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RNA干扰下调SOX9表达抑制肝癌细胞的增殖
目的:分析转录因子性别决定区Y框蛋白9(sex-determining region Y box protein 9,SOX9)在肝癌组织中的表达情况,并探讨其对肝癌细胞增殖的调节作用及分子机制.方法:分析肝癌表达谱芯片数据中SOX9的表达情况,并采用实时荧光定量PCR法在32对肝癌组织及癌旁肝组织中进行验证.构建靶向干扰SOX9的慢病毒载体pGreenPuroTM-SOX9-shRNA,并用慢病毒感染的方法转入肝癌细胞Huh7中;采用实时荧光定量-PCR法及蛋白质印迹法检测SOX9的干扰效果.采用CCK-8(cell counting kit-8)法、克隆形成实验、FCM法和衰老相关β半乳糖苷酶(senescence-associated beta-galactosidase,SA-β-Gal)染色等方法检测细胞的增殖能力和衰老情况.后,采用实时荧光定量PCR法及蛋白质印迹法检测SOX9可能调节的下游基因.结果:肝癌表达谱芯片数据分析结果显示,SOX9在肝癌组织中高表达(P＜0.000 1),并在32对配对的肝癌组织及癌旁肝组织中得到验证(P=0.009 5).靶向干扰Huh7细胞中SOX9的表达可抑制细胞的增殖并促进衰老.SOX9表达下调可降低增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、细胞周期蛋白A2 (cyclin A2,CCNA2)、细胞周期蛋白E2(cyclin E2,CCNE2)和核转录因子E2F-2基因的表达;肝癌组织表达谱芯片数据分析结果显示,它们的表达与SOX9存在一定的相关性.结论:SOX9在肝癌组织中高表达,可以调节肝癌细胞的增殖和衰老,且其分子机制可能通过影响细胞周期蛋白及核转录因子E2F-2等增殖调控基因的表达而实现.
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转录因子sox4在宣威女性肺腺癌XWLC-05细胞生长和转移中的作用
目的:研究RNA干扰抑制宣威女性肺癌细胞XWLC-05中转录因子sox4的表达对细胞生长、侵袭和迁移能力的影响.方法:从不同类型肺癌细胞株中,通过实时荧光定量PCR法筛选出高表达sox4的宣威女性肺癌细胞XWLC-05作为研究细胞.将sox4-siRNA转染入XWLC-05细胞后,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测sox4表达水平的变化.分别采用MTS法、细胞划痕实验和Transwell细胞侵袭实验分析抑制sox4表达对XWLC-05细胞体外增殖、迁移和侵袭能力的影响.FCM评估抑制sox4表达对细胞凋亡和细胞周期的影响.结果:转染sox4-siRNA的实验组细胞在转染后24 h时与空白对照组和阴性对照组相比,sox4 mRNA及蛋白表达水平差异均无统计学意义(P＞0.05)；转染后48 h和72 h时与空白对照组和阴性对照组相比,sox4 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P＜0.05).转染sox4-siRNA的XWLC-05细胞的增殖活性与空白对照组和阴性对照组相比,差异均无统计学意义(P值分别为0.059和0.113),而其迁移能力和侵袭能力却明显低于空白对照组(P值均为0.000)和阴性对照组组(P值分别为0.023和0.000).转染sox4-siRNA的XWLC-05细胞的凋亡率明显高于空白对照组和阴性对照组(P值均为0.000),但sox4-siRNA转染组的细胞增殖指数与空白对照组和阴性对照组相比,差异均无统计学意义(P值分别为0.168和0.225).结论:转录因子sox4可能通过抑制凋亡并促进肿瘤细胞的迁移和侵袭能力,在宣威女性肺癌的生长和转移中发挥作用.
