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过表达钾离子通道调节蛋白抑制肝癌细胞增殖、迁移及侵袭
目的:检测钾离子通道调节蛋白(K+ channel regulator,KCNRG)在肝癌细胞中的表达情况,并探讨上调KCNRG基因表达对肝癌细胞增殖、克隆形成、迁移、侵袭和上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)能力的影响.方法:首先采用RT-PCR、实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测人正常肝上皮永生化细胞THLE-3和肝癌细胞BEL-7402、SMMC-7721、MHCC-LM3及SK-HEP1中KCNRG mRNA和蛋白的表达水平.然后采用脂质体转染法将KCNRG过表达质粒KCNRG-pcDNA3.1(+)转染至肝癌细胞SK-HEP1和MHCC-LM3中,同时设置未转染的空白对照组和转染空载体的阴性对照组.采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法验证KCNRG过表达效果后,分别采用细胞计数法、克隆形成实验和Transwell小室法分别检测肝癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力的变化情况,并采用蛋白质印迹法检测肝癌细胞中EMT标志分子的表达变化.结果:肝癌细胞中KCNRG mRNA和蛋白表达水平明显低于人正常肝上皮永生化细胞THLE-3 (P值均＜0.01),尤以肝癌细胞SK-HEP1和MHCC-LM3中的表达水平低.KCNRG过表达质粒转染后,肝癌细胞SK-HEP1和MHCC-LM3中KCNRG基因表达水平明显上调(P值均＜0.01),N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达水平明显下调(P值均＜0.01),E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平明显上调(P值均＜0.01),并且2种肝癌细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力均被明显抑制(P值均＜0.01).结论:肝癌细胞中KCNRG基因表达水平明显低于正常肝细胞.KCNRG基因表达上调可以抑制肝癌细胞的增殖、克隆形成、迁移、侵袭及EMT.
