.161.miR-218组较阴性对照组及空白对照组细胞凋亡率显著增加,miR-218组与空白对照组及阴性对照组之间的差异有统计学意义(CCLP-1细胞株和QBC939细胞株其P值分别为0.005、0.006).结论 miR-218在胆管癌的发生发展发挥了抑癌因子的作用,并且增加了胆管癌细胞的凋亡.
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微小RNA-218调控对大鼠主动脉平滑肌细胞表型转化、增殖及迁移的作用
目的 观察微小RNA-218(miR-218)对大鼠主动脉平滑肌细胞(VSMCs)表型转化、增殖及迁移的作用,探讨miR-218影响VSMCs生物学行为的机制.方法 20％胎牛血清(FRS)培养大鼠VSMCs,将miR-218模拟物、miR-218抑制剂及阴性对照转染VSMCs.检测miR-218和表型蛋白α-肌动蛋白(α-actin)、调宁蛋白1(Calponin-1)的含量变化.10％ FBS培养条件下,检测miR-218组和miR-nc组的细胞增殖和迁移能力变化,并与miR-218抑制剂组比较.结果 20％ FBS培养VSMCs 3 d和7d,miR-218表达量均下调超过90％(P＜0.01),α-actin和Calponin-1表达亦显著下凋；与miR-nc组比较,miR-218组α-actin和Calponin-1的表达无明显下调.10％ FBS培养VSMCs 2 ～3d,miR-218组VSMCs的增殖力和迁移力均下调 28％ (P ＜0.05)；而miR-218抑制剂组VSMCs的增殖力上调20％ (P ＜0.05)、迁移力上调53％ (P ＜0.01).10％ FBS培养VSMCs 48～ 96 h,miR-218组中miR-218潜在靶基因周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)的表达明显下调.结论 miR-218表达上调可抑制大鼠VSMCs的表型转化、增殖和迁移,其作用可能是通过靶向CDK6来实现的.