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干细胞标志基因Sox2和Oct4在肾细胞癌组织中的表达及其临床意义
目的:检测干细胞关键转录基因Sox2和Oct4在肾癌组织中的表达情况,并探讨其临床意义.方法:采用实时荧光定量PCR法和组织免疫荧光染色法分别检测86例肾透明细胞癌及其配对癌旁组织中Sox2和Oct4mRNA及蛋白表达水平,并分别比较这2个蛋白表达与患者临床病理特征及生存预后的关系.结果:肾细胞癌组织的Sox2和Oct4 mRNA表达水平均明显高于癌旁组织(P＜0.01和P＜0.05),且肿瘤组织中Sox2和Oct4mRNA表达水平分别与肾癌组织学分级(P＜0.01和P＜0.05)和TNM分期(P＜0.05)呈正相关.Sox2和Oct4蛋白在肾细胞癌组织中的表达阳性率明显高于癌旁组织(P＜0.05);随着肿瘤TNM分期(P＜0.01)进展和淋巴结转移发生(P＜0.05),Sox2蛋白表达阳性率逐渐升高;而Oct4表达的阳性率与肾细胞癌T分期及淋巴结转移无明显相关性(P＞0.05).生存分析显示,肿瘤组织中Sox2和Oct4低表达组的肾癌患者较高表达组有更好的整体生存率(P＜0.05).结论:Sox2和Oct4高表达可能在肾癌发生和发展过程中起重要作用,提示其很可能成为潜在的治疗靶点.
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小儿神经母细胞瘤中胚胎干细胞因子Sox2的表达
目的 探讨胚胎干细胞因子性别决定区Y框蛋白2(Sox2)在小儿神经母细胞瘤组织中的表达及意义.方法 应用免疫组化、RT-PCR、Realtime-PCR、免疫印迹等方法检测65例神经母细胞瘤和相应瘤旁组织中Sox2的表达,并分析其表达与临床病理参数的相关性.结果 神经母细胞瘤组织中Sox2的表达水平明显高于瘤旁组织,两组间差异有统计学意义(P＜0.05)；Sox2在高分期肿瘤(Ⅲ～Ⅳ期)中的表达水平高于低分期肿瘤(Ⅰ～Ⅱ期),其mRNA相对表达量分别为0.0284±0.0087和0.0135±0.0075,差异有统计学意义(P＜0.05)；且未经化疗的肿瘤其Sox2的表达水平0.0284±0.0087高于经过化疗肿瘤的0.0076±0.0022,差异有统计学意义(P＜0.05).Sox2在神经母细胞瘤组织中的表达水平与患儿性别、年龄、肿瘤部位、大小、病理分型等参数无相关性(均P＞0.05).结论 Sox2在神经母细胞瘤中表达明显增高,且与其临床分期相关,提示Sox2可能参与神经母细胞瘤的发生和发展,化疗药物对其表达有抑制作用,其机制需值得进一步研究.
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胚胎干细胞因子Sox2对神经母细胞瘤Ⅰ型细胞增殖分化的影响
目的 探讨胚胎干细胞因子Sox2对神经母细胞瘤Ⅰ型细胞增殖分化的影响.方法 应用慢病毒载体介导RNA干扰处理Ⅰ型细胞BE(2)-C构建Sox2低表达细胞株,采用CCK-8活细胞数检测,分析Sox2对BE(2)-C细胞增殖能力的影响.维甲酸和5-溴2'-去氧尿甙干预BE(2)-C细胞诱导分化后采用Western blot检测细胞标志蛋白的表达差异,分析Sox2对BE(2)-C细胞分化能力的影响.结果 CCK-8活细胞数检测显示72 h时Sox2 shRNA组的细胞AV值(0.72±0.18)低于空白对照组(1.24±0.21)和阴性对照组(1.16±0.26),差异有统计学意义(P＜0.05).RA或BrdU诱导分化后Western blot检测细胞标志蛋白(Peripherin、NF-68、Vimentin、S-100)显示,经RA或BrdU诱导分化的Sox2 shRNA组细胞其标志蛋白表达量均高于经同种药物诱导的空白对照组(BE(2)-C)和阴性对照组(Sox2 shRNA空载体)细胞,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Sox2促进神经母细胞瘤Ⅰ型细胞的增殖,但抑制其向低度恶性细胞分化,提示Sox2有望成为神经母细胞瘤基因治疗的新靶点.
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SOX2与胶质瘤相关研究
性别决定区Y框蛋白(SOX)是具有活性的转录因子,尤其SOX2,能维持包括脑组织在内的人体多种组织肿瘤干细胞处于未分化状态.胶质瘤是常见的成人原发性颅内恶性肿瘤,SOX2在胶质瘤干细胞的发生和发展中起重要作用.因此,SOX2在胶质瘤的临床治疗中具有较好的研究前景.本文将概括SOX2与胶质瘤的关系,并总结以SOX2为靶点的胶质瘤相关治疗策略.
